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志贺氏毒素b亚单位在大肠杆菌细胞表面表达的研究

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中国科学（b辑） 1993年第1期23卷 61-68页

作者：苏国富 H.N.brahmbhatt K.N.Timmis 军事医学科学院生物工程研究所北京100850 National Research Centre for biotechnology Germany

本文通过寡核苷酸引导的定向诱变,将志贺氏毒素b亚单位的三个部分(Stx17b,Stx27b和Stxb)融合至暴露在细菌表面的Lamb蛋白的第153和154氨基酸之间的bamHⅠ位点。免疫印迹指出,b亚单位的三个部分作为与Lamb的融合蛋白能在大肠杆菌中表达... 详细信息

本文通过寡核苷酸引导的定向诱变,将志贺氏毒素b亚单位的三个部分(Stx17b,Stx27b和Stxb)融合至暴露在细菌表面的Lamb蛋白的第153和154氨基酸之间的bamHⅠ位点。免疫印迹指出,b亚单位的三个部分作为与Lamb的融合蛋白能在大肠杆菌中表达。间接免疫荧光和免疫电子显微镜分析表明:融合蛋白Lamb/Stx17b和Lamb/Stx27b能表达在大肠杆菌细胞表面,而融合蛋白Lamb/Stxb则不能在大肠杆菌表面表达,它聚集在细胞间质部分,对宿主细胞有毒性。将保护性抗原表达于细菌表面,这为构建预防志贺氏痢疾杆菌的菌苗后选株提供了一个新的途径。

关键词：志贺氏毒素 b亚单位大肠杆菌

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大肠杆菌生产的霍乱毒素b亚单位

中国科学（b辑） 1990年第7期 726-730页

作者：马清钧刘传暄熊凌霜于秀琴军事医学科学院生物工程研究所北京100850

应用遗传工程技术,获得一株高效表达霍乱毒素b亚单位的工程大肠杆菌菌株,该菌株在501发酵罐培养,b亚单位产量达20—40μg/ml,且能分泌至胞外。将工程菌产生的b亚单位经亲和层析纯化,获得了电泳纯制品,其分子量、N端氨基酰末端分析、抗... 详细信息

应用遗传工程技术,获得一株高效表达霍乱毒素b亚单位的工程大肠杆菌菌株,该菌株在501发酵罐培养,b亚单位产量达20—40μg/ml,且能分泌至胞外。将工程菌产生的b亚单位经亲和层析纯化,获得了电泳纯制品,其分子量、N端氨基酰末端分析、抗原性、与天然的b亚单位完全相同。工程菌产生的b亚单位具有很好的免疫原性,可用于构建防治霍乱及毒源性大肠杆菌腹泻的制剂及半抗原的载体。

关键词：大肠杆菌霍乱毒素 b亚单位

神经病理痛大鼠背根神经节细胞钙通道α1b亚单位mRNA的表达

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中华麻醉学杂志 2005年第3期25卷 211-213页

作者：罗放毕好生华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科武汉市430030

目的观察神经病理痛大鼠背根神经节细胞钙通道α1b亚单位mRNA的表达。方法SD大鼠24只,随机分为3组,神经病理痛组:行左侧L5脊神经结扎并切断建立大鼠神经病理痛模型;假手术组:暴露左侧L5脊神经,但不行结扎和切断;正常对照组:不作手术处理... 详细信息

目的观察神经病理痛大鼠背根神经节细胞钙通道α1b亚单位mRNA的表达。方法SD大鼠24只,随机分为3组,神经病理痛组:行左侧L5脊神经结扎并切断建立大鼠神经病理痛模型;假手术组:暴露左侧L5脊神经,但不行结扎和切断;正常对照组:不作手术处理,每组8只。取三组大鼠L5背根神经节,用原位杂交方法测定钙通道α1b亚单位mRNA表达。结果神经病理痛组背根神经节细胞钙通道α1b亚单位mRNA吸光度值为0.033±0.011,明显低于假手术组(0.065±0.042)和正常对照组(0.066±0.034)(Pb亚单位mRNA表达水平的下降可能是背根神经节细胞钙电流降低及兴奋性增强的原因。

关键词：背根神经节细胞神经病理痛 b亚单位钙通道 mRNA表达正常对照组原位杂交方法细胞钙电流 SD大鼠神经结扎手术处理吸光度值痛模型脊神经兴奋性左侧

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猪水肿病毒素b亚单位的表面表达

中国预防兽医学报 2002年第3期24卷 219-223页

作者：徐建生崔治中成大荣董国雄李俊宝扬州大学畜牧兽医学院动物医学系江苏扬州225009

用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从大肠杆菌PPSLT_Ⅱeb中扩增出猪水肿病素 (SLT_Ⅱe)的b亚单位基因 (slt_Ⅱeb)的 2 0 4bp的编码序列。将此PCR扩增产物按预定的阅读框架克隆进质粒表达载体PZSPAX ,并转化到大肠杆菌Hb10 1中 ,筛选到含有s... 详细信息

用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从大肠杆菌PPSLT_Ⅱeb中扩增出猪水肿病素 (SLT_Ⅱe)的b亚单位基因 (slt_Ⅱeb)的 2 0 4bp的编码序列。将此PCR扩增产物按预定的阅读框架克隆进质粒表达载体PZSPAX ,并转化到大肠杆菌Hb10 1中 ,筛选到含有slt_Ⅱeb的重组质粒PZbSPAX。将重组质粒PZbSPAX进行序列分析 ,结果表明 :重组质粒PZbSPAX中的插入序列与发表的slt_Ⅱeb是一致的 ,证明PZbSPAX就是含有slt_Ⅱeb的重组表达质粒。含有重组质粒PZbSPAX的大肠杆菌Hb10 1命名为重组大肠杆菌PZbSPAX。通过在不同温度条件下、不同培养时间情况下、不同IPTG诱导条件下 ,利用荧光抗体染色证明重组大肠PZbSPAX可表面表达预期的融合蛋白PP_SLT_Ⅱeb_SPAX ;利用SDS_PAGE、Western_blot对重组大肠杆菌PZbSPAX的表达进行了分析 ,结果表明重组大肠杆菌PZbSPAX表达的融合蛋白PP_SLT_lleb_SPAX与预期大小一致。

关键词：仔猪水肿病毒素 b亚单位表面表达传染病大肠杆菌抗原性

重组大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位的纯化及生物学活性鉴定

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第三军医大学学报 2003年第2期25卷 131-134页

作者：田文标邹全明吴超张卫军杨珺冉向阳王缚鲲第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的　纯化rLTb并对其生物学功能进行初步研究。方法　重组基因工程菌发酵后 ,以包涵体形式表达的rLTb经过洗涤、变性溶解后 ,分别采用QSepharoseTM HighPerformance阴离子交换层析和PhenylFF(highsub)疏水层析对其进行纯化并透析复性 ... 详细信息

目的　纯化rLTb并对其生物学功能进行初步研究。方法　重组基因工程菌发酵后 ,以包涵体形式表达的rLTb经过洗涤、变性溶解后 ,分别采用QSepharoseTM HighPerformance阴离子交换层析和PhenylFF(highsub)疏水层析对其进行纯化并透析复性 ,然后采用SDS PAGE和HPLC检测纯度 ,并选用ELISA、动物实验和Western blotting实验对纯化蛋白的生物学活性进行鉴定。结果　得到纯度达 97 85 %的rLTb ,复性的rLTb经检测具有良好的生物学活性。结论　得到纯度较高、生物学活性较好的rLTb 。

关键词：大肠杆菌不耐热肠毒素 b亚单位纯化生物学活性

EHEC O157：H7志贺毒素Ⅱ型A、b亚单位的表达及功能鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第1期28卷 20-23页

作者：焦永军郭喜玲史智扬曾晓燕朱进孙慧万佳艺汪华江苏省疾病预防控制中心卫生部肠道病原微生物重点实验室南京210009 南京军区军事医学研究所南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室

目的克隆、表达肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）O157：H7志贺毒素（Shigatoxin，Stx）Ⅱ型A、b亚单位，并鉴定其免疫学功能。方法从EHECO157：H7基因组中克隆编码StxⅡ型A、b亚单位的基因，经测序、酶切... 详细信息

目的克隆、表达肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）O157：H7志贺毒素（Shigatoxin，Stx）Ⅱ型A、b亚单位，并鉴定其免疫学功能。方法从EHECO157：H7基因组中克隆编码StxⅡ型A、b亚单位的基因，经测序、酶切后，导人表达载体pGEX-4T-2，转化大肠杆菌Top10F′，经诱导、纯化得到谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）-A和GST-b融合蛋白。分别用A、b亚单位融合蛋白免疫bALb／c小鼠获得高免血清，观察A、b亚单位血清对小鼠进行毒素攻击的保护作用。结果StxⅡ型A、b亚单位的GST融合蛋白获得高效表达并纯化；A、b亚单位的高免血清可以保护小鼠对致死量毒素的攻击。结论StxⅡ型A、b亚单位蛋白可以作为EHECO157：H7疫苗的候选分子，同时针对A、b亚单位蛋白的中和单抗可以对易感人群起到紧急保护作用。

关键词：肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 志贺毒素Ⅱ型A b亚单位功能鉴定

培养基和溶氧对重组霍乱毒素b亚单位产量的影响

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军事医学科学院院刊 1996年第1期20卷 49-51页

作者：方宏清冯尔玲史传英赵四清于公义马清钧军事医学科学院生物工程研究所

研究了培养基和溶氧对ＭＭ２工程菌产霍乱毒素Ｂ亚单位的影响。用正交试验获得了高产且廉价的ＹＣＰ培养基，０．０２５～０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐是霍乱毒素Ｂ亚单位高产所必需的。提高溶氧能提高产率和缩短培养时间，在５Ｌ发酵罐中培... 详细信息

研究了培养基和溶氧对ＭＭ２工程菌产霍乱毒素Ｂ亚单位的影响。用正交试验获得了高产且廉价的ＹＣＰ培养基，０．０２５～０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐是霍乱毒素Ｂ亚单位高产所必需的。提高溶氧能提高产率和缩短培养时间，在５Ｌ发酵罐中培养平均产量达９３．３ｍｇ／Ｌ。

关键词：霍乱毒素 b亚单位疫苗培养基溶氧

NF—κb亚单位p65反义脱氧寡核苷酸治疗胰腺癌的实验研究

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中华肝胆外科杂志 2009年第7期15卷 552-554页

作者：储凌霍中华谢敏潘一明朱海涛解放军第四五四医院普通外科南京市210002 南京大学医学院附属鼓楼医院普通外科

核因子-κb（NF-κb）是细胞分裂和生存的关键调节因子，参与肿瘤发生、增殖、转移等多方面的调控环节，在胰腺癌的发生、发展过程中发挥着重要作用。该实验拟采用NF—κb亚单位p65反义脱氧寡核苷酸（ASODN）体外转染人胰腺癌PANC-1细... 详细信息

核因子-κb（NF-κb）是细胞分裂和生存的关键调节因子，参与肿瘤发生、增殖、转移等多方面的调控环节，在胰腺癌的发生、发展过程中发挥着重要作用。该实验拟采用NF—κb亚单位p65反义脱氧寡核苷酸（ASODN）体外转染人胰腺癌PANC-1细胞株，以抑制NF—κb在PANC-1中的表达，研究p65 ASODN对人胰腺癌细胞增殖活性及侵袭转移能力的影响，探讨p65ASODN治疗胰腺癌的可行性。

关键词：反义脱氧寡核苷酸人胰腺癌实验研究 b亚单位 p65 NF 治疗 PANC-1

变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素b亚单位嵌合基因转基因黄瓜植株的获得及鉴定

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口腔医学研究 2016年第9期32卷 902-906页

作者：吴家媛刘建国马欣荣洪献忠吴志刚张剑梁文红遵义医学院附属口腔医院牙体牙髓病科贵州遵义563099 贵州省高等学校口腔疾病研究特色重点实验室遵义市口腔疾病研究重点实验室贵州遵义563099 中科院成都生物所四川成都610040

目的:经农杆菌介导将变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素b亚单位嵌合基因导入黄瓜,获得转基因黄瓜植株,为转基因可食防龋疫苗的研究提供实验基础。方法:利用双元载体pCAMbIA2301构建变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素b亚单位嵌合质粒(PAcA-... 详细信息

目的:经农杆菌介导将变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素b亚单位嵌合基因导入黄瓜,获得转基因黄瓜植株,为转基因可食防龋疫苗的研究提供实验基础。方法:利用双元载体pCAMbIA2301构建变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素b亚单位嵌合质粒(PAcA-ctxb)的植物表达载体p2355-PAcA-CTb;电转化法导入农杆菌EHA105;采用叶盘转化法转化黄瓜,转基因植物经过卡那霉素抗性筛选、GUS基因染色、PCR及Southern blot杂交分析检测目的基因鉴定。结果:成功得到转基因黄瓜植株,卡那霉素抗性筛选、GUS基因染色、PCR及Southern blot杂交分析检测证实目的基因PAcA-ctxb已整合至黄瓜基因组中。结论:获得了含有变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素b亚单位嵌合基因的转基因黄瓜植株,为转基因可食防龋疫苗的进一步研究提供了实验基础。

关键词：变异链球菌霍乱毒素 b亚单位转基因黄瓜农杆菌