METTL3在视网膜母细胞瘤中对顺铂耐药的作用及机制研究

作     者：郭惠峰 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：黄国富

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：METTL3 视网膜母细胞瘤细胞Y79 顺铂耐药 MDM2 BCL2 

摘      要：目的:研究METTL3基因在视网膜母细胞瘤细胞Y79及其耐顺铂细胞株Y79/DDP中表达情况,探讨METTL3在耐顺铂细胞株Y79/DDP中的作用及潜在的分子作用机制,为预防人视网膜母细胞瘤临床治疗中的顺铂抗性提供见解。方法:我们对ARPE-19（人正常视网膜色素上皮细胞）、Y79及Y79/DDP三个细胞系进行Real-Time PCR、Western Blot实验,验证METTL3为差异表达基因。将过表达或敲低METTL3基因的慢病毒载体转染到Y79中,构建过表达或敲低METTL3的稳转株,并通过Real-Time PCR、Western Blot实验检测其m RNA、蛋白表达水平。使用MTT实验检测不同浓度顺铂在Y79过表达及敲低METTL3时增殖的影响。通过Me RIP-seq及Me RIP-q PCR明确METTL3在Y79中的靶基因,进一步在体外通过Real-Time PCR、Western Blot、流式细胞学等实验检测METTL3对相关靶基因的调控作用。结果:在本研究中,我们发现METTL3在Y79、Y79/DDP中表达水平均上调;在Y79细胞中过表达METTL3促进其增殖,同时可增强其对顺铂的耐药,敲低METTL3则抑制细胞生长及其对顺铂的耐药;机制研究表明,METTL3在Y79中通过靶向MDM2促进其对顺铂的耐药,还可通过靶向铂类耐药相关基因BCL2,抑制Y79细胞凋亡,促进Y79对顺铂的耐药。结论:我们的研究结果显示METTL3在视网膜母细胞瘤化疗耐药中起重要作用,其可通过靶向铂类耐药相关基因MDM2、BCL2,调控Y79细胞对顺铂的耐药作用,METTL3可能作为视网膜母细胞瘤潜在的诊断生物标志物及治疗靶点。