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抗生素和干扰素

生物技术通报 1994年第3期10卷 67-69页

941049胶原水解物作为产黄青霉合成青霉紊的复合氮源〔英]/Leonhartsberger,5.…了***-nol一1993,30(8)一299一313〔译自DBA-1993,12(22),93一12663〕利用胶原水解物(Gelita一Bio一Tec)作为氮源测定了通过产黄青霉PS生产苯氧基甲基青霉素和生物量形成的最适条件。利用一计划的实验方案 (命名为Graeco一Latin平方技术)在振荡瓶培养物中进行。初步研究结果表明,达30%的普通复合氮源如棉籽粉能被胶原水解物替代,且青霉素产量未降低(0 .015/小时)。在中试规模试验中,利用30升振荡式发酵罐,相对空气饱和度50

关键词：大环内醋衍生物合成抗微生物合酶混合培养物放线紫红素阳离子交换层析棉籽粉阴离子交换层析革兰阳性细菌

苦瓜籽RIP的分离纯化及其对K562细胞作用的研究

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中华中医药学刊 2007年第1期25卷 81-84页

作者：熊术道尹丽慧李景荣韩义香章圣辉吴建波温博贵温州医学院附属第一医院医科所浙江温州325000 温州医学院附属第一医院急诊科浙江温州325000 汕头医科大学医学院分子生物研究室广东汕头515021

目的:采用强阳离子交换层析柱(SP Sepharose H igh Perform ance)分离纯化苦瓜籽R IP,并观察苦瓜R IP对人红白血病细胞株K562细胞的抗肿瘤活性。方法:采用强阳离子交换层析柱(SP Sepharose H igh Perform-ance)分离纯化苦瓜籽R IP,SDS-P... 详细信息

目的:采用强阳离子交换层析柱(SP Sepharose H igh Perform ance)分离纯化苦瓜籽R IP,并观察苦瓜R IP对人红白血病细胞株K562细胞的抗肿瘤活性。方法:采用强阳离子交换层析柱(SP Sepharose H igh Perform-ance)分离纯化苦瓜籽R IP,SDS-PAGE、IEF等实验鉴定苦瓜籽R IP的纯度;以一定浓度梯度的苦瓜籽R IP处理K562细胞72 h,CCK-8检测其对细胞生长的影响;流式细细术(AnnexinⅤ)、细胞形态学(光镜及电镜)等方法检测苦瓜R IP诱导K562细胞凋亡的产生。结果:应用强阳离子交换层析柱(SP Sepharose H igh Perform ance)来分离纯化苦瓜籽R IP,可以快速方便分离得到高纯度的苦瓜R IP,得率也较高;一定作用剂量的苦瓜R IP不仅具有抑制K562细胞生长的活性(9.1μg/mL)的作用,还可诱导K562细胞发生凋亡。结论:运用强阳离子交换层析柱(SPSepharose H igh Perform ance)分离纯化苦瓜R IP是便捷可行的;苦瓜R IP具有抗肿瘤的活性,其作用可能是通过诱导细胞发生凋亡来实现。

关键词：苦瓜核糖体失活蛋白阳离子交换层析 K562细胞细胞凋亡

幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌BIB发酵及纯化工艺研究

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成都医学院学报 2014年第5期9卷 538-544页

作者：潘兴王保宁杨靖李健春祝捷周永君王红仁李明远李婉宜四川大学华西基础医学与法医学院微生物教研室成都610041 四川万可泰生物技术有限责任公司成都610041 湖北医药学院微生物教研室十堰442000

目的初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌（BIB）的高密度发酵及其蛋白纯化工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,放大工艺至50L发酵罐中,对影响目的蛋白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种量、诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导持续时... 详细信息

目的初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌（BIB）的高密度发酵及其蛋白纯化工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,放大工艺至50L发酵罐中,对影响目的蛋白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种量、诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导持续时间及诱导剂添加方式等进行优化验证;并利用rBIB蛋白高等电点特性（pI=9.05）,在pH 7.0-7.5的磷酸盐缓冲液中目的蛋白带正电荷,采用阳离子交换层析进行纯化,对阳离子交换层析填料及纯化缓冲液的pH进行优化。结果经高密度发酵后BIB菌体产量为70g/L,蛋白表达量为32%;rBIB蛋白经阳离子交换层析纯化后其纯度为91.8%。结论该工艺的初步建立为深入研究rBIB蛋白性质及其规模化生产奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌疫苗高密度发酵阳离子交换层析尿素酶B亚单位

一种新型人血小板聚集抑制剂的纯化与初步活性鉴定

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湖南中医药大学学报 2008年第1期28卷 19-21页

作者：曾雄智徐敏梁宋平湖南师范大学蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室湖南长沙410081 中南大学第二附属医院血液科湖南长沙410083

目的从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化一种新型人血小板聚集抑制剂,并进行活性鉴定。方法采用阳离子交换与反相高效液相色谱法从敬钊缨毛蛛粗毒中分离到一种新型多肽组分,并命名为敬钊去整合素-I。采用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱测定分子... 详细信息

目的从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化一种新型人血小板聚集抑制剂,并进行活性鉴定。方法采用阳离子交换与反相高效液相色谱法从敬钊缨毛蛛粗毒中分离到一种新型多肽组分,并命名为敬钊去整合素-I。采用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱测定分子量,用人血制备富含血小板的血浆并加入敬钊去整合素-I,采用血小板聚集仪测定二磷酸腺苷ADP诱导血小板聚集作用。结果从敬钊缨毛蛛粗毒中分离到一种新型多肽组分,其相对分子质量为3 631.42,对血小板具有明显抑制作用,但它对血小板聚集的作用受剂量的影响很大,总的趋势是较低浓度时促进血小板的聚集,较高浓度时则抑制血小板的聚集。结论敬钊去整合素-I是一种源于蜘蛛粗毒的新型人血小板聚集抑制剂,但其对血小板的影响在高浓度与低浓度时产生的效应相反,其准确的作用机制还有待深入研究。

关键词：蜘蛛阳离子交换层析反相高效液相色谱质谱敬钊整合素-1 血小板聚集抑制活性鉴定

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Biochrom专用自动氨基酸分析系统

现代仪器 2003年第3期39卷 38-41,51页

作者：施纯辉安玛西亚中国有限公司北京100044

本文介绍Biochrom专用自动氨基酸分析系统的组成。该系统是目前中国市场上唯一获美国FDA豁免验证并符合联邦药物、食品和化妆品条款510(k)的氨基酸分析系统,已与国际接轨。

关键词： Biochrom专用自动氨基酸分析系统阳离子交换层析茚三酮柱后分析蛋白质水解液氧化蛋白质水解液生理体液

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抗生素和干扰素

生物技术通报 1993年第3期9卷 38-41页

关键词：青霉素类生物合成阳离子交换层析丁胺载体质粒乳链菌肽比活性重组大肠杆菌环状芽孢杆菌类似物

屋尘螨主要过敏原蛋白Der p1的分离纯化

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中华临床免疫和变态反应杂志 2021年第6期15卷 604-607页

作者：赵慧敏张丹丹陈晴秦凌钰何韶衡沈阳医学院公共卫生学院卫生化学教研室沈阳110034

目的分离纯化出屋尘螨中主要过敏原蛋白Der p1。方法使用PBS-T溶液对屋尘螨干粉中的过敏原蛋白进行粗提取,利用阳离子交换层析对经过透析后粗提取液中的Der p1进行分离纯化,采用30%的NaCl溶液(1.0 mol/L)进行洗脱。然后通过十二烷基硫酸... 详细信息

目的分离纯化出屋尘螨中主要过敏原蛋白Der p1。方法使用PBS-T溶液对屋尘螨干粉中的过敏原蛋白进行粗提取,利用阳离子交换层析对经过透析后粗提取液中的Der p1进行分离纯化,采用30%的NaCl溶液(1.0 mol/L)进行洗脱。然后通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对透析后洗脱液中的蛋白质进行鉴定。结果屋尘螨中有多条蛋白区带,其中相对分子质量25000为主要过敏原蛋白,屋尘螨通过阳离子交换层析纯化出相对分子质量25000的蛋白组,主要集中在Ⅲ峰。结论初步分离纯化及鉴定了屋尘螨过敏原蛋白Der p1,为临床过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。

关键词：屋尘螨 Der p1 阳离子交换层析

聚乙二醇修饰海葵神经毒素rhk2a的分离与纯化

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广东药学院学报 2009年第6期25卷 551-554页

作者：黄慧潘育方郭晓娟舒雅俊杨帆广东药学院药科学院广东广州510006

目的对聚乙二醇化海葵神经毒素（mPEG-rhk2a）修饰产物进行分离与纯化。方法将聚乙二醇（PEG）化反应所得混合产物超滤除盐后,采用SP-650S强阳离子交换层析柱和CM-650S弱阳离子交换层析柱进行分离纯化,收集不同NaCl离子浓度下的梯度洗脱... 详细信息

目的对聚乙二醇化海葵神经毒素（mPEG-rhk2a）修饰产物进行分离与纯化。方法将聚乙二醇（PEG）化反应所得混合产物超滤除盐后,采用SP-650S强阳离子交换层析柱和CM-650S弱阳离子交换层析柱进行分离纯化,收集不同NaCl离子浓度下的梯度洗脱液,经超滤除盐、冷冻干燥、SDS-PAGE电泳检测,确定分离纯化mPEG-rhk2a的色谱条件。结果在保证mPEG-rhk2a稳定性的前提下,随着缓冲液pH值的降低,2种阳离子交换柱与mPEG-rhk2a的结合量均增加;在同一pH值下,强阳离子交换柱的结合情况更好。用SP-650S强阳离子交换层析柱进行分离纯化时,洗脱液中溶液电导率在57 ms/cm时,mPEG-rhk2a能被洗脱下来,而且盐离子浓度梯度变化越缓,mPEG-rhk2a修饰产物各洗脱峰的分离度越高;用CM-650S弱阳离子交换层析柱进行分离纯化时,修饰产物mPEG-rhk2a主要在穿透峰中出现。结论使用SP-650S强阳离子交换层析柱,用pH4.0的0.02 mol/L醋酸盐缓冲液与含0.5 mol/LNaCl的pH4.0的0.02 mol/L醋酸盐缓冲液（后者比例变化为0%→50%）进行梯度洗脱,修饰产物mPEG-rhk2a与未修饰的rhk2a得到了很好的分离。

关键词：聚乙二醇化海葵神经毒素阳离子交换层析分离纯化

小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物与其受体结合关键氨基酸的鉴定

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血栓与止血学 2010年第6期16卷 259-263页

作者：郁婷婷刘宏景傅启华上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心检验科上海200127 上海交通大学医学院附属新华医院检验科

目的尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其受体(uPAR)在细胞表面介导多种生物学效应。本文目的是解析小鼠uPA蛋白结构中与其受体结合的关键氨基酸。方法包含小鼠uPA全长cDNA的质粒购于ATCC公司,小鼠cDNA序列进一步克隆至Puro-pMT表达载体。... 详细信息

目的尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其受体(uPAR)在细胞表面介导多种生物学效应。本文目的是解析小鼠uPA蛋白结构中与其受体结合的关键氨基酸。方法包含小鼠uPA全长cDNA的质粒购于ATCC公司,小鼠cDNA序列进一步克隆至Puro-pMT表达载体。用定点突变法构建各类uPA突变体表达质粒。表达质粒用磷酸钙转染至S2细胞中,用10μg/ml嘌呤霉素筛选稳定表达细胞。表达的重组蛋白分别用CM sephadex柱和sephadex G75柱纯化。纯化后的蛋白分别用SDS-PAGE和免疫印迹法鉴定。用表面等离子共振技术(SPR)检测重组uPA与uPAR的结合常数。结果用定点突变法成功构建小鼠uPA S22、Y23、K24、Y25、F26、S27、I29、R31、E41、S358分别突变为丙氨酸的突变体及R28、30、31突变为N28、H30、W31的突变体M3。经阳离子交换层析和分子筛纯化,重组蛋白的纯度均大于95%并能被小鼠uPA抗体所识别。结合试验表明野生型uPA和M3型uPA的KD值分别为0.467 nM和1.64 nM,10种点突变uPA的KD值范围为0.388 nM至36.5 nM。结论小鼠uPA中至少有7个氨基酸(Y23、K24、Y25、F26、S27、I29、R31)涉及小鼠uPA-uPAR的结合;Y23、Y25和F26是其中的关键氨基酸。

关键词：小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体结合关键氨基酸鉴定 Receptor Plasminogen Activator uPAR 突变体表达质粒点突变表面等离子共振技术重组蛋白 sephadex 阳离子交换层析细胞表面分子筛纯化生物学效应免疫印迹法稳定表达