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AURKA调控肿瘤顺铂耐药机制

生命的化学 2023年第8期43卷 1268-1276页

作者：张丽君石皓姜卓言俞红女王林大连大学附属新华医院胸外科大连116021 大连大学附属新华医院肿瘤科大连116021

顺铂作为一线化疗药物广泛应用于多种肿瘤中,其耐药性的出现为临床诊疗带来极大的困扰,亟需探索新的机制改善耐药从而提高疗效。近年的研究表明,极光激酶A(aurora kinase A,AURKA)与肿瘤恶性行为密切相关,并可调控顺铂的耐药机制。AURK... 详细信息

顺铂作为一线化疗药物广泛应用于多种肿瘤中,其耐药性的出现为临床诊疗带来极大的困扰,亟需探索新的机制改善耐药从而提高疗效。近年的研究表明,极光激酶A(aurora kinase A,AURKA)与肿瘤恶性行为密切相关,并可调控顺铂的耐药机制。AURKA不仅通过抑制细胞凋亡,还通过诱导自噬、上皮-间质转化、调节细胞糖代谢等多方面诱导顺铂耐药抗性产生,靶向调控AURKA有潜在逆转顺铂耐药的作用。本文通过更全面的阐述AURKA调节顺铂耐药的机制,希望为靶向AURKA逆转顺铂耐药提供更加可靠的理论依据。

关键词：极光激酶A 肿瘤顺铂耐药细胞凋亡

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中华实用诊断与治疗杂志 2023年第3期37卷 252-260页

作者：夏娜娜杨安银余敏敏南京中医药大学附属南京医院、南京市第二医院妇科江苏南京210003

目的应用生物信息学方法筛选宫颈癌顺铂耐药相关的枢纽基因,探讨KRT6A表达对顺铂耐药宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响。方法(1)收集TCGA数据库306份宫颈癌标本的mRNA表达数据,基于GDSC数据库,应用R软件包“pRRophetic”预测宫颈癌样本... 详细信息

目的应用生物信息学方法筛选宫颈癌顺铂耐药相关的枢纽基因,探讨KRT6A表达对顺铂耐药宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响。方法(1)收集TCGA数据库306份宫颈癌标本的mRNA表达数据,基于GDSC数据库,应用R软件包“pRRophetic”预测宫颈癌样本顺铂化疗的敏感度,采用线性回归分析顺铂的半数抑制浓度(the half inhibitory concentration,IC_(50))。依据IC_(50)值将宫颈癌样本分为顺铂敏感组和耐药组,应用limma软件包进行差异表达mRNA分析,对其进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析,应用Cytoscape软件构建差异表达基因的蛋白互作网络,进行模块分析并筛选枢纽基因。选择KRT6A基因进行细胞实验。(2)取对数生长期SiHa和顺铂耐药SiHa(SiHa/DDP)细胞,采用实时荧光定量PCR法检测KRT6A mRNA相对表达量;分别应用0、0.625、1.25、2.5、5、10、20 mg/L顺铂处理48 h,采用CCK-8法检测2组细胞增殖率。(3)取对数生长期SiHa/DDP细胞分为转染组(转染siRNA-KRT6A)和对照组(转染siRNA-NC),转染48 h,2组采用实时荧光定量PCR法检测KRT6A mRNA相对表达量,采用Western blot法检测KRT6A蛋白相对表达量;然后采用CCK-8法检测应用0、0.625、1.25、2.5、5、10、20 mg/L顺铂处理48 h细胞增殖,计算顺铂的IC_(50)值。转染48 h取转染组和对照组细胞,应用5 mg/L(IC_(50)值)浓度的顺铂处理48 h,采用流式细胞术检测处理0、48 h时细胞凋亡。结果(1)顺铂敏感组与顺铂耐药组差异表达基因有190个,与顺铂敏感组比较,顺铂耐药组74个基因表达上调、116个基因表达下调。GO分析结果提示差异表达基因参与表皮发育、肽酶活性调节、角质形成细胞分化、蛋白质水解和水解酶活性的负调控等生物过程,其产物参与细胞间连接、顶端质膜、中间体、侧质膜等细胞组分,发挥丝氨酸型内肽酶抑制剂活性、氧化还原酶活性、钙依赖性蛋白结合和细胞骨架的结构成分等生物学分子功能。KEGG富集分析结果显示,差异表达基因主要富集于雌激素信号通路、补体和凝血级联反应、白细胞介素-17信号通路、酪氨酸代谢、肾素分泌和组氨酸代谢等。通过蛋白互作网络和聚类分析得到6个宫颈癌顺铂耐药的枢纽基因,分别为KRT6A、KRT5、KRT14、SPRR1B、KRT16和SPRR1A。(2)SiHa/DDP细胞KRT6A mRNA相对表达量(6.310±0.417)高于SiHa细胞(1.000±0.110)(t=21.314,P顺铂处理48 h,SiHa/DDP细胞增殖率[(72.461±3.598)%、(70.862±3.474)%、(63.013±3.565)%、(47.754±5.023)%]均高于SiHa细胞[(50.702±6.477)%、(22.593±4.413)%、(5.964±1.396)%、(3.555±1.263)%](t=5.086,P=0.007;t=14.886,P顺铂处理48 h,转染组细胞增殖率[(65.676±3.358)%、(53.150±1.902)%、(40.932±2.455)%、(33.580±2.949)%、(18.042±3.183)%]均低于对照组[(75.557±3.573)%、(66.144±3.843)%、(53.801±2.276)%、(41.683±1.422)%、(28.953±3.065)%](t=3.529,P=0.024;t=5.294,P=0.006;t=6.658,P=0.003;t=4.287,P=0.013;t=4.276,P=0.013)。5 mg/L顺铂处理0、48 h,转染组细胞凋亡率[(14.039±2.410)%、(32.963±3.133)%)]高于对照组[(4.455±1.028)%、(23.004±3.613)%](t=6.377,P=0.003;t=3.594,P=0.022)。结论宫颈癌顺铂耐药的枢纽基因主要有KRT6A、KRT5、KRT14、SPRR1B、KRT16和SP

关键词：宫颈癌差异表达基因顺铂耐药 KRT6A基因 SiHa细胞 SiHa/DDP细胞

下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响

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中国临床药理学与治疗学 2021年第6期26卷 616-623页

作者：崔华燕红霞尹梅宁夏医科大学总医院呼吸与危重症医学科宁夏银川750001 银川市第二人民医院神经内科宁夏银川750011

目的:研究下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响及机制。方法:qRT-PCR方法测定正常支气管上皮16HBE细胞和肺癌A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176的表达。将A549/DDP细胞分成对照组、si-NC组、si-LINC00176组、si-LINC00176+Anti-miR-NC组、si-LINC00176+Anti-miR-138-5p组。MTT实验检测顺铂对A549/DDP的半数抑制浓度(IC50)。流式细胞术测定细胞凋亡。Western blot测定LC3-I、LC3-II、Beclin 1、C-Caspase-3蛋白表达。利用荧光素酶报告系统鉴定LINC00176和miR-138-5p的靶向关系。结果:与16HBE细胞比较,A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176表达水平显著升高(P顺铂耐药,抑制细胞自噬,诱导细胞凋亡。

关键词：肺癌顺铂耐药自噬 LINC00176 miR-138-5p

Chk1抑制剂逆转TP53突变型乳腺癌细胞的顺铂耐药

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华中科技大学学报（医学版） 2021年第1期50卷 7-13页

作者：秦凯简丹妮熊慧华彭慧袁响林程熠华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉-头颈外科武汉430022

目的研究细胞周期检查点激酶1抑制剂(cell cycle checkpoint kinase 1 inhibitor,Chk1 i)AZD7762对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞的作用,以及AZD7762逆转TNBC细胞对顺铂的耐药性及其机制。方法将AZD7762孵育BT-549、HCC70、MDA-MB-231、T47D和MCF-7细胞,利用CCK8法检测细胞存活率。构建MCF-7-shp53细胞系,利用CCK8和集落形成实验检测细胞MCF-7-shp53与野生型细胞的增殖能力,利用流式细胞术与膜联蛋白-Ⅴ染色法检测两组细胞凋亡与细胞周期情况。将AZD7762和顺铂加入两组细胞联合孵育72 h,利用Chou-Talalay方程计算两种化合物的协同效应,并利用免疫印迹法检测相关蛋白表达。结果通过评估AZD7762对5种TNBC细胞活力的影响,发现MCF-7是最具AZD7762耐药性的细胞系。TNBC对AZD7762的敏感性依赖于TP53状态。探讨AZD7762对TNBC细胞毒性作用的潜在机制:AZD7762终止TP53突变细胞S期和G2/M期阻滞,通过促进DNA损伤和凋亡导致细胞死亡。AZD7762联合顺铂作用可以逆转TP53突变型乳腺癌细胞对顺铂的耐药性,并可诱导TP53突变型乳腺癌细胞有丝分裂改变。结论AZD7762通过促进DNA损伤、凋亡、终止G2/M期阻滞和诱导有丝分裂改变而导致细胞死亡。对AZD7762的敏感性取决于TNBC细胞中的TP53状态。此外,AZD7762逆转TNBC细胞对顺铂的耐药性,Chk1 i是治疗TNBC患者的潜在药物。

关键词：三阴性乳腺癌 TP53突变顺铂耐药 Chk1

外源性硫化氢通过EGFR/PI3K/Akt信号通路促进人卵巢癌细胞增殖、侵袭和顺铂耐药

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上海交通大学学报（医学版） 2018年第3期38卷 244-253页

作者：葛顺娜段峥峥上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院胚胎源性疾病研究所上海200030

目的·探讨外源性硫化氢对人卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭和顺铂耐药的作用及其机制。方法·以人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和人顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP细胞为研究对象。采用CCK-8法、流式细胞术、Transwell侵袭小室实验,分别检测NaHS... 详细信息

目的·探讨外源性硫化氢对人卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭和顺铂耐药的作用及其机制。方法·以人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和人顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP细胞为研究对象。采用CCK-8法、流式细胞术、Transwell侵袭小室实验,分别检测NaHS对SKOV3细胞的增殖、凋亡、侵袭能力的影响;通过计算细胞半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)和细胞活性抑制率(inhibition rate,IR),检测NaHS对SKOV3和SKOV3/DDP细胞顺铂耐药的影响;Western blotting检测Na HS对SKOV3和SKOV3/DDP细胞中EGFR、PI3K和Akt磷酸化水平的影响;用EGFR的抑制剂erlotinib、PI3K的抑制剂LY294002和Akt的抑制剂MK-2206处理细胞,检测SKOV3和SKOV3/DDP细胞中EGFR、PI3K和Akt的磷酸化水平以及SKOV3细胞增殖、侵袭和SKOV3/DDP细胞顺铂耐药的变化。结果·与对照组相比,Na HS能显著促进SKOV3细胞增殖(P=0.000)和侵袭(P=0.033);显著提高SKOV3和SKOV3/DDP细胞对顺铂的IC50(P=0.027,P=0.009),降低顺铂对细胞的IR(P=0.001,P=0.009);激活SKOV3和SKOV3/DDP细胞的EGFR(P=0.000,P=0.037)、PI3K(P=0.009,P=0.013)、Akt(P=0.000,P=0.023);erlotinib、LY294002和MK-2206均能阻断Na HS对SKOV3细胞的增殖(均P=0.000)和侵袭(均P顺铂耐药的作用(均P=0.000)。结论·外源性硫化氢可促进SKOV3细胞的增殖和侵袭,以及SKOV3和SKOV3/DDP细胞的顺铂耐药,其机制与激活EGFR/PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：硫化氢卵巢癌细胞增殖细胞侵袭顺铂耐药 EGFR/PI3K/Akt信号通路

METTL3在视网膜母细胞瘤中对顺铂耐药的作用及机制研究

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METTL3在视网膜母细胞瘤中对顺铂耐药的作用及机制研究

作者：郭惠峰南昌大学

学位级别：硕士

目的:研究METTL3基因在视网膜母细胞瘤细胞Y79及其耐顺铂细胞株Y79/DDP中表达情况,探讨METTL3在耐顺铂细胞株Y79/DDP中的作用及潜在的分子作用机制,为预防人视网膜母细胞瘤临床治疗中的顺铂抗性提供见解。方法:我们对ARPE-19（人正常视... 详细信息

目的:研究METTL3基因在视网膜母细胞瘤细胞Y79及其耐顺铂细胞株Y79/DDP中表达情况,探讨METTL3在耐顺铂细胞株Y79/DDP中的作用及潜在的分子作用机制,为预防人视网膜母细胞瘤临床治疗中的顺铂抗性提供见解。方法:我们对ARPE-19（人正常视网膜色素上皮细胞）、Y79及Y79/DDP三个细胞系进行Real-Time PCR、Western Blot实验,验证METTL3为差异表达基因。将过表达或敲低METTL3基因的慢病毒载体转染到Y79中,构建过表达或敲低METTL3的稳转株,并通过Real-Time PCR、Western Blot实验检测其m RNA、蛋白表达水平。使用MTT实验检测不同浓度顺铂在Y79过表达及敲低METTL3时增殖的影响。通过Me RIP-seq及Me RIP-q PCR明确METTL3在Y79中的靶基因,进一步在体外通过Real-Time PCR、Western Blot、流式细胞学等实验检测METTL3对相关靶基因的调控作用。结果:在本研究中,我们发现METTL3在Y79、Y79/DDP中表达水平均上调;在Y79细胞中过表达METTL3促进其增殖,同时可增强其对顺铂的耐药,敲低METTL3则抑制细胞生长及其对顺铂的耐药;机制研究表明,METTL3在Y79中通过靶向MDM2促进其对顺铂的耐药,还可通过靶向铂类耐药相关基因BCL2,抑制Y79细胞凋亡,促进Y79对顺铂的耐药。结论:我们的研究结果显示METTL3在视网膜母细胞瘤化疗耐药中起重要作用,其可通过靶向铂类耐药相关基因MDM2、BCL2,调控Y79细胞对顺铂的耐药作用,METTL3可能作为视网膜母细胞瘤潜在的诊断生物标志物及治疗靶点。

关键词： METTL3 视网膜母细胞瘤细胞Y79 顺铂耐药 MDM2 BCL2

补中益气汤通过Nrf2/ROS通路调控线粒体途径细胞凋亡改善A549/DDP细胞顺铂耐药的分子机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第1期30卷 95-102页

作者：牟琪瑞李贺刘玥彤高原刘春英辽宁中医药大学中西医结合学院沈阳110847

目的:探讨补中益气汤含药血清通过核因子E_2相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS)通路调控线粒体途径细胞凋亡改善人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞(A549/DDP)顺铂耐药的机制。方法:制备补中益气汤含药血清及培养A549/DDP细胞,并进行随机分组为空白组... 详细信息

目的:探讨补中益气汤含药血清通过核因子E_2相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS)通路调控线粒体途径细胞凋亡改善人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞(A549/DDP)顺铂耐药的机制。方法:制备补中益气汤含药血清及培养A549/DDP细胞,并进行随机分组为空白组(10%空白血清)、顺铂组(10%空白血清+20 mg·L^(-1)顺铂)、补中益气汤组(10%含药血清+20 mg·L^(-1)顺铂)、ML385组(10%空白血清+5μmol·L^(-1)ML385+20 mg·L^(-1)顺铂)、补中益气汤联合ML385组(10%含药血清+5μmol·L^(-1)ML385+20 mg·L^(-1)顺铂)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)组(10%空白血清+5μmol·L^(-1)TBHQ+20 mg·L^(-1)顺铂)、补中益气汤联合TBHQ组(10%含药血清+5μmol·L^(-1)TBHQ+20 mg·L^(-1)顺铂),应用细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测各组顺铂半数抑制浓度(IC_(50))值并计算耐药指数(RI),流式细胞术检测各组细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针法检测各组活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组Nrf2、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、细胞色素C(CytC)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果:与顺铂组比较,补中益气汤组、ML385组、补中益气汤联合ML385组A549/DDP细胞顺铂的IC_(50)及RI均明显降低(P顺铂组、补中益气汤组、ML385组、补中益气汤联合ML385组A549/DDP细胞的凋亡率均明显升高(P顺铂组细胞内Nrf2表达明显升高(P顺铂组比较,补中益气汤组、ML385组、补中益气汤联合ML385组Nrf2表达均明显降低(P顺铂组比较,TBHQ组顺铂IC_(50)值及RI明显升高(P顺铂的IC_(50)值及RI再次明显降低(P顺铂耐药性。

关键词：补中益气汤非小细胞肺癌核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS) 线粒体途径细胞凋亡顺铂耐药

GANT61阻断Hedgehog信号通道调控肺腺癌A549/DDP细胞耐药的机制研究

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中国免疫学杂志 2019年第8期35卷 927-933页

作者：郑涛李华张黎张献全重庆医科大学附属第二医院肿瘤科重庆400010 重庆海吉亚肿瘤医院重庆400000

目的:探讨GANT61阻断Hedgehog信号通道调控肺腺癌A549/DDP细胞增殖、细胞周期及耐药的机制研究。方法:应用CCK8法检测顺铂(DDP)对肺腺癌细胞株A549和A549/DDP的半数抑制浓度(IC50),从而计算A549/DDP细胞的耐药指数;同时采用Western blo... 详细信息

目的:探讨GANT61阻断Hedgehog信号通道调控肺腺癌A549/DDP细胞增殖、细胞周期及耐药的机制研究。方法:应用CCK8法检测顺铂(DDP)对肺腺癌细胞株A549和A549/DDP的半数抑制浓度(IC50),从而计算A549/DDP细胞的耐药指数;同时采用Western blot检测A549、A549/DDP细胞中Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1蛋白的表达水平。用不同浓度的GANT61干预A549/DDP细胞后,CCK8法检测增殖活力。流式细胞术检测GANT61对A549/DDP细胞凋亡率和细胞周期的影响。Western blot检测GANT61对A549/DDP细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响。采用20μmol/L GANT61联合不同浓度的顺铂干预A549/DDP细胞,CCK8法检测各组细胞增殖抑制率变化及Western blot检测各组细胞中XRCC1蛋白的表达水平。结果:A549/DDP细胞的耐药指数为5. 34。A549/DDP细胞与A549细胞相比,Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1在蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P 顺铂用药后使A549/DDP细胞抑制率显著增加,呈协同效应,且伴随XRCC1蛋白表达下降(P耐药细胞A549/DDP中的表达明显高于顺铂敏感株A549,提示Gli1可能与肺腺癌顺铂耐药相关,且XRCC1蛋白在A549/DDP细胞高表达。故采用Gli1抑制剂GANT61能够明显抑制A549/DDP细胞增殖,阻滞细胞周期,并诱导细胞凋亡。体外试验中,GANT61与顺铂联合用药可以协同抑制增殖作用,其机制可能与下调XRCC1蛋白表达有关。

关键词： GANT61 Gli1 人肺腺癌细胞顺铂耐药

微小RNA-876-3p靶向肽基脯氨酰顺反异构酶A调控胃癌细胞增殖和顺铂耐药性的作用机制研究

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中国临床药理学杂志 2020年第17期36卷 2686-2690页

作者：徐龙健高建超钟轩孙敬国李东坤开滦总医院普通外科河北开滦063000

目的研究微小RNA-876-3p(miR-876-3p)通过调控肽基脯氨酰顺反异构酶A(PPIA)对胃癌细胞增殖和顺铂(DDP)耐药性的影响。方法体外培养胃癌细胞MKN28,用低浓度梯度递增方法诱导MKN28细胞形成顺铂耐药性,以构建顺铂耐药细胞株(MKN28/DDP)。MK... 详细信息

目的研究微小RNA-876-3p(miR-876-3p)通过调控肽基脯氨酰顺反异构酶A(PPIA)对胃癌细胞增殖和顺铂(DDP)耐药性的影响。方法体外培养胃癌细胞MKN28,用低浓度梯度递增方法诱导MKN28细胞形成顺铂耐药性,以构建顺铂耐药细胞株(MKN28/DDP)。MKN28和MKN28/DDP细胞各包含4个实验组:阴性对照组、第1转染组(转染si-PPIA)、第2转染组(转染miR-876-3p mimics)和第3转染组(转染si-PPIA+miR-876-3p inhibitor)。用顺铂1μg·mL^-1处理各组MKN28细胞,用顺铂5μg·mL^-1处理各组MKN28/DDP细胞,培养24 h。以实时荧光定量-PCR法检测各组细胞中miR-876-3p表达水平,蛋白质印迹法检测各组细胞中PPIA蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒法检测各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞细胞凋亡水平。结果miR-876-3p在正常胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞MKN28和MKN28/DDP中的相对表达量分别为1.01±0.21,0.41±0.15和0.32±0.11,MKN28与GES-1比较,差异有统计学意义(P顺铂处理MKN28,阴性对照组和第3转染组的细胞活力分别为(1.00±0.04)%,(0.65±0.03)%;这2组的细胞凋亡率(41.87±1.65)%,(68.98±4.12)%。5μg·mL^-1顺铂处理MKN28/DDP,阴性对照组和第3转染组的细胞活力分别为(1.01±0.02)%,(0.72±0.05)%;这2组的细胞凋亡率分别为(34.66±0.94)%,(56.71±3.03)%,组间比较差异均有统计学意义(均P顺铂处理MKN28细胞,阴性对照组、第1转染组和第3转染组的细胞活性分别为(1.01±0.03)%,(0.58±0.04)%和(0.97±0.02)%;这3组的细胞凋亡率分别为(39.96±2.01)%,(71.12±2.98)%和(45.14±2.47)%。以5μg·mL^-1顺铂处理MKN28/DDP细胞,这3组的细胞活性分别为(1.01±0.04)%,(0.63±0.06)%和(0.94±0.05)%;这3组的细胞凋亡率分别为(31.95±1.31)%,(62.88±5.63)%和(36.84±2.11)%。上述指标:第1转染组与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P顺铂的敏感性,其机制是通过靶向下调PPIA的表达从而降低胃癌细胞增殖、增加其凋亡。

关键词：微小RNA-876-3p 肽基脯氨酰顺反异构酶A 胃癌增殖顺铂耐药