RNA干扰Bloom解旋酶基因表达对人前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响

作     者：罗霂榃 

作者单位：贵州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：许厚强

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：Bloom解旋酶 RNAi 人前列腺癌PC3细胞 增殖 迁移 侵袭 凋亡 

摘      要：RecQ解旋酶家族是DNA解旋酶家族中高度保守的家族,在DNA复制、重组、修复、转录等细胞代谢和稳定遗传中起到至关重要的作用。Bloom解旋酶是RecQ家族中的一个重要的组成成员,它参与了DNA的复制、重组等细胞代谢过程,在维持端粒和染色体的稳定性中也发挥着重要作用,并且其能够与多种蛋白因子发生相互作用,影响与之作用的因子的功能。Bloom解旋酶基因的突变可导致Bloom综合征的发生,Bloom综合征是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者不仅遗传不稳定,并且易患多种类型癌症。在DNA修复和细胞凋亡过程中,涉及到对DNA损坏和使复制叉停止的细胞应答。对DNA修复因子-BLM解旋酶的特异性抑制作用可能缓解癌细胞的高增殖率,暗示这种酶可能作为抗癌药物作用的分子靶标。本论文构建了Bloom解旋酶基因的RNA干扰载体,研究了其载体对人类前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响,这可能为人类前列腺癌的靶向基因治疗提供新思路,相关研究结果如下:1.构建了Bloom解旋酶基因的RNAi载体,经转化大肠杆菌感受态细胞克隆该载体,琼脂糖凝胶电泳和DNA测序证实了构建载体正确2.将构建的载体通过脂质体法转染进人前列腺癌PC3细胞中,转染一定时间后,提取细胞总RNA,反转录成cDNA,提取细胞总蛋白。用cDNA做模板进行荧光定量PCR实验,用定量后的总蛋白做模板进行蛋白质印迹(western-blot)实验。从基因和蛋白水平证明了该载体能够有效抑制Bloom解旋酶的表达。3.MTT、划痕实验、transwell小室实验检测、Hoechst/PI双染实验证明分别证明了Bloom解旋酶的表达被抑制后,人类前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移、侵袭能力均受到抑制,而PC3细胞的凋亡能力加强。