检索结果-南通市图书馆

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡蛋清溶菌酶的提取纯化及抗菌活性的检测

黑龙江畜牧兽医 2017年第5期 135-137+294页

作者：雒志恒杨祎琦王永吉陕西理工大学维生素D生理与应用研究所

为了探索鸡蛋清中溶菌酶的提取、纯化方法及抗菌活性检测方法,试验首先采用724型弱酸性阳离子交换树脂对鸡蛋清溶菌酶进行提取,再通过（NH4）2SO4盐析、透析、调整透析液p H值等步骤对溶菌酶进行纯化,最后经真空冷冻干燥,得到白色溶菌... 详细信息

为了探索鸡蛋清中溶菌酶的提取、纯化方法及抗菌活性检测方法,试验首先采用724型弱酸性阳离子交换树脂对鸡蛋清溶菌酶进行提取,再通过（NH4）2SO4盐析、透析、调整透析液p H值等步骤对溶菌酶进行纯化,最后经真空冷冻干燥,得到白色溶菌酶成品;进一步将提纯后的样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行纯度鉴定,并进行了抗菌活性检测。结果表明:经离子交换层析和盐析纯化后,样品电泳条带清晰,抑菌圈清晰可见,通过该提取方法提纯的溶菌酶纯度达到电泳纯,且抑菌作用较好,特别是针对枯草芽孢杆菌具有显著的抑菌作用。

关键词：蛋清溶菌酶盐析 (NH4)2SO4 阳离子交换层析抗菌活性检测

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

牛神经生长因子的研制

中国生物制品学杂志 2002年第2期15卷 91-92,121页

作者：林刚徐诗嘉杨帮玲林娜宋颖武汉生物制品研究所

目的寻找新的制备神经生长因子的材料和方法。方法利用牛精液为原料，进行两次阳离子交换层析。结果获得了纯的牛神经生长因子，相对分子质量为30000，比活性为400000BU/mg，FPLC检测结果为一个峰，电泳检测纯度大于95％。结论可以... 详细信息

目的寻找新的制备神经生长因子的材料和方法。方法利用牛精液为原料，进行两次阳离子交换层析。结果获得了纯的牛神经生长因子，相对分子质量为30000，比活性为400000BU/mg，FPLC检测结果为一个峰，电泳检测纯度大于95％。结论可以从牛精液中制备神经生长因子。

关键词：牛精液神经生长因子阳离子交换层析人/GF 纯化

一种快速分离纯化金葡萄球菌肠毒素C_2的方法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

沈阳药科大学学报 2009年第7期26卷 574-578页

作者：李洪义陈彦竹杨宏丽陈晓辉毕开顺沈阳药科大学药学院辽宁沈阳110016 沈阳协合生物制药股份有限公司辽宁沈阳110179

目的建立一种简单快捷的方法,用来从金黄色葡萄球菌的发酵液(以下简称金葡液)中纯化分离肠毒素C2(staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)。方法金葡液首先经超滤浓缩,之后再分别经阳离子交换层析和阴离子交换层析进行选择性分离SEC2,用SD... 详细信息

目的建立一种简单快捷的方法,用来从金黄色葡萄球菌的发酵液(以下简称金葡液)中纯化分离肠毒素C2(staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)。方法金葡液首先经超滤浓缩,之后再分别经阳离子交换层析和阴离子交换层析进行选择性分离SEC2,用SDS-PAGE电泳、HPLC法检测纯度及相对分子质量,飞行质谱测定精确分子质量,对其进行N-端氨基酸序列分析。结果分离得到的SEC2电泳纯及色谱分析纯度均达到质量分数98%以上,经各项理化指标检测均与文献一致,在等电点上表现出微不均匀性,等电点pI为7.49和6.74,该蛋白的分子质量为27.58 ku,N-端氨基酸序列分析与文献报道的SEC2序列一致(ESQPDPTPDELHKSS),最大吸收波长为277.5 nm。结论用该方法得到的SEC2纯度高,回收率质量分数高达50%,适宜于大批量制备SEC2。

关键词：金葡菌肠毒素C2(SEC2) 阴离子交换层析阳离子交换层析微不均匀性

重组人乳铁蛋白转基因奶山羊的制备及表达产物提取和抗菌活性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

重组人乳铁蛋白转基因奶山羊的制备及表达产物提取和抗菌活性研究

作者：徐晟扬州大学

学位级别：硕士

乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)是一种铁结合性糖蛋白,因其生物活性功能广泛,已被应用于医药开发、食品加工、保健品生产等领域。目前,国内外市场上销售的乳铁蛋白及其相关产品主要从牛乳中分离纯化所得。因其来源的限制,天然乳铁蛋白的产量... 详细信息

乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)是一种铁结合性糖蛋白,因其生物活性功能广泛,已被应用于医药开发、食品加工、保健品生产等领域。目前,国内外市场上销售的乳铁蛋白及其相关产品主要从牛乳中分离纯化所得。因其来源的限制,天然乳铁蛋白的产量已经无法满足人们日益增长的需求。因此,利用转基因技术生产重组人乳铁蛋白(RecombinentHuman Lactoferrin,rhLF)作为天然乳铁蛋白的替代品,已经成为研究和开发乳铁蛋白的主要途径。本研究中,使用本实验室保存的乳腺特异性表达重组人乳铁蛋白载体菌株,通过扩增后获得乳腺特异性表达载体(PCL25/hLF),双酶切并切胶回收目的基因片段(zpz-1);利用细胞显微注射技术,将zpz-1注射入雌性奶山羊胎儿成纤维细胞(N31);通过G418筛选,获得16株胎儿成纤维细胞单克隆细胞株。经PCR检测,其中7株整合PCL25/hLF基因。以其中1株(N31zpz-1-13)作为供核细胞,使用核移植、电融合等技术获得重构胚140枚,移植136枚,共移植9只受体,其中2只受体于移植后第22周分娩,获得2只雌性奶山羊,分别编号为zp-71和zp-72,只有zp-71健康成长至体成熟。经PCR检测,zp-71整合PCL25/hLF基因。待zp-71体成熟后发情时进行人工配种,于配种后第22周分娩,连续收集30天羊乳。ELISA检测zp-71羊乳清中rhLF的表达水平;使用AKATA蛋白纯化系统,运用阳离子交换层析技术分离纯化rhLF;以青链霉素、人初乳浓缩乳清为阳性对照,以正常羊乳浓缩乳清为阴性对照,以纯化的rhLF(lmg)、转基因奶山羊zp-71的浓缩乳清为实验组,制备药敏纸片,进行抑菌试验。ELISA检测zp-71乳清中rhLF的结果显示:转基因奶山羊zp-71分娩后连续30天的乳清中均含有rhLF。对比天然乳铁蛋白的表达特点,本验室保存的PCL25/hLF表达载体(含β-casin与CMV复合启动子)能在转基因羊乳腺中有效稳定地表达。离子交换层析的结果显示:以0.5MNaCl-HAC-Tris作为洗脱液进行洗脱,得到两个洗脱峰。SDS-PAGE电泳结果及凝胶成像结果显示:洗脱峰Ⅰ中含有多条带,洗脱峰Ⅱ为单一条带;Western Blotting结果显示:洗脱峰Ⅱ中的产物为rhLF。抑菌试验结果显示:转基因奶山羊zp-71的乳清及其纯化产物均具有抑菌活性,4h的抑菌圈分别为1.70cm和1.30cm。本研究表明:应用实验室前期构建的PCL25/hLF乳腺特异性表达载体制备的转基因山羊具有乳腺特异表达rhLF功能;并且,重组人乳铁蛋白表达产物可以从转基因羊乳汁中提取;提取获得的rhLF和浓缩的转基因乳清抑菌试验显示均有抑菌活性。由此证明:人乳铁蛋白基因转基因山羊乳腺中表达的重组人乳铁蛋白在乳汁中单独存在,而且具有与天然人乳铁蛋白相似的抗菌活性。研究也表明:运用以HAC-Tris-NaCl为缓冲体系进行洗脱的阳离子交换层析技术可有效提取转基因羊乳中的rhLF,这一结果在国内外尚未见报道。同时此方法的建立也为转基因奶山羊乳中重组人乳铁蛋白的提取建立了技术基础,为今后工业化大规模分离纯化rhLF提供参考。

关键词：重组人乳铁蛋白阳离子交换层析乳腺生物反应器转基因克隆奶山羊

基因重组人源基质细胞衍生因子1α的色谱分离纯化

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基因重组人源基质细胞衍生因子1α的色谱分离纯化

作者：侯骏西北大学

学位级别：硕士

血管生长影响着多种疾病的生理病理过程,如临床上可检测到的实体瘤的生长、转移以及近十几年患病率逐年增高的心脑血管疾病等都有依赖于血管生长过程。目前,尽管人们已经开发了不少能直接刺激血管的促血管生成因子,如VEGF、FGF、 Angiop... 详细信息

血管生长影响着多种疾病的生理病理过程,如临床上可检测到的实体瘤的生长、转移以及近十几年患病率逐年增高的心脑血管疾病等都有依赖于血管生长过程。目前,尽管人们已经开发了不少能直接刺激血管的促血管生成因子,如VEGF、FGF、 Angiopoietin-I和Angiogenin等,但由于它们都可能会引起经一氧化氮介导的低血压、血管畸形以及血管通透性增加和渗漏等,致使无法对它们进行新药开发或应用研究。而基质细胞衍生因子la (stromal cell-derived factor-1α, SDF-1α)是1994年Nagasawa等在小鼠骨髓基质细胞系pA6分泌的细胞因子中发现的一种趋化因子,它可以通过间接影响骨髓来调节造血过程从而减少直接作用药物的缺陷,并通过对人体内部刺激因子的调节来进行更加有效地治疗。尽管它不能直接促进血管新生,但可以聚集具有促血管新生作用的多种细胞到缺血局部。因此,SDF-1α是一种潜在的治疗心肌缺血、脑缺血性以及溃疡等疾病的药物。本文在我们前期工作的基础上,对基因重组人源基质细胞衍生因子1α的分离纯化过程进行了研究。结果表明,重组菌*** BL21(DE3)/pET15b-SDF-1α经发酵培养、破菌和包涵体复性后,经过SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换和Sephadex G-75凝胶排阻两步柱层析分离纯化,可以得到具有生物活性和高纯度的SDF-1α。SDS-PAGE蛋白电泳和高效凝胶色谱分析结果表明,所得到的SDF-1α的纯度在96%以上;单核细胞THP-1的Transwell细胞小室培养结果表明,所得到的SDF-1α对THP-1细胞具有趋化活性。经两步柱层析分离纯化后,SDF-1α的收率约为14%。

关键词：基质细胞衍生因子1α 分离纯化阳离子交换层析凝胶排阻层析

猪圆环病毒2型病毒样颗粒性疫苗的制备与免疫评价

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

猪圆环病毒2型病毒样颗粒性疫苗的制备与免疫评价

作者：刘肖河南农业大学

学位级别：硕士

猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus 2,PCV2)与断奶仔猪多系统衰竭综(Postweaning mμLtisystemic wasting syndrome,PMWS)的发生密切相关,是其主要原发病原。PCV2还与猪皮炎肾病综合征、猪A2型先天性震颤、猪呼吸道病综合征等传染性疾... 详细信息

猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus 2,PCV2)与断奶仔猪多系统衰竭综(Postweaning mμLtisystemic wasting syndrome,PMWS)的发生密切相关,是其主要原发病原。PCV2还与猪皮炎肾病综合征、猪A2型先天性震颤、猪呼吸道病综合征等传染性疾病的发生相关。PMWS主要流行于58周龄的断奶仔猪,致死率较高,其临床症状主要呈现为:仔猪生长速率降低、体重减轻、呼吸急迫、皮炎、黄疸、淋巴结病变肿大等。PCV2在世界范围内的感染与流行,给养猪业造成了巨大的危害与经济损失。目前对PCV2的防控主要依靠疫苗,国内外也先后注册了全病毒灭活苗、重组嵌合苗和亚单位疫苗,在预防PCV2感染中发挥了重要作用。由于进口疫苗价格昂贵,而国产灭活疫苗效果仍不够理想,因而研制高效、廉价、安全的新型PCV2亚单位疫苗的需要已日益迫切。基于PCV2结构蛋白(Capsid)能在体外自组装成病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的特性,我们采用大肠杆菌高密度发酵的方法对重组的Cap蛋白进行了可溶性表达,并纯化制备成病毒样颗粒,为新型PCV2 VLPs亚单位疫苗的研制奠定了基础,本研究主要分为以下几个部分:(1)将含有pET28a-ORF2质粒的大肠杆菌菌株BL21DE3,进行了高密度发酵试验,并对发酵条件进行了摸索,建立了比较稳定的10 L发酵罐体系,收获湿菌体量达93.9±1.9g/L;且得到的重组Cap蛋白以可溶形式存在,为重组Cap蛋白的纯化及PCV2疫苗的研制奠定了基础。(2)将高密度发酵所得菌体进行高压均质破碎。所得上清用硫酸铵沉淀法进行初步除杂,然后采用IEC SP FF阳离子交换层析柱进行纯化,并对相应条件进行了摸索,得到相对纯度达85%以上的Cap蛋白,并对Cap蛋白体外组装病毒样颗粒(VLPs)条件进行了摸索,成功制备了与PCV2天然病毒结构相似的VLPs。(3)建立评价PCV2 Cap蛋白体外稳定性的双抗夹心ELISA检测,使用该方法检测了不同贮存温度、不同反复冻融次数、不同保护剂等条件下Cap蛋白的活性变化。结果显示,Cap蛋白在25°C以下贮存时,其活性保持稳定;贮存时不同温度间变换对蛋白稳定性影响较大;在甘氨酸和甘油2种蛋白保护剂存在条件下蛋白活性的稳定性增强。(4)利用高纯度Cap蛋白组装的VLPs作为抗原,分别免疫Balb/c小鼠和仔猪;通过检测抗体效价及动物的生产性能对疫苗免疫进行评价。小鼠免疫评价实验中,VLPs抗原分别与50V矿物油、IMS1313及卡波姆等佐剂按一定比例混合,制备PCV2重组VLPs疫苗;分别将生理盐水、勃林格猪圆环病毒2型疫苗分别设为阴性和阳性对照,对接种后12周内抗体效价进行检测与分析。结果显示,同种剂量情况下,油佐剂免疫效果与阳性对照组相当,抗体效价于第2周开始持续上升,并长期维持在较高水平,而水性佐剂表现较差。进行两次仔猪临床生产性能评价,每次选取150头仔猪,分为50V油佐剂疫苗注射组、生理盐水组、勃林格疫苗组,分别在15日龄注射1mL,记录生产性能。其中第一批免疫生理盐水组增重率高于勃林格疫苗组和50V油佐剂疫苗组,分别为200%、189%、180%,疫苗免疫效果不理想;而在第二批免疫中勃林格疫苗组和50V油佐剂疫苗组增重率高于生理盐水组,分别为296%、304%、252%;表明配制的重组VLPs油佐剂亚单位疫苗有相对较好的免疫效果。本研究的意义在于成功建立了能够可溶表达PCV2重组Cap蛋白的大肠杆菌高密度发酵体系;纯化制备纯度较高的Cap蛋白,并对其进行了外稳定性进行了探索,且成功制备出了PCV2的VLPs;将所得VLPs与各类佐剂配合制成了不同的亚单位疫苗,并对其免疫效果进行了评价分析,最终确定50V油佐剂疫苗具有良好的免疫效果,为PCV2亚单位疫苗的开发奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白高密度发酵阳离子交换层析病毒样颗粒蛋白稳定性免疫原性

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

重组人干扰素-α2b分离纯化的研究

重组人干扰素-α2b分离纯化的研究

作者：韩霭辰天津大学

学位级别：硕士

干扰素是由不同细胞产生的可溶性糖蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能。Ⅰ型干扰素中的干扰素-α因具有很强的抗病毒活性而被用于治疗慢性乙肝和丙肝感染。干扰素治疗中最大的缺点是具有极短的半衰期，这就降低了干扰素的药效和... 详细信息

干扰素是由不同细胞产生的可溶性糖蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能。Ⅰ型干扰素中的干扰素-α因具有很强的抗病毒活性而被用于治疗慢性乙肝和丙肝感染。干扰素治疗中最大的缺点是具有极短的半衰期，这就降低了干扰素的药效和生物利用性。目前，提高干扰素半衰期的方法是采用聚乙二醇对干扰素-α2进行蛋白修饰。由Bolder Biotechnology, nc生物技术公司构建的含有干扰素-α基因的质粒转化进大肠杆菌W3110，IPTG诱导后经SDS-PAGE分析，表达产物的分子量为19KDa左右，并且蛋白以不溶性的包涵体形式存在。利用超声破碎对菌体细胞进行破碎可以提取包涵体，使用6mol/L盐酸胍对包涵体进行溶解变性，变性蛋白缓缓注入复性溶液稀释20倍，4℃静置48h后即可复性。采用疏水相互作用层析分离重组人干扰素-α2b，去除干扰素样品中的二聚体，得到高纯度的干扰素用于进一步的研究。首先采用阳离子交换层析纯化复性重组人干扰素-α2b，去除了大部分的杂蛋白，然后采用疏水相互作用层析纯化重组人干扰素-α2b，去除复性过程中产生的错误折叠体和二聚体，并考察盐浓度、pH值、流速和洗脱液中尿素对疏水相互作用层析纯化效果的影响。最终确定硫酸铵初始浓度1.2mol/L、缓冲液pH值6.0、流速2.5mL/min、洗脱液中添加尿素浓度为2mol/L时疏水相互作用层析纯化效果最佳。最终得到的重组人干扰素-α2b非还原型SDS-PAGE电泳均呈单一条带。本文确定了疏水层析纯化重组人干扰素-α2b的最优条件，成功提取到具有高活性、高纯度的重组人干扰素-α2b纯品，样品回收率达到63.07%。

关键词：重组人干扰素-α2b 包涵体纯化阳离子交换层析疏水相互作用层析

Purification of Antimicrobial Peptide from Antarctic Krill (Euphausia superba) and its Function Mechanism

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Journal of Ocean University of China 2013年第3期12卷 484-490页

作者： ZHAO Ling YIN Bangzhong LIU Qi CAO Rong Department of Food Engineering and Nutrition Yellow Sea Fisheries Research InstituteChinese Academy of Fishery Sciences

The preliminary purification and antimicrobial mechanism of antimicrobial peptide from Antarctic Krill were studied in this *** results showed that the molecular weight range of antimicrobial polypeptide(CMCC-1) obtained by cation exchange chromatography was between 245-709D as detected by molecular sieve chromatography,and the minimum inhibition concentration(MIC) of CMCC-1 against Staphylococcus aureus was 5.0 mg *** antimicrobial mechanism of CMCC-1 was studied with *** as indicator *** with control group,the results of the experimental group in which *** was treated with CMCC-1 were as follows: 1) CMCC-1 could inhibit cell division at logarithmic phase.2) The protein and reducing sugar content,and the conductivity of culture medium increased,and the activity of alkaline phosphatase and β-galactosidase could be detected in the culture medium.3) Observation under scanning electron microscope revealed that somatic morphology became irregular,and then somatic surface became *** cell became much smaller,and most somatic cells *** boundary between cells became dim and finally fused as a whole.4) Observation under transmission electron microscope showed that the surface of *** became rough and the reproducing ability was *** cell wall became thin and the cytoplasm *** inside cell leaked out,which caused cells death.5) SDS-PAGE analysis showed that some bands disappeared,and the residual bands became vague.6) The genomic DNA electrophoresis results showed that the genomic DNA bands of *** were not degraded but the brightness significantly ***,it is supposed that CMCC-1 could destroy the cell wall and membrane of ***,increase the cell membrane permeability and the leaking-out of intracellular substances,and thus cause the death of ***.

关键词：南极磷虾抗菌机理抗菌肽金黄色葡萄球菌纯化 SDS-PAGE分析阳离子交换层析基因组DNA

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

地热田碱性蛋白酶菌株的选育与酶性质的研究

漳州师范学院学报（自然科学版） 2011年第1期24卷 48-55页

作者：黄家福潘裕添陈俊玉林荣榕徐宝丹余金富福建漳州师范学院生物科学与技术系福建漳州363000 东山出入境检验检疫局福建漳州363401 福建福州市第四十中学福建福州350001 福建漳州科人生物技术开发有限公司福建漳州363000

从温泉附近土样中成功分离到一株高温碱性蛋白酶产生菌株H-1,经初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus.)菌株H-1最佳产酶的发酵时间为67.5h,该酶在30～70℃酶活性随温度升高而增强,70℃酶活性达到最高,在pH7.0～11.0范围内较稳定,从菌株H-1液体... 详细信息

从温泉附近土样中成功分离到一株高温碱性蛋白酶产生菌株H-1,经初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus.)菌株H-1最佳产酶的发酵时间为67.5h,该酶在30～70℃酶活性随温度升高而增强,70℃酶活性达到最高,在pH7.0～11.0范围内较稳定,从菌株H-1液体发酵液中提取粗酶液,经CMC-I阳离子交换层析和SepHadex G-75凝胶层析,得到单一组分;通过Native-PAGE、SDS-PAGE电泳鉴定,粗酶至少含有3种碱性蛋白酶同工酶;单组分碱性蛋白酶的比活力为3875U,相对分子量约为31KDa.

关键词：碱性蛋白酶同工酶阳离子交换层析凝胶层析地热田