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5-甲基吡嗪-2-羧酸的HPLC分析研究

四川化工 2010年第3期13卷 35-39页

作者：游霞四川省天然气化工研究院新产品所成都610212

建立了利用阴离子交换柱高效液相色谱法分析5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法。色谱柱为Hyper-sail SAX强阴离子交换柱,以0.020mol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH值=2.50）：乙腈=95：5为流动相,流速为：1.0 mL/min,紫外检测器波长为276nm,外标法定量... 详细信息

建立了利用阴离子交换柱高效液相色谱法分析5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法。色谱柱为Hyper-sail SAX强阴离子交换柱,以0.020mol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH值=2.50）：乙腈=95：5为流动相,流速为：1.0 mL/min,紫外检测器波长为276nm,外标法定量。结果表明：5-甲基吡嗪-2-羧酸在0.016-0.16g/L范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系（R^2=0.9995）,加标回收率为98.12%-102.19%。此法具有灵敏度高、准确可靠、操作简便、快速,可用于5-甲基吡嗪-2-羧酸产品的检测和中间控制分析。

关键词： 5-甲基吡嗪-2-羧酸高效液相色谱外标法紫外检测器

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5-甲基吡嗪-2-羧酸的合成工艺

化工时刊 2018年第6期32卷 14-16,57页

作者：张玉秀陈绘如陈文华常州工程职业技术学院江苏常州213164

以2,5-二甲基吡嗪和高锰酸钾为原料,经一步氧化得到5-甲基吡嗪-2-羧酸,收率80.4%。考察了物料配比、加料方式、反应温度、pH值等因素对反应的影响。目标产物经熔点、1HNMR进行结构确认。目标化合物经一次重结晶纯度可达99.5%以上。

关键词： 5-甲基吡嗪-2-羧酸 2,5-二甲基吡嗪合成工艺

重组大肠杆菌全细胞催化制备5-甲基吡嗪-2-羧酸

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重组大肠杆菌全细胞催化制备5-甲基吡嗪-2-羧酸

作者：顾刘燕江南大学

学位级别：硕士

5-甲基吡嗪-2-羧酸(5-Methylpyrazine-2-carboxylic acid,MPCA)是重要的医药中间体,被广泛应用于降血糖药物、降血脂药物及治疗结核病药物的合成。传统的化学合成法、现有的野生菌转化法及酶催化法合成MPCA存在着环境污染,生产周期长及... 详细信息

5-甲基吡嗪-2-羧酸(5-Methylpyrazine-2-carboxylic acid,MPCA)是重要的医药中间体,被广泛应用于降血糖药物、降血脂药物及治疗结核病药物的合成。传统的化学合成法、现有的野生菌转化法及酶催化法合成MPCA存在着环境污染,生产周期长及需要利用有毒物质二甲苯等问题,因此本研究建立了一种对环境友好的重组大肠杆菌(Escherichia coli)全细胞催化高效制备MPCA的方法。首先,为了在***中构建MPCA的合成途径,克隆来源于恶臭假单胞杆菌(Pseudomonas putida)ATCC 33015编码二甲苯单加氧酶(Xylene monooxygenase,XMO)的xylM和xylA基因,编码苯甲醇脱氢酶(Benzyl alcohol dehydrogenase,BADH)的xylB基因和编码苯甲醛脱氢酶(Benzaldehyde dehydrogenase,BZDH)的xylC基因至表达载体pET28a。对菌体收集的时期、三个酶的表达量组合进行优化获得重组菌*** MABC1,并对其催化条件进行优化,确定最优条件为:细胞量OD=100,pH 8.0,温度20C,底物2,5-二甲基吡嗪(2,5-Dimethylpyrazine,DMP)浓度12 g·L,催化时间48 h,在这一过程中发现限制MPCA产量提高的关键酶为XMO。通过对XMO中编码电子转移蛋白的xylA基因前的RBS进行优化,获得一株正向菌株*** ARBS3,MPCA产量提高至10.2 g·L,MPCA对DMP的得率提高到0.665 mol/mol。其次,通过利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术整合MPCA合成途径至基因组并调节xylM和xylA在基因组上拷贝数的比例,构建了无质粒高产MPCA菌株*** MPCA8,最终产量达到15.6 g?L,并且MPCA对DMP的得率达到1 mol/mol,同时所需细胞量降低为OD=75,催化时间缩短为36 h。最后,我们采用穿线法对XMO中起催化作用的受体羟化酶进行蛋白建模,利用软件Discovery Studio进行分子对接得到5个关键氨基酸位点。对这5个关键位点进行定点饱和突变后,获得催化活性提高的突变株L151F,其催化活性为67 mg·h·gDCW。对该突变株进行催化验证,MPCA产量达到11.6 g·L,与携带质粒的重组菌*** ARBS3相比有所提高。

关键词： 5-甲基吡嗪-2-羧酸全细胞催化 CRISPR/Cas9 二甲苯单加氧酶定点突变

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微生物法生产5-甲基吡嗪-2-羧酸的研究

微生物法生产5-甲基吡嗪-2-羧酸的研究

作者：刘丽娟浙江工业大学

学位级别：硕士

5-甲基吡嗪-2-羧酸是一种重要的医药中间体,主要用于合成第二代口服降血糖药物格列吡嗪、新型抗高血压药物阿西莫司以及抗结核药物5-甲基吡嗪-2-羧酸甲酯等。因此,开发绿色、高效的5-甲基吡嗪-2-羧酸合成技术引起了国内外学术、工业界... 详细信息

5-甲基吡嗪-2-羧酸是一种重要的医药中间体,主要用于合成第二代口服降血糖药物格列吡嗪、新型抗高血压药物阿西莫司以及抗结核药物5-甲基吡嗪-2-羧酸甲酯等。因此,开发绿色、高效的5-甲基吡嗪-2-羧酸合成技术引起了国内外学术、工业界的广泛关注。本文首先建立了底物2,5-二甲基吡嗪和产物5-甲基吡嗪-2-羧酸的液相分析方法。从100余份土样中筛选到一株能够高效催化2,5-二甲基吡嗪合成5-甲基吡嗪-2-羧酸的菌株ZJB-LLJ。通过形态学、生理生化实验、16S rDNA序列和系统发育分析,确定该菌株为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。通过单因素实验优化了*** ZJB-LLJ产单加氧酶的发酵生产条件,确定了最适发酵条件为:在500 mL摇瓶中装液100 mL,接种12h的种子液,温度为30℃,pH为7-8,以对二甲苯为唯一碳源,诱导培养12 h后添加底物的实验结果为最好,同时采用分批流加的方式积累产物最快,转化528 h后5-甲基吡嗪-2-羧酸可达20.41 g/L,产率达到75.6%。在以上条件下,添加适量甘油有利于产物的积累,结果显示,再诱导培养8 h后保持甘油量在0.004 mol/L时可以时产率增加20%。同时进一步考察了静息细胞氧化过程中缓冲液pH、温度、底物浓度等参数的影响,得到了最适反应条件:温度30℃,缓冲液Tris-HCI,pH 8.0。确定了 10ml体系最适的菌浓度为0.01 g/ml,最适底物浓度为23 mM时催化转化12 h后的的转化率与产量分别为67%、2.21 g/L。以上结果表明,*** ZJB-LLJ在生物合成5-甲基吡嗪-2-羧酸中具有很好的工业化应用价值。

关键词： 5-甲基吡嗪-2-羧酸 2,5-二甲基吡嗪二甲苯单加氧酶恶臭假单胞菌

反相离子对色谱法测定格列吡嗪片中5-甲基吡嗪-2-羧酸的含量

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食品与药品 2019年第5期21卷 381-384页

作者：崔静于小童淄博市食品药品检验研究院

目的建立格列吡嗪片中5-甲基吡嗪-2-羧酸含量测定的方法。方法采用反相离子对高效液相色谱法,采用ODS色谱柱,流动相为50mmol/LNaH2PO4溶液(含0.05%四丁基氢氧化铵)-甲醇,梯度洗脱,流速为1.0ml/min,柱温35℃,检测波长276nm,进样量20μl... 详细信息

目的建立格列吡嗪片中5-甲基吡嗪-2-羧酸含量测定的方法。方法采用反相离子对高效液相色谱法,采用ODS色谱柱,流动相为50mmol/LNaH2PO4溶液(含0.05%四丁基氢氧化铵)-甲醇,梯度洗脱,流速为1.0ml/min,柱温35℃,检测波长276nm,进样量20μl。结果5-甲基吡嗪-2-羧酸含量在0.05026~2.0104μg/ml范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999,平均回收率为99.20%,RSD为0.9%(n=9),溶液8h以内稳定。结论本方法操作简单、灵敏度高、结果准确,适用于格列吡嗪片中微量杂质5-甲基吡嗪-2-羧酸的测定。

关键词： 5-甲基吡嗪-2-羧酸格列吡嗪离子对色谱高效液相色谱法

金属卟啉催化氧气氧化2，5-二甲基吡嗪的研究

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金属卟啉催化氧气氧化2，5-二甲基吡嗪的研究

作者：董阳阳北京工业大学

学位级别：硕士

5-甲基吡嗪-2-羧酸(5-methylpyrazine-2-carboxylic acid，MPCA)，是一种重要的医药中间体，主要用于合成第二代磺脲类降血糖药格列吡嗪、新一代长效降血脂药阿昔莫司(Acipimox)以及治疗结核病的有效药物5-甲基吡嗪-2-羧酸甲酯(PAE)。... 详细信息

5-甲基吡嗪-2-羧酸(5-methylpyrazine-2-carboxylic acid，MPCA)，是一种重要的医药中间体，主要用于合成第二代磺脲类降血糖药格列吡嗪、新一代长效降血脂药阿昔莫司(Acipimox)以及治疗结核病的有效药物5-甲基吡嗪-2-羧酸甲酯(PAE)。论文首先综述了5-甲基吡嗪-2-羧酸的应用及合成研究进展，通过介绍5-甲基吡嗪-2-羧酸的合成研究方法，分析了不同合成方法的优缺点。目前合成5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法，主要存在催化剂用量大，难以从反应体系分离;需要在酸性介质中进行，对反应容器腐蚀较大;反应进程难以控制，容易发生深度氧化，副产物较多。金属卟啉能模拟单加氧酶细胞色素P-450实现温和条件下对分子氧的催化活化，尤其是取代金属卟啉在催化氧化反应中表现出较高的催化活性和选择性，由此我们设计在温和的条件下以金属卟啉为催化剂，氧气为氧化剂，催化氧化2,5-二甲基吡嗪，制取5-甲基吡嗪-2-羧酸，并取得了不错的研究成果。本课题以不同的金属卟啉催化氧气氧化2,5-二甲基吡嗪，通过绿色的化学工艺过程控制反应进程以及氧化深度，提高反应的转化率及其目标产物的选择性，主要研究碱性条件下，金属卟啉仿生催化氧气氧化2,5-二甲基吡嗪制备5-甲基吡嗪-2-羧酸。重点考察卟啉催化剂种类及用量、反应温度、碱浓度、氧气压力、反应时间等因素对反应收率及目标产物酸选择性的影响。通过反应机理的分析研究，解释金属卟啉与氢氧化钠协同催化的实质，进一步论证了氢氧化钠不存在时反应难以进行的原因。实验结果表明，以T(p-Cl)PPCoCl为催化剂时催化剂浓度为4.0×10mol/L，在反应温度为100oC、氧气压力为1.5MPa、氢氧化钠浓度为0.375mol/L、2,5-二甲基吡嗪浓度为0.15mol/L、反应时间为8h，2,5-二甲基吡嗪的转化率是21.69%，5-甲基吡嗪-2-羧酸的选择性和收率分别为92.68%和20.10%

关键词： 5-甲基吡嗪-2-羧酸金属卟啉氧气氧化 2,5-二甲基吡嗪