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4-壬基酚联合双酚A通过抑制Akt/mTOR通路诱导F1代大鼠睾丸细胞自噬和精子发生障碍

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中华男科学杂志 2022年第3期28卷 195-202页

作者：蔡家星李桢代娟王雪琳张浩成金鑫施筱凡张玲石玉琴武汉科技大学医学院公共卫生学院职业危害识别与控制湖北省重点实验室湖北武汉430065 武汉市疾病预防控制中心慢病所湖北武汉430015 湖北医药学院附属襄阳市第一人医院妇产科湖北襄阳441000

目的:研究F0代4-壬基酚(4-NP)和双酚A(BPA)暴露对F1代大鼠睾丸细胞自噬及Akt/mTOR通路关键基因表达的影响。方法:采用2×2析因设计,将F0代雌雄鼠随机分为对照组(植物油)、BPA组(0.5 mg/kg BPA)、4-NP组(5 mg/kg 4-NP)、BPA+4-NP组(0.5 m... 详细信息

目的:研究F0代4-壬基酚(4-NP)和双酚A(BPA)暴露对F1代大鼠睾丸细胞自噬及Akt/mTOR通路关键基因表达的影响。方法:采用2×2析因设计,将F0代雌雄鼠随机分为对照组(植物油)、BPA组(0.5 mg/kg BPA)、4-NP组(5 mg/kg 4-NP)、BPA+4-NP组(0.5 mg/kg BPA+5 mg/kg 4-NP),连续隔天灌胃染毒30 d后,同组雌雄鼠3∶1合笼受孕,雌鼠怀孕后继续隔天灌胃染毒直至分娩。F1代子鼠从哺乳期至60日龄,期间均未给予4-NP和BPA暴露,随后处死大鼠。对60日龄F1代子鼠精子进行计数,观察睾丸组织形态学和自噬的组间变化,检测睾丸组织akt、mtor、4EBP1和p70S6K mRNA的表达水平及LC3蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,BPA组和BPA+4-NP组处理的F1代大鼠精子数量明显下降(P0.05);NP、BPA和BPA+4-NP组LC3-II/LC3-I比值上升,BPA和4-NP对LC3-II/LC3-I比值的影响有交互作用,睾丸生精小管内细胞排列松散,管腔内精子数量有降低趋势,胞内自噬泡数量有增加的趋势;4-NP组p70S6K、BPA组mtor、NP+BPA组akt mRNA表达明显下降(Pakt和4EBP1 mRNA表达的影响有交互作用(P_(交互)Akt/mTOR通路改变密切相关。

关键词： 4-壬基酚双酚A 自噬 Akt/mTOR通路大鼠

电针预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌Akt/mTOR通路的影响

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电针预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌Akt/mTOR通路的影响

作者：柳冬冬湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察电针预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌组织自噬相关通路蛋白激酶B(akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mtor)的影响,探讨“内关”穴对MIRI的保护作用机制。方法:将48只大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和内关组。模型... 详细信息

目的:观察电针预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌组织自噬相关通路蛋白激酶B(akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mtor)的影响,探讨“内关”穴对MIRI的保护作用机制。方法:将48只大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和内关组。模型组大鼠采用冠状动脉左前降支结扎法建立MIRI模型。内关组在造模前连续电针刺激“内关”7 d,每次30min,每日1次。其余各组采取相应干预措施。HE染色及透射电镜观察大鼠心肌局部组织病理形态学改变;ELISA法检测大鼠血清p-akt、p-mtor含量;Western blot法检测心肌组织akt、p-akt、mtor、p-mtor表达水平。结果:1.心肌组织形态:空白组心肌纤维排列整齐,间质未见炎性细胞浸润、出血;假手术组心肌纤维排列稍不规则,未见断裂,可见少量线粒体空泡;模型组心肌纤维分布紊乱,肥大心肌细胞增多,间质炎性浸润、出血,可见大量自噬小体和空泡;内关组心肌组织病变程度较模型组减轻,少量间质出血及炎性细胞浸润,自噬小体数量减少。2.血清p-akt、p-mtor含量:与假手术组比较,模型组大鼠血清p-akt明显降低(Pmtor降低(Pakt升高(Pmtor显著升高(P0.05)。3.心肌组织akt、p-akt、mtor和p-mtor表达及p-akt/akt、p-mtor/mtor比值:模型组p-akt、p-mtor水平及p-akt/akt、p-mtor/mtor均较假手术组下降(Pakt、p-mtor水平及p-akt/akt、p-mtor/mtor均较模型组升高(Pakt、mtor水平组间比较差异无统计学意义(P>0.05);空白组与假手术组大鼠心肌组织中p-akt、p-mtor蛋白表达及p-akt/akt、p-mtor/mtor比值差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.电针预处理可减少大鼠心肌梗死面积,减少心肌细胞坏死,改善缺血再灌注损伤症状。2.电针预处理减轻MIRI,起到保护心肌的作用,其机制可能与激活Akt/mTOR通路从而抑制过度自噬有关。

关键词：电针预处理内关心肌缺血再灌注损伤自噬 Akt/mTOR通路

苦瓜蛋白MAP30通过Akt/mTOR通路促进多发性骨髓瘤细胞的自噬和凋亡

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中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第3期26卷 299-305页

作者：何颖方芳颜宏利江松福温州医科大学附属第一医院血液科浙江温州325015 海军军医大学附属长海医院实验诊断科上海200433

目的:探讨苦瓜蛋白MAP30在多发性骨髓瘤中的作用及其机制。方法:将人骨髓瘤RPMI-8226、NCI-H929和U266细胞为靶细胞,以不同浓度(1～10μmol/L)的MAP30处理后,采用CCK-8法检测多发骨髓瘤细胞株RPMI-8226、NCI-H929和U266的增殖能力,Annex... 详细信息

目的:探讨苦瓜蛋白MAP30在多发性骨髓瘤中的作用及其机制。方法:将人骨髓瘤RPMI-8226、NCI-H929和U266细胞为靶细胞,以不同浓度(1～10μmol/L)的MAP30处理后,采用CCK-8法检测多发骨髓瘤细胞株RPMI-8226、NCI-H929和U266的增殖能力,Annexin V/PI流式细胞术检测骨髓瘤细胞的凋亡情况,Wb实验检测骨髓瘤细胞凋亡相关蛋白(PARP)、自噬相关蛋白(LC3II、P62)及Akt/mTOR通路相关蛋白的表达水平,CCK-8法、流式细胞术和Wb实验检测MAP30联合自噬激动剂雷帕霉素(Rap)或自噬抑制剂巴弗洛霉素(Baf)作用后骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的变化。结果:MAP30(1～10μmol/L)抑制骨髓瘤细胞的增殖,且其对增殖的抑制呈时间和剂量依赖关系(PAkt/mTOR通路相关蛋白p-akt和p-mtor表达水平明显降低(均PAkt/mTOR通路促进骨髓瘤细胞的凋亡和自噬,可能为骨髓瘤的治疗提供新的治疗策略。

关键词：多发性骨髓瘤苦瓜蛋白 MAP30 Akt/mTOR通路自噬凋亡

FMRP通过Akt/mTOR通路调控海马自噬对脆性X综合征的影响

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FMRP通过AKT/mTOR通路调控海马自噬对脆性X综合征的影响

作者：张博涵河北医科大学

学位级别：硕士

脆性X综合征(Fragile X syndrome,FXS)是最常见的遗传性智力缺陷综合征,也是孤独症谱系障碍最常见的单基因突变疾病。FXS的主要分子机制是脆性X智力低下基因1(Fragile X mental retardation gene 1,Fmr1)沉默导致脆性X智力低下蛋白(Frag... 详细信息

脆性X综合征(Fragile X syndrome,FXS)是最常见的遗传性智力缺陷综合征,也是孤独症谱系障碍最常见的单基因突变疾病。FXS的主要分子机制是脆性X智力低下基因1(Fragile X mental retardation gene 1,Fmr1)沉默导致脆性X智力低下蛋白(Fragile X mental retardation protein,FMRP)缺失,致使其靶基因m RNA的翻译表达异常。研究表明,Fmr1基因敲除(Knockout,KO)小鼠脑内自噬途径被抑制,然而FMRP对海马神经元自噬的调控机制及在FXS病理生理过程中的作用尚不清楚。本研究将以小鼠海马神经元细胞系HT22细胞以及Fmr1 KO小鼠和同背景品系野生型(Wild-type,WT)小鼠为研究模型,联合使用分子生物学、流式细胞术、形态学和神经行为学等多种技术手段,从分子、细胞、动物多层面开展研究,旨在揭示FMRP调控自噬功能的途径并阐明海马神经元自噬功能变化在FXS病理生理过程中的作用。目的:本研究以HT22细胞和Fmr1 KO、WT小鼠为研究对象,明确FMRP缺失对自噬以及线粒体自噬的影响,阐明akt/m TOR通路在调控海马自噬中的作用机制,并探究雷帕霉素在FXS中的治疗作用和机制。方法:第一部分FMRP对Fmr1 KO小鼠海马及HT22细胞自噬的影响1.使用免疫印迹实验,明确FMRP缺失对HT22细胞和小鼠海马自噬相关蛋白表达的影响。2.使用自噬双标腺病毒感染HT22细胞,观察Fmr1敲低对自噬流和自噬小体的影响。3.使用免疫荧光细胞化学染色,观察FMRP缺失对HT22细胞自噬相关蛋白表达和定位的影响。4.使用DCFH-DA荧光探针,探究FMRP缺失对HT22细胞内ROS表达的影响。5.使用免疫印迹实验,观察FMRP缺失对HT22细胞和小鼠海马线粒体自噬蛋白表达的影响。第二部分FMRP影响Fmr1 KO小鼠海马自噬的机制研究1.使用免疫印迹实验,明确FMRP缺失对小鼠海马akt/m TOR通路蛋白表达的影响。2.使用免疫印迹实验,以p-m TOR表达为参考进行雷帕霉素的量效实验,明确最佳治疗剂量,按照该剂量给予小鼠雷帕霉素,检测小鼠海马自噬相关蛋白表达的变化。3.使用免疫印迹实验,观察给予WT和Fmr1 KO小鼠雷帕霉素后线粒体自噬蛋白PINK1的表达变化。4.使用透射电子显微镜,观察给予WT和Fmr1 KO小鼠雷帕霉素后海马CA1区神经元超微结构的变化。第三部分akt/m TOR通路对Fmr1 KO小鼠神经行为的影响1.旷场实验检测雷帕霉素对WT和Fmr1 KO小鼠焦虑状态的影响。2.刻板行为检测雷帕霉素对WT和Fmr1 KO小鼠刻板行为的影响。3.三箱社交检测雷帕霉素对WT和Fmr1 KO小鼠社交能力和社交偏好能力的影响。4.新物体识别和Morris水迷宫检测雷帕霉素对WT和Fmr1 KO小鼠识别记忆能力和空间记忆能力的影响。结果:第一部分FMRP对Fmr1 KO小鼠海马及HT22细胞自噬的影响1.免疫印迹实验结果显示,HT22细胞sh-Fmr1组ULK-1磷酸化水平、p62表达高于NC组,Fmr1 KO小鼠海马ULK-1磷酸化水平、p62表达高于WT组,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ低于WT组。2.自噬流检测结果显示,HT22细胞sh-Fmr1组GFP与RFP共定位系数高于NC组。3.免疫荧光细胞化学染色结果显示,与NC组相比,HT22细胞sh-Fmr1组LC3表达水平下降,p62表达水平明显上升,而LC3与TOM20共定位减少。4.使用DCFH-DA荧光探针检测ROS水平,结果显示HT22细胞sh-Fmr1组荧光强度高于NC组,ROS水平升高。5.免疫印迹实验结果显示,HT22细胞sh-Fmr1组PINK1表达低于NC组,Fmr1 KO小鼠海马PINK1表达低于WT组。第二部分FMRP影响Fmr1 KO小鼠海马自噬的机制研究1.免疫印迹实验结果显示,Fmr1 KO小鼠海马通路蛋白akt、m TOR磷酸化水平高于WT组。2.免疫印迹实验结果显示,10 mg/kg/d的雷帕霉素使Fmr1 KO小鼠海马p-m TOR表达下降,与WT对照组水平相当,且减少了ULK-1磷酸化和p62表达水平,以及增加了LC3Ⅱ/LC3Ⅰ。3.免疫印迹实验结果显示,与WT Ctrl组相比,Fmr1 KO Ctrl组小鼠海马PINK1表达水平降低,Fmr1 KO Rapa组小鼠海马PINK1蛋白表达水平高于Fmr1 KO Ctrl组,而WT Rapa组与WT Ctrl组无统计学意义。4.透射电镜结果显示,WT Ctrl组和WT Rapa组中,胞质内可观察到自噬小体,其内可见待降解的线粒体;Fmr1 KO Ctrl组中,线粒体电子密度降低,线粒体内膜不连续,部分呈空泡样改变,且无线粒体自噬现象;Fmr1 KO Rapa组中,胞质内可观察到自噬小体和被包裹的线粒体

关键词：脆性X综合征 FMRP 自噬 Akt/mTOR通路神经行为

白藜芦醇调节Akt/mTOR通路对大鼠多囊卵巢综合征颗粒细胞自噬的影响机制研究

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重庆医科大学学报 2021年第4期46卷 388-393页

作者：马智胡俊邓煜幸贵邦王炼炼重庆医科大学附属第一医院生殖医学中心重庆400016

目的:探讨白藜芦醇对多囊卵巢综合征大鼠模型颗粒细胞自噬的影响,并探讨其机制。方法:40只雌性SD大鼠幼鼠随机分为2组,即多囊卵巢综合征模型组(n=30)和模型对照组(n=10)。将经免疫细胞化学法鉴定证实的多囊卵巢综合征(polycystic ovaria... 详细信息

目的:探讨白藜芦醇对多囊卵巢综合征大鼠模型颗粒细胞自噬的影响,并探讨其机制。方法:40只雌性SD大鼠幼鼠随机分为2组,即多囊卵巢综合征模型组(n=30)和模型对照组(n=10)。将经免疫细胞化学法鉴定证实的多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)颗粒细胞进行体外培养。用不同浓度的白藜芦醇处理,CCK-8观察细胞的增殖率变化情况;电镜观察颗粒细胞内自噬水平的变化;Western blot检测细胞内自噬相关蛋白轻链3Ⅰ(light chain 3Ⅰ,LC3Ⅰ)、自噬相关蛋白轻链3Ⅱ(light chain 3Ⅱ,LC3Ⅱ)、Beclin1的表达,以及总(磷酸化)蛋白激酶B[total(phosphorated)protein kinase B,T(p)-akt]、总(磷酸化)雷帕霉素靶蛋白[total(phosphorated)mammalian target of rapamyoin,T(p)-mtor]的变化,并检测akt抑制剂LY294002作用后,细胞内上述蛋白的表达情况。结果:免疫细胞化学结果显示,与模型对照组比较,模型组卵巢颗粒细胞中卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)表达明显增强。这提示模型构建成功且分离成功。CCK-8结果表明,白藜芦醇能够提高颗粒细胞的增殖率,有浓度-时间依赖性;并降低细胞内的自噬水平;而Western blot结果显示,白藜芦醇可以减低细胞内LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1的表达,提高p-akt和p-mtor的蛋白表达;LY249002作用后,细胞内的LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1表达明显增加,同时p-akt和p-mtor的表达则明显降低。结论:白藜芦醇能够明显降低多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞内自噬水平并影响细胞的增殖率,其机制可能与白藜芦醇上调Akt/mTOR通路密切相关。

关键词：多囊卵巢综合征颗粒细胞自噬 Akt/mTOR通路

人参皂苷Compound K通过调控Akt/mTOR通路诱导人肝癌细胞自噬作用的研究

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时珍国医国药 2020年第6期31卷 1347-1350页

作者：陈佳欣闫岩张学武张洪江延边大学医学院吉林延吉133002 延边大学附属医院吉林延吉133000

目的探讨人参皂苷Compound K(人参皂苷CK)对人肝癌细胞BEL-7404自噬的作用及对Akt/mTOR通路的影响。方法采用MTT法检测人参皂苷CK对BEL-7404增殖的抑制作用;MDC染色、单荧光GFP-LC3质粒转染细胞和透射电子显微镜观察人参皂苷CK对BEL-740... 详细信息

目的探讨人参皂苷Compound K(人参皂苷CK)对人肝癌细胞BEL-7404自噬的作用及对Akt/mTOR通路的影响。方法采用MTT法检测人参皂苷CK对BEL-7404增殖的抑制作用;MDC染色、单荧光GFP-LC3质粒转染细胞和透射电子显微镜观察人参皂苷CK对BEL-7404自噬的影响;Western blot检测人参皂苷CK对细胞自噬相关蛋白和Akt/mTOR通路蛋白的作用。结果人参皂苷CK能够抑制人肝癌细胞BEL-7404增殖,诱导细胞自噬,促进Beclin-1、LC3Ⅱ的表达,下调Akt/mTOR通路相关蛋白akt、p-akt、mtor、p-mtor表达;加入Akt/mTOR通路抑制剂MK2206后,能够进一步抑制akt、p-akt、mtor、p-mtor表达,上调Beclin-1、LC3Ⅱ的表达。结论人参皂苷CK可以通过调控Akt/mTOR通路诱导人肝癌细胞BEL-7404自噬。

关键词：人参皂苷CK 肝癌自噬 Akt/mTOR通路

齐墩果酸对妊娠高血压大鼠肾脏损伤及Akt/mTOR通路的影响

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中国优生与遗传杂志 2023年第10期31卷 2046-2051页

作者：王静李芬霞郑艳丽西安医学院第二附属医院产一科陕西西安710038

目的研究齐墩果酸(OA)对妊娠高血压(PIH)大鼠肾脏损伤的保护作用及对丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(akt)/雷帕霉素靶蛋白(mtor)通路的调节机制。方法通过雌雄交配获得妊娠雌性大鼠,皮下注射NG-硝基-L-精氨酸甲酯构建PIH大鼠,将50只PIH大鼠随... 详细信息

目的研究齐墩果酸(OA)对妊娠高血压(PIH)大鼠肾脏损伤的保护作用及对丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(akt)/雷帕霉素靶蛋白(mtor)通路的调节机制。方法通过雌雄交配获得妊娠雌性大鼠,皮下注射NG-硝基-L-精氨酸甲酯构建PIH大鼠,将50只PIH大鼠随机分为PIH组、OA低剂量(OA-L,20 mg/kg OA)组、OA中剂量(OA-M,50 mg/kg OA)组、OA高剂量(OA-H,100 mg/kg OA)组、OA-H+akt激活剂(SC79,100 mg/kg OA+100μg SC79)组,另取10只正常妊娠大鼠作为对照组。药物干预结束后,检测各组大鼠尾部静脉压;腹部主动脉采血,检测血清中白细胞介素(IL)-6、IL-1β含量;全自动生化仪检测24 h尿蛋白含量、血肌酐、尿素氮水平;分离肾组织,H-E染色检测其病理学变化;TUNEL检测肾组织中细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测肾组织中p-akt、akt、p-mtor、mtor及活化的半胱氨酸天冬氨酸酶3(cleaved caspase-3)表达水平。结果与对照组相比,PIH组肾组织发生严重组织病变,尾部静脉压、IL-6、IL-1β含量、阳性细胞数、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白、p-akt/akt、p-mtor/mtor、cleaved caspase-3表达显著增加(Pakt/akt、p-mtor/mtor、cleaved caspase-3表达显著降低(PAkt/mTOR通路缓解PIH大鼠的肾脏损伤。

关键词：齐墩果酸 Akt/mTOR通路妊娠高血压肾脏损伤

KRT81在乳腺癌组织中的表达及其调控Akt/mTOR通路影响糖代谢抑制乳腺癌细胞增殖的作用

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蚌埠医学院学报 2023年第11期48卷 1488-1494页

作者：王腾张晖蚌埠医学院第一附属医院肿瘤外科安徽蚌埠233004

目的:探究KRT81在乳腺癌组织中的表达及其调控Akt/mTOR通路影响糖代谢抑制乳腺癌细胞增殖的作用。方法:收集100例乳腺癌病人的病理切片,免疫组织化学检测KRT81在乳腺癌中的表达,分析KRT81表达量与临床病理特征相关性。同时在MCF-7细胞... 详细信息

目的:探究KRT81在乳腺癌组织中的表达及其调控Akt/mTOR通路影响糖代谢抑制乳腺癌细胞增殖的作用。方法:收集100例乳腺癌病人的病理切片,免疫组织化学检测KRT81在乳腺癌中的表达,分析KRT81表达量与临床病理特征相关性。同时在MCF-7细胞中分别转染过表达质粒、对照质粒、对照敲低质粒、敲低质粒,记作oeKRT81组、NC组、Control组及si-KRT81组。通过集落克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡细胞,蛋白印迹实验检测Akt/mTOR通路相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:免疫组织化学检测结果显示,KRT81蛋白在癌组织中阳性表达明显低于癌旁正常组织(Pakt、p-mtor蛋白水平明显低于NC组(Pakt、p-mtor蛋白水平明显Control组(PAkt/mTOR通路影响糖代谢抑制乳腺癌细胞增殖。

关键词：乳腺肿瘤角蛋白81 增殖 Akt/mTOR通路糖代谢

白杨素通过促进ROS介导的Akt/mTOR通路失活在子宫内膜癌细胞中诱导自噬

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白杨素通过促进ROS介导的Akt/mTOR通路失活在子宫内膜癌细胞中诱...

作者：何宇安徽医科大学

学位级别：硕士

子宫内膜癌一种侵袭性的恶性肿瘤,且晚期患者治疗选择有限,预后差,这迫使研究者寻找有效的治疗方案。白杨素是一种天然黄酮,已在其他肿瘤中被证实具有显著的抗癌作用。然而,白杨素在子宫内膜癌中的抗癌作用及相关机制尚不清楚。目的:研... 详细信息

子宫内膜癌一种侵袭性的恶性肿瘤,且晚期患者治疗选择有限,预后差,这迫使研究者寻找有效的治疗方案。白杨素是一种天然黄酮,已在其他肿瘤中被证实具有显著的抗癌作用。然而,白杨素在子宫内膜癌中的抗癌作用及相关机制尚不清楚。目的:研究白杨素通过Akt/mTOR通路在子宫内膜癌细胞中诱导自噬的机制。方法:培养人子宫内膜癌细胞HEC-1A和Ishikawa,进行以下实验:1.通过细胞活力实验、克隆形成实验和流式细胞术检测白杨素对两种细胞系增殖能力以及凋亡情况的影响。2.通过透射电镜观察白杨素处理后的两种细胞系的自噬小体与自噬溶酶体。3.通过免疫荧光观察白杨素处理后的两种细胞系的LCB的荧光强度。4.通过Western blotting实验检测白杨素单独或者联合氯喹作用下自噬相关蛋白的表达情况。5.通过细胞活力实验、流式细胞术检测白杨素联合氯喹作用下两种细胞系增殖能力以及凋亡情况的影响。6.通过ROS检测试剂盒和Western blotting实验检测白杨素单独或者联合NAC作用下活性氧以及自噬相关蛋白的表达情况。7.通过Western blotting实验检测白杨素作用下自噬相关Akt/mTOR通路蛋白的表达情况。结果:1.细胞增殖实验、克隆形成实验、流式细胞术结果表明,白杨素可以以时间浓度依赖性的方式抑制子宫内膜癌细胞增殖,并且诱导子宫内膜癌细胞凋亡。2.透射电镜的结果表明,白杨素可以增加子宫内膜癌细胞中自噬小体和自噬溶酶体数量。3.免疫荧光的实验结果表明,在白杨素作用后的子宫内膜癌细胞中,检测到LC3的细胞内定位和丰富的LC3斑点,而对照组细胞没有表现出明显的荧光强度。4.白杨素上调了子宫内膜癌细胞中LC3B Ⅱ和Beclin 1蛋白的表达,下调了P62蛋白的表达。联合使用氯喹后,LC3B Ⅱ的表达进一步升高。5.细胞增殖实验和流式细胞术结果表明,在加入氯喹后,白杨素对子宫内膜癌细胞增殖的抑制和诱导细胞凋亡的能力进一步增强。6.白杨素可以促进子宫内膜癌细胞ROS集聚。在加入NAC后,LC3B Ⅱ的表达下调。7.白杨素抑制了Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。在加入NAC后,通路相关蛋白的表达升高。结论:在子宫内膜癌中,ROS介导的Akt/mTOR通路的失活参与了白杨素诱导的自噬,并且联合自噬抑制剂可以进一步增强白杨素的抗癌效果。

关键词：子宫内膜癌白杨素自噬凋亡活性氧 Akt/mTOR通路