检索结果-南通市图书馆

作者：谈军军南昌大学

学位级别：硕士

背景:小分子热休克蛋白(s Hsp)是一类分子量低于30 k D、具有DNL类型锌指结构的、且高度保守的蛋白质,可作为分子伴侣协助蛋白质运输并阻止有害蛋白质的聚集。在某些压力(如热、渗透和细胞壁合成受阻等)应激下该类蛋白在白念珠菌中的表... 详细信息

背景:小分子热休克蛋白(s Hsp)是一类分子量低于30 k D、具有DNL类型锌指结构的、且高度保守的蛋白质,可作为分子伴侣协助蛋白质运输并阻止有害蛋白质的聚集。在某些压力(如热、渗透和细胞壁合成受阻等)应激下该类蛋白在白念珠菌中的表达量明显上调,进而维持其生存能力和感染能力。因此,该类小分子热休克蛋白可作为毒力因子,促进白念珠菌形态转换、生物被膜形成、黏附能力,提示小分子热休克蛋白可能成为抗真菌药物的潜在靶点。本课题结合实验室前期结果和CGD(Candida Genome Database)数据库鉴定出白念珠菌一个新的蛋白Fmp28,其分子量为21 k D,属于s Hsp亚家族,预测是白念珠菌内一种具有分子伴侣活性的热休克蛋白。目前该蛋白在白念珠菌中的研究甚少,其是否影响白念珠菌的毒力以及相关的调控机制仍是未知的。目的:明确Fmp28分子的生物学功能,并且深入探究其作为毒力因子在白念珠菌的致病过程中的功能及分子机制。方法:1.借助同源重组遗传手段构建白念珠菌一系列的菌株如敲除株、回补株、过表达菌株以及标签菌株:以SN152为亲本株,构建敲除株fmp28Δ/Δ和标签菌株Fmp28-3HA;以fmp28Δ/Δ为亲本株,构建回补株fmp28AB和过表达菌株fmp28Δ/Δ+als3、fmp28Δ/Δ+pra1、fmp28Δ/Δ+csa1;以SN250为亲本株,构建过表达菌株fmp28、als3、pra1、csa1;2.采用以下方法确证Fmp28作为热休克蛋白分子的生物学功能:通过测定生长曲线和平板滴定实验,比较WT(SN250)、fmp28Δ/Δ、fmp28AB、fmp28生长速度差异;通过RT-q PCR和Western Blot实验,分别检测在热应激、渗透压力、细胞壁压力下fmp28的m RNA水平变化和Fmp28的蛋白表达量变化;3.采用以下方法探究白念珠菌Fmp28与致病功能之间的联系:(1)通过平板滴定实验,比较WT(SN250)、fmp28Δ/Δ、fmp28AB在30℃和37℃条件下对细胞壁干扰剂(CGR、CFW、Caspofungin)的敏感程度;(2)将WT(SN250)、fmp28Δ/Δ、fmp28AB接种于RPMI 1640和Spider液体和固体培养基进行菌丝诱导,比较37℃下Fmp28对于白念珠菌菌丝发生和延伸生长的影响;(3)将WT(SN250)、fmp28Δ/Δ、fmp28AB、fmp28菌株置于Spider液体培养基中培养,比较其黏附能力和生物被膜形成;(4)将WT(SN250)、fmp28Δ/Δ菌株与HUVEC细胞分别共孵育1 h、2h、3 h,检测37℃下Fmp28对白念珠菌对内皮细胞的黏附能力的影响;(5)通过构建小鼠系统性感染模型,比较WT(SN250)、fmp28Δ/Δ、fmp28AB菌株感染小鼠和大蜡螟后的生存曲线、小鼠肾脏和肝脏载菌量;4.采用以下方法探明白念珠菌Fmp28的致病机制:(1)将WT(SN250)、fmp28Δ/Δ接种于RPMI 1640液体培养基诱导2h,提取RNA样本后进行转录组测序分析,比较差异表达基因的表达水平变化,筛选出与生物被膜、黏附能力、毒力有关的基因,并经过RT-q PCR验证转录组分析结果;(2)比较fmp28Δ/Δ和fmp28Δ/Δ+als3、fmp28Δ/Δ+pra1、fmp28Δ/Δ+csa1的生物被膜形成差异和黏附能力差异;(3)通过构建小鼠系统性感染模型和大蜡螟模型,比较WT(SN250)、fmp28Δ/Δ、fmp28AB和fmp28Δ/Δ+als3感染小鼠和大蜡螟后的生存曲线、小鼠肾脏和肝脏载菌量、血清生化指标(UREA)、肾脏损伤分析;结果:1.本课题涉及的所有遗传重组菌株如fmp28Δ/Δ、fmp28AB、fmp28、fmp28Δ/Δ+als3、fmp28Δ/Δ+pra1、fmp28Δ/Δ+csa1、als3、pra1、csa1和Fmp28-3HA菌株均构建成功;2.生长速率测定结果显示fmp28Δ/Δ较于SN250、fmp28AB和fmp28,在37℃下表现出明显的生长缺陷(P30℃下并无生长差异;白念珠菌在受到热应激、渗透压力、细胞壁压力时,Fmp28蛋白表达量增加以及其编码基因fmp28的m RNA水平上升(P3.结果显示:(1)fmp28Δ/Δ相较于SN250和fmp28AB,在液体培养基中其菌丝长度明显缩短,在固体培养基上的菌落形态不规则,菌落中心无明显褶皱,边缘粗糙,菌丝生成较少,酵母-菌丝态转换能力明显减弱;(2)在热压力(37℃)条件下,加入外源的细胞壁扰试剂如CGR,fmp28Δ/Δ的生长缺陷更加显著,对细胞壁压力的敏感性显著增加;(3)以聚苯乙烯为黏附介质,fmp28Δ/Δ相较于SN250和fmp28AB,表现出黏附能力的明显缺陷(P<0.001);若以HUVEC细胞为黏附介质,fmp

关键词：白念珠菌 Fmp28 als3 毒力调控机制

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

白念珠菌生物膜耐药性观察及 als3基因表达与成膜相关性的初步探讨

引用

中华传染病杂志 2016年第10期34卷 603-608页

作者：邓可可邓琦张坚磊贺小圆江嫣雨天津市第一中心医院血液科 300192 天津中医药大学天津市第一中心医院检验科 300192

目的：观察临床收集的白念珠菌敏感株形成生物膜的结构、耐药性及相关基因的表达；初步探讨并筛选易于成膜的白念珠菌的基因表达。方法2015年1月至2015年12月天津市第一中心医院临床送检，血培养分离的白念珠菌共108株，选取其中唑类药... 详细信息

目的：观察临床收集的白念珠菌敏感株形成生物膜的结构、耐药性及相关基因的表达；初步探讨并筛选易于成膜的白念珠菌的基因表达。方法2015年1月至2015年12月天津市第一中心医院临床送检，血培养分离的白念珠菌共108株，选取其中唑类药物敏感株58株。用无菌体内留置导管建立白念珠菌生物膜体外模型；倒置显微镜观察白念珠菌生物膜结构；透射电子显微镜观察超微结构；微量液基稀释法 M27-A2方案行药物敏感试验；PCR 法检测白念珠菌 als3、xog 1、bgl2、efg 1等基因的表达情况。对数据进行配对 t 检验。结果倒置显微镜下观察到白念珠菌细胞沿菌丝聚集，形成不同层的膜状结构。透射电子显微镜下生物膜形成后白念珠菌细胞膜增厚、线粒体增多、细胞活性增加。白念珠菌生物膜形成后对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑耐药；而对棘白菌素类药物卡泊芬净、米卡芬净的抑制50％受试菌所需最低抑菌浓度（MIC50）也有不同程度的增加，但未到达耐药。als3基因表达在形成生物膜前的菌株之间存在差异：als3高表达的白念珠菌易于形成生物成膜（t＝3．645，P 〈0．01），成膜后表达下降（t＝2．491，P ＝0．013）。生物膜形成后 efg 1、bg 1和 xog 基因表达均降低（均 P 〈0．05），但成膜与否的培养前白念珠菌表达差异无统计学意义（P 〉0．05）。结论白念珠菌生物膜形成后，对唑类抗真菌药物耐药，而对棘白菌素类药物保持敏感；白念珠菌 als3基因表达的差异可以作为筛选易于成膜的白念珠菌的指标。

关键词：念珠菌,白色生物膜抗药性基因表达谱 als3

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

凝集素样黏附素3基因表达水平与小鼠体内白念珠菌生物膜形成的相关性研究

引用

中华传染病杂志 2017年第5期35卷 294-298页

作者：邓可可邓琦张坚磊陈锦艳江嫣雨邢艺天津中医药大学研究生院 300193 天津市第一中心医院血液科天津市第一中心医院检验科

目的探讨凝集素样黏附素3（als3）基因表达水平与小鼠体内白念珠菌生物膜形成的相关性。方法实时定量PCR法检测2016年2月至2016年8月天津市第一中心医院临床送检的白念珠菌55株，依als3基因表达水平分为高、低als3基因表达组。C57小鼠3... 详细信息

目的探讨凝集素样黏附素3（als3）基因表达水平与小鼠体内白念珠菌生物膜形成的相关性。方法实时定量PCR法检测2016年2月至2016年8月天津市第一中心医院临床送检的白念珠菌55株，依als3基因表达水平分为高、低als3基因表达组。C57小鼠30只，根据随机数字表法分为高表达组15只、低表达组10只和空白对照组5只，采用腹腔埋置静脉导管和腹腔注射白念珠菌法建立白念珠菌生物膜动物模型；饲养2周后取出导管，倒置显微镜观察白念珠菌成膜情况；透射电子显微镜观察超微结构；导管冲洗干净后观察其生长情况；实时定量PCR法分别于导管取出后12、24和48 h时检测als3基因表达情况。计量资料行t检验，率的计较行卡方检验。结果体外实验高表达组菌株有11株（11/15）形成生物膜，低表达组仅有1株（1/10）形成生物膜，两组比较差异有统计学意义（χ2＝9.64，P〈0.05）。小鼠体内实验，als3基因高表达组2只小鼠死亡，8株（8/13）形成生物膜，低表达组仅2株（2/10）形成生物膜，两组比较差异有统计学意义（χ2＝4.02, P〈0.05）。透射电子显微镜下高表达组白念珠菌细胞膜增厚、线粒体增多。als3基因高表达组导管取出培养，9株（9/13）有菌落生长，低表达组5株（5/10）有菌落生长，两组比较差异无统计学意义（χ2＝0.99, P〉0.05）。als3基因高表达组的白念珠菌als3基因表达在生物膜形成过程中逐渐下降，而低表达组的表达变化不明显，两组各时间的als3基因表达比较差异均有统计学意义（t值分别为8.7、10.3和9.2，均P〈0.01）。结论als3基因高表达的白念珠菌更易于体内形成生物膜。

关键词：念珠菌,白色生物膜小鼠模型基因表达 als3

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

白念珠菌als3、SSA1基因表达在念珠菌性阴道炎免疫机制中的作用

引用

中国真菌学杂志 2019年第2期14卷 65-69页

作者：高盈王琼梁官钊佘晓东史冬梅沈永年苏晓红李冬梅刘维达中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病重点分子生物学实验室南京210042 济宁市第一人民医院皮肤科济宁272001 Department of Microbiology&Immunology Georgetown University Medical Center

目的探讨白念珠菌als3、SSA1基因缺失对阴道上皮细胞激发免疫反应的作用。方法培养白念珠菌野生株及als3、SSA1基因敲除株(SC5314、Δals3、Δssa1),对其进行形态测定。按不同MOI感染人阴道上皮细胞系VK2/E6E7细胞,通过台盼蓝染色观察... 详细信息

目的探讨白念珠菌als3、SSA1基因缺失对阴道上皮细胞激发免疫反应的作用。方法培养白念珠菌野生株及als3、SSA1基因敲除株(SC5314、Δals3、Δssa1),对其进行形态测定。按不同MOI感染人阴道上皮细胞系VK2/E6E7细胞,通过台盼蓝染色观察和乳酸脱氢酶(LDH)活性检测,评价不同MOI白念珠菌对上皮细胞的损伤作用;使用酶联免疫吸附试验(ELISA)评估感染过程中炎性细胞因子及趋化因子在共培养上清中的差异。结果 als3基因的缺失对白念珠菌芽管长度影响差异无统计学意义,而SSA1基因的缺失与其他两个菌株相比芽管长度减少约30%～40%(P3株菌在感染上皮细胞时,其细胞损伤能力均与菌载量成正比;与野生型相比,Δssa1突变体在相同比率感染上皮细胞时,细胞损伤能力明显降低,且差异有统计学意义(Pals3突变株影响较小,甚至略微升高。检测炎性细胞因子及趋化因子发现,突变株在诱导上皮细胞产生促炎因子及趋化因子(GM-CSF、G-CSF、IL-1α、IL-8)的能力上明显减弱,差异均有统计学意义(Pals3和SSA1基因表达在阴道上皮细胞抗白念珠菌感染的局部免疫应答过程中可能起到重要作用,且SSA1基因表达意义更大。

关键词：阴道上皮细胞白念珠菌 als3 SSA1 免疫

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

柑橘铝毒响应因子als3和CAD互作蛋白及表达模式分析

柑橘铝毒响应因子ALS3和CAD互作蛋白及表达模式分析

引用

作者：吴燕美福建农林大学

学位级别：硕士

柑橘属于亚热带常绿果树,是我国重要的经济果树之一,主要种植于多为酸性土壤的热带、亚热带和温带地区,容易遭受铝(Al)胁迫危害。通过前人研究报道及我们课题组前期蛋白质组学的研究,发现铝敏感蛋白3(als3)和肉桂醇脱氨酶(CAD)是柑橘根... 详细信息

柑橘属于亚热带常绿果树,是我国重要的经济果树之一,主要种植于多为酸性土壤的热带、亚热带和温带地区,容易遭受铝(Al)胁迫危害。通过前人研究报道及我们课题组前期蛋白质组学的研究,发现铝敏感蛋白3(als3)和肉桂醇脱氨酶(CAD)是柑橘根系中Al胁迫响应的两个关键蛋白,目前对于Al胁迫下als3和CAD这两个蛋白的作用机理尚未清楚。本研究以耐铝的雪柑和不耐铝的酸柚为材料,研究了Al毒下雪柑和酸柚生物量、光合速率、根系木质素含量等生理指标的变化;利用酵母双杂交试验筛选als3和CAD的互作蛋白,并利用双分子荧光互补(BiFC)、Western杂交和RT-qPCR等技术进一步验证候选互作蛋白的亚细胞定位和表达模式。得到的主要研究结果如下:(1)Al胁迫通过增加柑橘根系活性氧胁迫和木质化进而影响雪柑和酸柚的生长,研究结果表明Al毒害下,酸柚和雪柑的Fv/Fm和Fv’/Fm’值、ETR值均下降,而qNP、NPQ值增加,说明Al毒下雪柑和酸柚的光能利用率较低;此外Al处理增加了雪柑和酸柚根系的HO和木质素含量,与对照相比,酸柚根系的生物量明显下降且根系稀疏,根系积累大量的Al。这可能是Al毒害增加了雪柑和酸柚根部细胞壁中木质素的含量,增加根系积累Al,限制根部细胞的伸长从而损害根系抑制植物生长的原因。(2)以雪柑和酸柚根系cDNA为模板,通过RT-qPCR分析als3和CAD在转录水平的表达变化,并利用Western Blotting分析柑橘根系als3在Al处理前后的蛋白表达情况。结果表明,Al处理上调雪柑和酸柚中CAD的基因表达量;Al处理下雪柑和酸柚中的als3基因表达量和蛋白表达量均上调。(3)酵母双杂试验获得了15个与als3互作的蛋白,11个与CAD互作的蛋白。通过BiFC试验排除酵母双杂中的假阳性,进一步筛选验证获得6个与als3互作的蛋白,7个与CAD互作的蛋白。与als3互作的分别是谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、V-ATP酶、质膜水通道蛋白PIPs(PIP2)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(UCT13)、假定的二氰氨基蓝铜蛋白(DCBC)、假定蛋白OSJNBb0071O21.22(UP2);与CAD互作的是GST、V-ATP酶、细胞色素P450蛋白、als3、PIP2、假定蛋白SB01G006870(UP1)和UP2。其中GST、V-ATPase、PIP2、UP2均与als3和CAD互作。RT-qPCR分析表明这些互作蛋白的基因表达量主要在Al处理下酸柚根系中上调表达,而在雪柑中变化不明显。总之,本研究从生理生化和分子层面探讨Al毒害对柑橘生长、根系木质素累积、Al胁迫相关蛋白als3和CAD互作蛋白及其调控机制,研究结果为进一步分析柑橘耐铝机制提供了候选蛋白/基因,为柑橘高产优质栽培提供科学依据。

关键词：柑橘铝胁迫 als3 CAD 酵母双杂交

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

白鲜皮提取物体外抗白念珠菌生物膜作用及相关基因的研究

引用

中华中医药学刊 2015年第5期33卷 1089-1092页

作者：谈潘莉曹毅夏永良浙江中医药大学附属第一医院浙江杭州310006

目的:研究白鲜皮提取物在体外对白念珠菌生物膜及相关基因的影响。方法:M27-A2测定白鲜皮提取物对白念珠菌的最小抑菌浓度(MIC);XTT法评价白鲜皮提取物对白念珠菌生物膜形成及细胞黏附的影响;实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测白鲜皮提... 详细信息

目的:研究白鲜皮提取物在体外对白念珠菌生物膜及相关基因的影响。方法:M27-A2测定白鲜皮提取物对白念珠菌的最小抑菌浓度(MIC);XTT法评价白鲜皮提取物对白念珠菌生物膜形成及细胞黏附的影响;实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测白鲜皮提取物作用后,als3、HWP1基因表达情况。结果:白鲜皮提取物对白念珠菌的MIC为128μg/m L;对生物膜的SMIC50和SMIC80分别为256μg/m L和512μg/m L;与空白对照组相比,不同浓度白鲜皮提取物(16~512μg/m L)对培养1、2、3、4 h的白念珠菌细胞黏附均有明显抑制作用(Pals3、HWP1基因表达降低(Pals3、HWP1等相关基因的表达,从而抑制Ras/c AMP通路的功能。

关键词：白鲜皮提取物白念珠菌 HWP1 als3

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

白鲜皮提取物体外抗白念珠菌生物膜作用及相关基因的研究

白鲜皮提取物体外抗白念珠菌生物膜作用及相关基因的研究

引用

2015浙江省检验医学学术年会

作者：谈潘莉陈益民浙江中医药大学附属第一医院

目的:研究白鲜皮提取物在体外对白念珠菌生物膜及相关基因的影响。方法:M27-A2测定白鲜皮提取物对白念珠菌的最小抑菌浓度(MIC);XTT法评价白鲜皮提取物对白念珠菌生物膜形成及细胞黏附的影响;实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测白鲜皮提取物作用后,als3、HWP1基因表达情况。结果:白鲜皮提取物对白念珠菌的MIC为128μg/ml;对生物膜的SMIC50和SMIC80分别为256μg/ml和512μg/ml;与空白对照组相比,不同浓度白鲜皮提取物(16-512μg/ml)对培养1 h、2 h、3 h、4 h的白念珠菌细胞黏附均有明显抑制作用(pals3、HWP1基因表达降低(pals3、HWP1等相关基因的表达,从而抑制Ras/cAMP通路的功能。

关键词：白鲜皮提取物白念珠菌 HWP1 als3

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：