检索结果-南通市图书馆

b群脑膜炎奈瑟菌NspA核酸疫苗的免疫活性及保护作用的初步研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

B群脑膜炎奈瑟菌NspA核酸疫苗的免疫活性及保护作用的初步研究

作者：邓苏宏南华大学

学位级别：硕士

目的：扩增b群脑膜炎奈瑟菌表面蛋白A（NspA）基因，构建pcDNA3.1(+)/NspA真核重组载体，通过肌注和滴鼻法免疫雌性bALb/c小鼠，观察小鼠体内产生体液免疫和细胞免疫应答水平，计算疫苗的免疫保护率，为研究b群脑膜炎奈瑟菌核酸疫苗提... 详细信息

目的：扩增b群脑膜炎奈瑟菌表面蛋白A（NspA）基因，构建pcDNA3.1(+)/NspA真核重组载体，通过肌注和滴鼻法免疫雌性bALb/c小鼠，观察小鼠体内产生体液免疫和细胞免疫应答水平，计算疫苗的免疫保护率，为研究b群脑膜炎奈瑟菌核酸疫苗提供相关的实验依据。方法：制备去内毒素的pcDNA3.1(+)/NspA真核重组载体，通过Lip2000转染试剂在RAW264.7和COS-7细胞中进行转染，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测nspa基因mRNA的转录水平，通过免疫组化法检测NspA基因在真核细胞中的表达水平。通过肌注和滴鼻的方式免疫3-4周龄的雌性bALb/c小鼠，采用间接ELISA法检测小鼠血清中产生的特异性IgG和生殖道黏膜灌洗液中sIgA抗体水平， ELISA双抗体夹心法检测免疫小鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4的水平，CCK8法检测脾淋巴细胞增殖反应。构建脑膜炎球菌动物感染模型，观察核酸疫苗对实验小鼠的免疫保护率。结果：（1）构建的pcDNA3.1(+)/NspA真核重组载体经公司测序及酶切鉴定结果正确。（2） pcDNA3.1(+)/NspA真核重组载体能有效地在真核细胞中进行转录和表达。(3)核酸疫苗通过滴鼻和肌注法免疫小鼠后，能够刺激小鼠体内产生特异性抗NspA的抗体，并且抗体水平随免疫时间递增呈上升趋势：①在免疫后第6周，滴鼻法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组的小鼠生殖道灌洗液中特异性sIgA水平明显高于pcDNA3.1(+)和PbS组（P0.05），pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组抗体效价为1:3000;肌注法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组的小鼠生殖道灌洗液中特异性sIgA水平明显高于pcDNA3.1(+)和PbS组（P0.05），pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组抗体效价为1:1875;②在免疫后第6周，滴鼻法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组的小鼠血清中特异性IgG水平明显高于pcDNA3.1(+)和PbS组（P0.05），pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组抗体效价为1:3750;肌注法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组的小鼠血清中特异性IgG水平明显高于pcDNA3.1(+)和PbS组（P0.05），pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组抗体效价为1:5000;③经滴鼻和肌注免疫的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组小鼠脾淋巴细胞上清液中的IL-4、IFN-γ含量明显高于pcDNA3.1(+)和PbS组（P0.05）;④肌注法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组的脾淋巴细胞刺激指数（SI，1.45±0.03）显著高于、PbS（0.30±0.01）与pcDNA3.1（+）组（0.44±0.02），（PbS（0.34±0.05）与pcDNA3.1（+）组（0.51±0.04），（P0.05）;(4)核酸疫苗的免疫保护效果：①肌注法： pcDNA3.1(+)/NspA+CpG、pcDNA3.1(+)/NspA组在72h内的存活率分别为90%、80%;pcDNA3.1(+)组和PbS组24h内的存活率分别为30%和20%，48h内的存活率均为0;②滴鼻法：pcDNA3.1(+)/NspA+CpG、pcDNA3.1(+)/NspA组在72h内的存活率分别为80%、70%，pcDNA3.1(+)组和PbS组24h内的存活率分别为30%和20%，48h内的存活率均为0。结论：（1）核酸疫苗pcDNA3.1(+)/NspA可诱导小鼠产生较强的特异性体液免疫和细胞免疫应答;（2）核酸疫苗对b群脑膜炎球菌感染的实验小鼠具有一定的免疫保护作用，肌注途径的免疫保护作

关键词： b群脑膜炎奈瑟菌奈瑟菌表面蛋白A(NspA) 核酸疫苗免疫活性免疫保护

b群脑膜炎奈瑟菌重组NspA蛋白疫苗的免疫活性及其对小鼠的免疫保护作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

B群脑膜炎奈瑟菌重组NspA蛋白疫苗的免疫活性及其对小鼠的免疫保...

作者：应上云南华大学

学位级别：硕士

目的：探讨b群脑膜炎奈瑟菌NspA原核重组蛋白诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平，初步评价rNspA对实验小鼠的免疫保护作用，为研制b群脑膜炎奈瑟菌蛋白疫苗提供相关实验依据。方法：以b群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DN... 详细信息

目的：探讨b群脑膜炎奈瑟菌NspA原核重组蛋白诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平，初步评价rNspA对实验小鼠的免疫保护作用，为研制b群脑膜炎奈瑟菌蛋白疫苗提供相关实验依据。方法：以b群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板，构建原核重组表达载体pGEX-6P-1/NspA，大量表达重组蛋白，经GST亲和层析纯化柱pH梯度洗脱，收集重组蛋白，采用Western-blot法鉴定。腹腔途径免疫雌性bALb/c小鼠，采用间接ELISA法检测免疫小鼠生殖道黏膜分泌液中抗NspA的sIgA抗体水平和血清中抗NspA的IgG及其亚类抗体水平，ELISA双抗体夹心法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ水平，CCK8法检测脾淋巴细胞增殖反应。按比例混合MC58菌液、免疫血清及乳兔补体，测定血清抗体体外杀菌滴度。构建小鼠感染动物模型，观察和计算rNspA对实验小鼠的免疫保护率。结果：构建的原核表达载体pGEX6p-1/NspA，经双酶切和测序鉴定正确。通过优化诱导表达条件，rNspA能在培养上清中以可溶性状态表达，表达产物采用GST树脂纯化后经Western-blot鉴定，证实该目的蛋白的存在。腹腔途径免疫雌性bALb/c小鼠，rNspA组小鼠生殖道黏膜产生的特异性sIgA和血清特异性IgG及IgG亚类抗体水平均呈上升趋势，rNspA组小鼠生殖道灌洗液中特异性sIgA及小鼠血清中总IgG、IgG1、IgG2a、IgG3在第6周时均达到最大值，抗体效价分别为1:2800、1:8800、1:7000、1:5120和1:2800;rNspA免疫组血清IgG2a/IgG1的比值，在免疫的2w、4w、6w、8w时分别为0.795、0.637、0.710和0.624，比值均小于1。INF-γ、IL-4的含量在第6周达到高峰，分别为300.0pg/mL、229.0pg/mL;rNspA组脾淋巴细胞刺激指数（SI）为1.61，明显高于GST和PbS对照组（P菌率达50%以上;rNspA免疫组小鼠感染MC58后72h内，小鼠的存活率高达100%，而对照组（GST组、PbS组）小鼠感染MC58后72h后的存活率为0。结论： 1.成功构建了b群脑膜炎奈瑟菌表面蛋白A原核表达重组载体pGEX6p-1/NspA。 2. rNspA能诱导小鼠产生较高水平的体液免疫应答和细胞免疫应答水平，且以Th2倾向性体液免疫应答为主;可在黏膜局部诱生较高水平的特异性sIgA抗体。 3. rNspA对感染b群脑膜炎奈瑟菌的实验小鼠具有较强的免疫保护作用，免疫血清体外在补体介导下具有一定杀菌活性。

关键词： b群脑膜炎奈瑟菌奈瑟菌表面蛋白A 重组蛋白免疫活性免疫保护

b群脑膜炎奈瑟菌NMb0315核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合免疫效果初探

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

B群脑膜炎奈瑟菌NMB0315核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合免疫效果初探

作者：宋迎春南华大学

学位级别：硕士

[目的]初步探讨和评价NMb0315核酸疫苗、重组蛋白疫苗及核酸疫苗+重组蛋白疫苗联合免疫诱导小鼠产生特异性体液/细胞免疫应答水平及其免疫保护效果,为研制高效b群流脑疫苗提供可靠实验依据。[方法]1.对本课题组保存的真核表达重组质粒pc... 详细信息

[目的]初步探讨和评价NMb0315核酸疫苗、重组蛋白疫苗及核酸疫苗+重组蛋白疫苗联合免疫诱导小鼠产生特异性体液/细胞免疫应答水平及其免疫保护效果,为研制高效b群流脑疫苗提供可靠实验依据。[方法]1.对本课题组保存的真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)/NMb0315进行鉴定后,大量制备并纯化;肌肉注射免疫雌性bALb/c小鼠,采用间接ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性IgG、生殖道黏膜分泌物中特异性s IgA抗体水平及免疫小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4含量,CCK8法测定小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数(SI);2.对本课题组保存的含原核重组质粒pET-30a/NMb0315的*** bL21诱导表达重组蛋白;腹腔注射免疫雌性bALb/c小鼠,分析其诱导的体液免疫和细胞免疫应答水平。3.大量制备NMb0315核酸疫苗和重组蛋白疫苗,采用核酸初免-蛋白加强(DNA prime-protein boost)方法,联合免疫雌性bALb/c小鼠,测定特异性体液/细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效价,观察联合免疫对感染b群脑膜炎球菌小鼠的免疫保护效果。[结果]***0315核酸疫苗具有良好的免疫原性,免疫小鼠血清特异性Ig G水平及生殖道黏膜sIg A水平随免疫时间呈上升趋势,免疫后第八周抗体效价分别为1:45,000和1:30,000,明显高于对照组PbS、pcDNA3.1(+)、CpG(Pbs、pcdna3.1(+)、cpg(pbs和fa对照组(pb和igg3水平及生殖道灌洗液中特异性siga水平在第八周达到峰值,抗体效价分别为1:150,000、1:70,000、1:50,000、1:22,000、1:45,000、1:30,000,脾淋巴细胞诱生的il-4含量为219.58±20.01pg/ml,上述与体液免疫相关指标均较单一重组蛋白疫苗组低(p菌效价分别为1:64、1:128和1:128,72小时内对实验小鼠的免疫保护率分别为70%、95%和80%。4.免疫2、4、6、8w时,核酸疫苗组、重组蛋白疫苗组和联合免疫疫苗组igg2a/igg1比值均小于1。[结论]***0315疫苗诱导体液免疫(包括黏膜免疫)的效果为:重组蛋白疫苗组>联合免疫疫苗组>核酸疫苗组;诱导细胞免疫的效果为:联合免疫疫苗组>核酸疫苗组>重组蛋白疫苗组;***0315疫苗72小时内对实验小鼠的免疫保护效果为:重组蛋白疫苗组>联合免疫疫苗组>核酸疫苗组。

关键词： b群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMb0315 核酸疫苗蛋白疫苗联合免疫效果

b群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMb0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作...

作者：李开铭南华大学

学位级别：硕士

[目的]构建b群脑膜炎奈瑟菌pc DNA3.1(+)/NMb0315真核表达重组载体,免疫雌性bALb/c小鼠,检测其诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效果及免疫保护作用,初步探讨pc DNA3.1(+)/NMb0315核酸疫苗的免疫活性... 详细信息

[目的]构建b群脑膜炎奈瑟菌pc DNA3.1(+)/NMb0315真核表达重组载体,免疫雌性bALb/c小鼠,检测其诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效果及免疫保护作用,初步探讨pc DNA3.1(+)/NMb0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护效果,为研制一种新的预防b群流脑的核酸疫苗提供可靠的实验依据。[方法]以b群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板,PCR扩增NMb0315基因,克隆至pc DNA3.1(+)载体中,经bam H I和Xho I双酶切及测序鉴定重组载体。将构建好的pc DNA3.1(+)/NMb0315重组载体经脂质体转染COS-7细胞和RAW264.7细胞,采用免疫组织化学和Western blot法检测重组蛋白在真核细胞中的表达,RT-q PCR法检测NMb0315基因m RNA的相对表达水平。大量提取重组质粒,肌肉或腹腔皮下注射法免疫雌性bALb/c小鼠,间接ELISA法检测核酸疫苗免疫小鼠血清中抗NMb0315特异性总Ig G及其亚类抗体水平、小鼠生殖道黏膜分泌物中抗NMb0315特异性s Ig A抗体水平及经pc DNA3.1(+)/NMb0315刺激后小鼠脾淋巴细胞上清液中IFN-γ、IL-4水平,CCK8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数(SI);按一定比例混合乳兔补体、免疫血清及生长至对数期的MC58菌液,测定免疫血清体外杀菌效价;观察pc DNA3.1(+)/NMb0315核酸疫苗对感染b群脑膜炎奈瑟菌雌性bALb/c小鼠的免疫保护效果。[结果]成功构建的真核表达载体pc DNA3.1(+)/NMb0315能够在真核细胞中有效转录和表达。pc DNA3.1(+)/NMb0315核酸疫苗具有良好的免疫原性,能诱导小鼠产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性Ig G、Ig G1、Ig G2a、Ig G3、Ig G2b和生殖道黏膜特异性s Ig A,免疫后第6周抗体效价分别为1:50,000、1:40,000、1:35,000、1:30,000、1:15,000和1:30,000;在核酸疫苗免疫的2、4、6周,血清Ig G2a/Ig G1的比值分别为0.775,0.744,0.614,比值均小于1。核酸疫苗也能诱导产生较高水平的细胞免疫应答,疫苗免疫第6周,小鼠脾淋巴细胞增殖反应SI值(1.87±0.124)明显高于PbS(0.68±0.132)、Cp G(0.71±0.153)和pc DNA3.1(+)(0.69±0.144)对照组(Pb0315+CPG组均明显高于PbS、Cp G和pc DNA3.1(+)对照组(P菌抗体效价为1:128,72小时内对实验小鼠的免疫保护率为70%。[结论]1.核酸疫苗pc DNA3.1(+)/NMb0315具有良好的免疫原性,能诱导实验小鼠产生高水平的体液免疫和细胞免疫;也能诱导生殖道黏膜局部产生较高水平的特异性s Ig A抗体。2.核酸疫苗pc DNA3.1(+)/NMb0315对感染b群脑膜炎奈瑟菌的bALb/c小鼠具有良好的免疫保护效果;在补体介导下,末次免疫血清在体外具有较强的杀菌活性。

关键词： b群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315 核酸疫苗免疫活性免疫保护

以重组b群脑膜炎奈瑟菌fHbP为载体的结合疫苗制备及免疫原性研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国新药杂志 2013年第7期22卷 769-775页

作者：高润光孙述学张颖周芳张景春贺梅彦王振业贾天军河北北方学院病原生物学和免疫学研究所张家口075000 北京卫信天成生物科技有限公司北京102600

目的:以重组b群脑膜炎奈瑟菌(Nesseria meningitidis,Nm)外膜蛋白fHbP(recombinant factorH binding protein,rfHbP)为载体与C群多糖(group C meningococcal polysaccharide,GCMP)共价结合制备结合疫苗并免疫小鼠,检测小鼠血清中针对b群和C群Nm的杀菌抗体,评价该重组蛋白作为结合疫苗载体的可行性及该结合疫苗对b群Nm的交叉保护性。方法:扩增fhbp并连接到pET30a(+)表达载体上,转化至大肠杆菌bL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍亲和层析柱纯化rfHbP,CNbr活化法将rfH-bP与GCMP共价结合,制备结合疫苗,免疫小鼠,间接ELISA法检测血清中GCMP抗体和rfHbP抗体滴度,TTC法检测结合物诱导的分别针对b群和C群Nm的杀菌抗体水平。结果:成功扩增fhbp并连接至pET30a(+)表达载体上,大肠杆菌中诱导表达rfHbP,纯化后与GCMP结合。结合物免疫小鼠后,检测到的针对GCMP的IgG抗体滴度与GCMP组比较有明显加强效应;三针免疫后,针对C群Nm的杀菌抗体滴度高于GCMP对照组,有统计学意义(Pb群Nm的杀菌抗体滴度与rfHbP对照组间无统计学意义(P>0.05);两组结合物诱导的分别针对b群Nm CMCC29361株和ATCC700111株的杀菌抗体滴度间无统计学意义(P>0.05)。结论:结合疫苗免疫小鼠后检测到的针对C群Nm的杀菌抗体高于单独GCMP组,证明该重组蛋白可作为结合疫苗的载体蛋白;且在结合过程中较好地保留了蛋白的免疫原性,对b群Nm有良好的交叉保护作用。

关键词： b群脑膜炎奈瑟菌结合疫苗 H因子结合蛋白

不同信号肽对重组b群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白表达的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2017年第2期30卷 141-145,149页

作者：宫悦陈晨李亚东张辉李智华肖红剑毕研伟寸韡中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨不同信号肽对重组b群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白(factor H-binding protein,f HbP)表达的影响。方法运用PCR方法将b群脑膜炎奈瑟菌f HbP原始信号肽分别替换为大肠埃希菌主要外膜脂蛋白(major outer membrane lipoprotein,MLP)... 详细信息

目的探讨不同信号肽对重组b群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白(factor H-binding protein,f HbP)表达的影响。方法运用PCR方法将b群脑膜炎奈瑟菌f HbP原始信号肽分别替换为大肠埃希菌主要外膜脂蛋白(major outer membrane lipoprotein,MLP)、脂蛋白-28(lipoprotein-28,LP)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)P4外膜蛋白信号肽,并将其分别连接至p ET-30a表达载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达水平。结果替换了P4、LP和MLP信号肽的重组b群脑膜炎奈瑟菌f HbP表达量较带原始信号肽的b群脑膜炎奈瑟菌f HbP相比,分别提高了2.68、1.94和2.91倍。结论替换MLP信号肽对重组b群脑膜炎奈瑟菌f HbP蛋白表达的影响最大,为提高b群脑膜炎奈瑟菌f HbP表达量的研究工作提供了新思路。

关键词： b群脑膜炎奈瑟菌 H因子结合蛋白信号肽原核表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

湖南省b群脑膜炎奈瑟菌药物敏感性及分型

中国公共卫生 2011年第12期27卷 1568-1569页

作者：夏昕湛志飞刘运芝覃迪高立冬戴德芳张红湖南省疾病预防控制中心微生物检验科湖南省微生物分子生物学重点实验室湖南长沙410005

近年来,湖南省流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）流行以C群脑膜炎奈瑟菌（Nm）为主〔1〕,2009年2月,首次从流脑患者身上分离出b群脑膜炎奈瑟菌,2010年在健康人群流脑咽拭子中,同时分离到4株b群脑膜炎奈瑟菌。为掌握湖南省b群脑膜炎奈瑟菌的... 详细信息

近年来,湖南省流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）流行以C群脑膜炎奈瑟菌（Nm）为主〔1〕,2009年2月,首次从流脑患者身上分离出b群脑膜炎奈瑟菌,2010年在健康人群流脑咽拭子中,同时分离到4株b群脑膜炎奈瑟菌。为掌握湖南省b群脑膜炎奈瑟菌的分子生物学特征,为有效的预防和控制其流行提供依据,

关键词： b群脑膜炎奈瑟菌药物敏感性试验聚合酶链反应脉冲场凝胶电泳分子生物学分型

以重组b群脑膜炎奈瑟菌fHbP为载体的结合疫苗的制备及免疫原性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

以重组B群脑膜炎奈瑟菌fHBP为载体的结合疫苗的制备及免疫原性研究

作者：高润光河北北方学院

学位级别：硕士

脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis, Nm)是专一人致病的革兰阴性双球菌,依据荚膜多糖的化学和免疫学性质,可分为13个血清型(A、b、C、D、H、I、K、L、X、Y、Z、29E、W135)。95%以上的病例为A、b、C、Y和W135五个血清型所致。尽管A、C... 详细信息

脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis, Nm)是专一人致病的革兰阴性双球菌,依据荚膜多糖的化学和免疫学性质,可分为13个血清型(A、b、C、D、H、I、K、L、X、Y、Z、29E、W135)。95%以上的病例为A、b、C、Y和W135五个血清型所致。尽管A、C、 Y、W135群的荚膜多糖(TI-2抗原)免疫原性弱,但将其与蛋白载体结合后(转变其为TD抗原),可以诱导出满意的保护性。b群荚膜多糖是[N-乙酰神经氨酸-α-(2-8)],其免疫原性弱,且为自身抗原,即使与蛋白载体结合也不能取得良好效果。至今,外膜蛋白(outer membrane protein)疫苗是预防b群菌株暴发流行的唯一选择,但是这类疫苗有株特异性(strain specific),只对流行菌株有保护性。Nm全基因组测序后,运用反向疫苗学(reverse vaccinology)的方法,发现了数个在所有b群Nm中均较保守的蛋白,免疫原性强,且保护性明显。其中最引人注目的是fHbP(factor H binding protein)。以该蛋白为主要成分的疫苗正进行临床试验。本研究以重组b群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白fHbP为载体与C群多糖(group C meningococcal polysaccharide, GCMP)共价结合,制备结合疫苗,免疫小鼠,检测小鼠血清中针对b群和C群脑膜炎奈瑟菌的杀菌抗体,评价该重组蛋白作为结合疫苗载体的可行性及针对b群Nm的交叉保护性。研究方法是扩增fhbp并连接至(?)pET30a(+)表达载体上,转化至*** bL21(DE3), IPTG诱导表达,镍亲和层析柱纯化rfHbP, CNbr活化法将rfHbP与GCMP共价结合,制备结合疫苗,免疫小鼠,间接ELISA法检测血清中GCMP抗体和rfHbP抗体滴度,TTC法检测结合物诱导的分别针对b群和C群Nm的杀菌抗体水平。本研究成功扩增fhbp并连接至pET30a(+)表达载体上,大肠杆菌中诱导表达rfHbP,纯化后与GCMP结合。结合物免疫小鼠后,检测到的针对GCMP的IgG抗体滴度与GCMP组比较有明显加强效应;三针免疫后,针对C群Nm的杀菌抗体滴度高于GCMP对照组,有统计学意义(Pb群Nm的杀菌抗体滴度与rfHbP对照组间无统计学意义(P>0.05);两组结合物诱导的分别针对b群NmCMCC29361株和ATCC700111株的杀菌抗体滴度间无统计学意义(P>0.05)。结果显示结合疫苗免疫小鼠后检测到的针对C群Nm的杀菌抗体高于单独GCMP组,证明该重组蛋白可作为结合疫苗的载体蛋白;且在结合过程中较好地保留了蛋白的免疫原性,对b群Nm有良好的交叉保护作用。

关键词： b群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白结合疫苗 H因子结合蛋白

纳米铝辅佐的b群脑膜炎奈瑟菌0315重组蛋白疫苗免疫效果研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

纳米铝辅佐的B群脑膜炎奈瑟菌0315重组蛋白疫苗免疫效果研究

作者：吴晓霞南华大学

学位级别：硕士

[目的]初步探索氢氧化铝纳米颗粒(纳米铝)辅佐的b群脑膜炎奈瑟菌0315(Neisseria meningitides serogroup b,NMb0315)重组蛋白疫苗诱导实验小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平及其免疫保护效果,为寻找合适的rNMb0315疫苗佐剂、... 详细信息

[目的]初步探索氢氧化铝纳米颗粒(纳米铝)辅佐的b群脑膜炎奈瑟菌0315(Neisseria meningitides serogroup b,NMb0315)重组蛋白疫苗诱导实验小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平及其免疫保护效果,为寻找合适的rNMb0315疫苗佐剂、研制高效b群流脑疫苗提供实验依据。[方法]1.氢氧化铝纳米颗粒(Nanoparticles,NPs)理化特性鉴定。采用扫描电子显微镜(SEM)观察纳米铝的形貌及颗粒大小,zate电位仪测定纳米铝电势电位,bCA法测定纳米铝对rNMb0315蛋白的吸附性能。2.制备rNMb0315疫苗。培养扩增含pET-30a/NMb0315质粒的*** bL21重组菌株(本课题组构建保存),诱导表达、纯化和鉴定r NMb0315蛋白。3.检测rNMb0315疫苗的免疫活性和免疫保护效果。将所制备的纳米铝与纯化的rNMb0315蛋白以一定比例充分混合、吸附,肌注免疫雌性bALb/c小鼠,收集免疫小鼠生殖道分泌液和血清,间接ELISA法测定特异性sIgA、IgG及其亚类。末次免疫后2周,CCK-8法测定小鼠脾淋巴细胞增殖的刺激指数,ELISA法测定脾淋巴细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ含量。SbA法(serum bactericidal assay)检测实验小鼠免疫血清体外杀菌活性,观察记录r NMb0315疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。[结果]1.采用水热合成法制备的氢氧化铝纳米颗粒(纳米铝)具有良好的理化特性:径向尺寸均匀,形如棒状,径向长度约为10000nm;在ddHO及rNMb0315蛋白溶液中的zeta电位值分别为48±1mv和26±6 mv,稳定性好;且纳米铝佐剂吸附能力强,当蛋白∶纳米铝质量比为2:1时,纳米铝能完全吸附rNMb0315蛋白。2.纳米铝辅佐的rNMb0315蛋白疫苗(rNMb0315+NPs)能诱导高水平的体液免疫应答。特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和sIgA抗体效价峰值分别为1:131072、1:65536、1:32768、1:16384、1:32768和1:32768。在免疫峰值(第4、5周),血清特异性IgG2a/IgG1比值均小于1。***0315+NPs组能诱导高水平的细胞免疫应答,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数SI(1.849±0.144)明显高于r NMb0315+MPs组(1.470±0.174,Pb0315+MPs组(97.79±14.37 pg/mL,Pb0315+NPs组(185.36±31.37 pg/mL)与rNMb0315+MPs组(174.23+24.84 pg/mL)无显著性差异(P>0.05)。5.免疫第5周,r NMb0315组、rNMb0315+MPs组和rNMb0315+NPs组小鼠免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体滴度分别为1:64、1:128和1:128,致死剂量脑膜炎奈瑟菌攻击后免疫小鼠的存活率分别为65%、75%和80%。[结论]1.纳米铝辅佐的rNMb0315疫苗(rNMb0315+NPs)能诱导小鼠产生较强的体液免疫(包括黏膜免疫)和细胞免疫。2.r NMb0315+NPs疫苗免疫血清体外杀菌活性较高,对实验小鼠具有较强的免疫保护作用。

关键词： b群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMb0315 蛋白疫苗氢氧化铝纳米颗粒佐剂