B群脑膜炎奈瑟菌NMB0315核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合免疫效果初探

作     者：宋迎春 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：胡四海

授予年度：2016年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：B群脑膜炎奈瑟菌 外膜蛋白NMB0315 核酸疫苗 蛋白疫苗 联合免疫效果 

摘      要：[目的]初步探讨和评价NMB0315核酸疫苗、重组蛋白疫苗及核酸疫苗+重组蛋白疫苗联合免疫诱导小鼠产生特异性体液/细胞免疫应答水平及其免疫保护效果,为研制高效B群流脑疫苗提供可靠实验依据。[方法]1.对本课题组保存的真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)/NMB0315进行鉴定后,大量制备并纯化;肌肉注射免疫雌性BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性IgG、生殖道黏膜分泌物中特异性s IgA抗体水平及免疫小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4含量,CCK8法测定小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数(SI);2.对本课题组保存的含原核重组质粒pET-30a/NMB0315的*** BL21诱导表达重组蛋白;腹腔注射免疫雌性BALB/c小鼠,分析其诱导的体液免疫和细胞免疫应答水平。3.大量制备NMB0315核酸疫苗和重组蛋白疫苗,采用核酸初免-蛋白加强(DNA prime-protein boost)方法,联合免疫雌性BALB/c小鼠,测定特异性体液/细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效价,观察联合免疫对感染B群脑膜炎球菌小鼠的免疫保护效果。[结果]***0315核酸疫苗具有良好的免疫原性,免疫小鼠血清特异性Ig G水平及生殖道黏膜sIg A水平随免疫时间呈上升趋势,免疫后第八周抗体效价分别为1:45,000和1:30,000,明显高于对照组PBS、pcDNA3.1(+)、CpG(P联合免疫疫苗组核酸疫苗组;诱导细胞免疫的效果为:联合免疫疫苗组核酸疫苗组重组蛋白疫苗组;***0315疫苗72小时内对实验小鼠的免疫保护效果为:重组蛋白疫苗组联合免疫疫苗组核酸疫苗组。