人前列腺癌PC3细胞Bloom解旋酶基因干扰载体的构建

作     者：罗霂榃 许厚强 刘忠伟 段志强 赵佳福 吴萍 陈福 Luo Mutan;Xu Houqiang;Liu Zhongwei;Duan Zhiqiang;Zhao Jiafu;Wu Ping;Chen Fu

作者机构：贵州大学生命科学学院贵阳550025 贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵阳550025 贵州大学农学院贵阳550025 

出 版 物：《中国细胞生物学学报》 (Chinese Journal of Cell Biology)

年 卷 期：2015年第37卷第11期

页      面：1497-1502页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(批准号:700703131123) 贵州省国际合作项目(批准号:黔科合外G字7008号)资助的课题~~ 

主　　题：RNAi 前列腺癌PC3细胞 Bloom解旋酶 

摘      要：通过RNAi技术干扰人前列腺癌PC3细胞Bloom(BLM)解旋酶基因的表达。实验前期根据BLM解旋酶基因序列设计并合成两对sh RNA,插入到CMV-cop GFP-T2A-Puro-H1-mcs载体,构建针对BLM解旋酶基因的重组干扰载体CMV-cop GFP-T2A-Puro-H1-mcs-BLM1、CMV-cop GFPT2A-Puro-H1-mcs-BLM2。经测序载体构建成功后,用脂质体将所构建的载体及阴性对照载体转染前列腺癌PC3细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测转染细胞的BLM解旋酶表达情况。检测结果显示,成功构建了BLM解旋酶RNAi真核表达载体;利用脂质体转染PC3细胞后,荧光定量PCR和Western blot鉴定结果表明,BLM解旋酶的表达水平显著降低,即Bloom RNAi真核表达载体在m RNA和蛋白质水平阻断了BLM解旋酶的表达。