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钙周期素结合蛋白（CacyBP）在胃癌细胞多药耐药性形成中的作用

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钙周期素结合蛋白（CacyBP）在胃癌细胞多药耐药性形成中的作用

作者：程翌第四军医大学

学位级别：硕士

胃癌是我国最常见的肿瘤之一，化疗仍是目前肿瘤治疗的主要手段。肿瘤细胞多药耐药性(MDR)的存在是影响临床肿瘤病人化疗效果的主要障碍。肿瘤细胞多药耐药性的形成是一个多分子参与的复杂过程，目前并未完全阐明其中机制。我们以前的... 详细信息

胃癌是我国最常见的肿瘤之一，化疗仍是目前肿瘤治疗的主要手段。肿瘤细胞多药耐药性(MDR)的存在是影响临床肿瘤病人化疗效果的主要障碍。肿瘤细胞多药耐药性的形成是一个多分子参与的复杂过程，目前并未完全阐明其中机制。我们以前的研究发现，在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR中，钙周期素结合蛋白(CacyBP)基因在mRNA水平显著高表达。但CacyBP基因在蛋白水平表达是否增高以及它是否在胃癌细胞多药耐药性形成过程中发挥作用还不清楚，本研究对此进行了初步探讨。目的：制备抗CacyBP多克隆抗体，从蛋白水平研究CacyBP在胃癌细胞多药耐药性形成过程中表达及亚细胞定位的变化，探讨其参与细胞耐药的可能机制。同时观察CacyBP在胃癌组织和正常胃组织中的表达情况。方法：(1)构建CacyBP基因原核表达载体并转化至***，IPTG诱导CacyBP融合蛋白的表达;(2)以固化Ni吸收色谱法纯化目的蛋白;(3)以表达的融合目的蛋白为抗原免疫小鼠制备抗CacyBP抗血清;(4)Western blot方法检测CacyBP在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR及其亲本细胞系SGC7901中的表达情况;(5)细胞免疫荧光技术检测了CacyBP在SGC7901/ADR细胞和SGC7901细胞中亚细胞定位;(6)激光扫描共聚焦显微镜技术检测了SGC7901/ADR细胞和SGC7901细胞中游离钙离子浓度;(7) 第四军医大学硕士学位论文免疫组织化学和组织芯片技术观察了CacyBP在胃癌组织和为正常组织中的表达情况，同时观测了Ca。yBP的表达和胃癌临床病理资料的关系。结果:(l)成功表达出重组CacyBP融合蛋白，表达量约占菌体总蛋白的10%;(2)用固化Ni’十吸收色谱法得到了纯度很高的融合目的蛋白;(3)制备出特异性较高的抗CacyBP抗血清;(4) CacyBP在胃癌耐药细胞系SGC79OI/ADR中的表达高于其亲本细胞系Soc79ol:(5)CaeyBP在SGC79ol细胞中主要分布于胞浆中，而在耐药细胞系SGC7901/ADR中胞浆和胞核都有分布;(6)耐药细胞SGC7901/ADR内游离钙离子浓度明显高于其亲本细胞 SGC7901;(7) CacyBP在胃癌组织中的表达强于胃正常组织，但未发现CacyBP的表达和胃癌组织的何种临床病理相关。结论:(1)胃癌细胞多药耐药性形成过程中CacyBP的表达和亚细胞定位都发生了改变，提示 CacyBP可能与胃癌细胞耐药性的形成有关;(2) CacyBP在胃癌细胞耐药性形成过程中的变化可能和胞内C扩+浓度变化有关;(3) Ca。yBP在胃癌组织中表达核正常组织中的表达不同，提示它在胃癌发生过程中可能也发挥一定的作用。

关键词：钙周期素结合蛋白多药耐药性 S100蛋白家族泛素-蛋白连接酶

钙周期素结合蛋白与乳腺癌新辅助化疗疗效及预后的相关性分析

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钙周期素结合蛋白与乳腺癌新辅助化疗疗效及预后的相关性分析

作者：崔茹婷青岛大学

学位级别：硕士

目的:通过了解乳腺癌中钙周期素结合蛋白(Cacy BP/SIP)的表达并回顾性分析患者的临床病例资料,研究Cacy BP/SIP与新辅助化疗疗效及远期预后的关系,期望为临床中选择个体化治疗方案和提高乳腺癌新辅助化疗有效率提供有重要参考价值的临... 详细信息

目的:通过了解乳腺癌中钙周期素结合蛋白(Cacy BP/SIP)的表达并回顾性分析患者的临床病例资料,研究Cacy BP/SIP与新辅助化疗疗效及远期预后的关系,期望为临床中选择个体化治疗方案和提高乳腺癌新辅助化疗有效率提供有重要参考价值的临床数据。方法:选取2016年1月至2017年12月期间,由青岛大学附属医院乳腺病诊疗中心收治并接受新辅助化疗的乳腺癌患者110例,回顾性收集所有患者的住院及门诊随访资料。采取En Vision法对化疗前穿刺肿瘤标本中Cacy BP/SIP的表达水平进行检测,以染色强度及阳性细胞占比的综合评分界定Cacy BP/SIP的高、低表达。应用χ检验及Spearman相关性分析对无序分类资料进行两组或多组间比较,探讨与Cacy BP/SIP表达状态相关的肿瘤临床病理指标。对新辅助化疗后治疗反应的评价引入了临床及病理评估系统,应用χ检验及Fisher确切概率法对疗效相关的参数进行了初步筛选,二元Logistic回归法对Cacy BP/SIP与疗效的关联进行多因素分析。通过Kaplan-Meier法和Log-rank检验对患者无病生存率进行统计与比较,最后对单因素分析筛选的变量进行多因素Cox回归分析,探讨乳腺癌患者无病生存(DFS)的独立影响因素。结果:1.本研究共选入110例乳腺癌患者,免疫组化结果显示Cacy BP/SIP高表达(评分>5分)71例(64.5%),低表达(评分≤5分)39例(35.5%)。χ检验结果提示,Cacy BP/SIP高表达与肿瘤组织学分级高(χ=7.314,P=0.026)、临床淋巴结(N)分期晚(χ=8.870,P=0.012)、临床TNM分期晚(χ=7.099,P=0.008)明显相关。Spearman相关性分析进一步验证了上述因素间的相关性:Cacy BP/SIP与组织学分级(r=0.239,P素受体表达、分子分型等)存在显著相关性(P>0.05)。2.新辅助化疗后有85例乳腺癌患者实现了临床客观缓解,客观缓解率为77.3%(85/110),疾病控制率为94.5%(104/110),病理完全缓解(p CR)率达14.5%(16/110)。单因素分析初步筛选了临床客观缓解的相关变量,包括Cacy BP/SIP、原发灶最大径、临床N分期、人表皮生长因子受体(HER-2)表达及分子分型;二元Logistic多因素回归分析发现Cacy BP/SIP(P=0.039,OR=0.201,95%CI:0.048～0.845)、原发灶最大径(P=0.007,OR=0.152,95%CI:0.039～0.595)以及HER-2表达(P=0.006,OR=4.697,95%CI:1.561～14.132)是新辅助化疗客观缓解的独立影响因素。单因素分析初步筛选的p CR相关变量包括Cacy BP/SIP、临床N分期及雌激素受体(ER)表达;二元Logistic回归分析结果表明Cacy BP/SIP(P=0.038,OR=0.268,95%CI:0.077～0.852)及ER表达(P=0.034,OR=0.218,95%CI:0.051～0.857)是p CR的独立影响因素。3.生存预后方面,随访患者总体无病生存率为89.1%(98/110),Cacy BP/SIP低表达组远期无病生存明显优于Cacy BP/SIP高表达组(92.3%vs.87.3%,χ=4.824,Log rank P=0.028);COX回归模型多因素分析后发现Cacy BP/SIP(P=0.154,HR=0.339,95%CI:0.074～1.546)并不是DFS的独立影响因子,仅p CR与其显著相关(P=0.043,HR=0.216,95%CI:0.014-0.758)。结论:Cacy BP/SIP异常上调与乳腺癌恶性进展关系密切,高表达是新辅助化疗后临床及病理疗效的独立危险因素;Cacy BP/SIP低表达者无病生存明显优于高表达者,但其对生存结局的独立预测价值有待进一步研究。

关键词：乳腺癌钙周期素结合蛋白新辅助化疗化疗疗效预后

钙周期素结合蛋白在创伤性脑损伤中的表达及意义

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钙周期素结合蛋白在创伤性脑损伤中的表达及意义

作者：梁明第四军医大学

学位级别：硕士

目的：运用头颅瞬间侧向旋转致伤装置制作创伤性脑损伤（traumaticbrain injury, TBI）的大鼠模型，探讨创伤性脑损伤后海马钙周期素结合蛋白(calcyclin binding protein,CacyBP)在不同损伤时间点的表达变化规律，以及CacyBP与大鼠学习... 详细信息

目的：运用头颅瞬间侧向旋转致伤装置制作创伤性脑损伤（traumaticbrain injury, TBI）的大鼠模型，探讨创伤性脑损伤后海马钙周期素结合蛋白(calcyclin binding protein,CacyBP)在不同损伤时间点的表达变化规律，以及CacyBP与大鼠学习记忆功能的关系，旨在深入认识TBI的神经元退变机制，以期为临床诊治提供有价值的实验依据。方法：健康雄性SD大鼠，清洁级，体重（200～225g），总计120只。随机选取60只大鼠，按随机数字表分为正常对照组（10只）和TBI组（50只）;运用头颅瞬间侧向旋转致伤装置制作大鼠TBI模型，并按伤后大鼠处死时间分为6h、24h、72h、7d、14d共5个亚组（每组10只）。采用免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）及蛋白印迹（western blotting）方法检测CacyBP在大鼠海马区的分布情况及其在脑损伤后的表达变化规律。另取60只大鼠进行随机化分组：对照组（10只）和损伤组（50只），各损伤时间点每组10只。采用头颅瞬间侧向旋转致伤装置制作大鼠TBI模型，首先制作14d组大鼠TBI模型，一周后制作7d组，其后依次制作72h组、24h组、6h组模型，6h组模型制作完成后，即开始进行Morris水迷宫检测。通过Morris水迷宫实验检测各损伤时间点大鼠寻找并爬上隐藏平台的时间（逃避潜伏期，escape latency）及原有平台停留时间（stay-time at the in-waterplate），分析创伤性脑损伤后大鼠空间学习记忆功能的变化规律。实验中所得数据均以均数±标准差（x|-±SD）表示，应用社会科学统计软件包（StatisticalPackage for the Social Sciences, SPSS)14.0软件进行t检验和方差分析，差异显著性水平定为p0.05）。Morris水迷宫结果提示:大鼠创伤性脑损伤后存在明显的空间学习记忆功能障碍，6h组逃避潜伏期较对照组明显延长（p0.05）。结论：创伤性脑损伤后早期（6h），大鼠海马出现CacyBP表达量明显下降，随存活期延长CacyBP表达量逐渐升高，至损伤后14d，CacyBP表达量逐渐恢复对照组水平。CacyBP先下降后逐渐升高恢复正常的表达趋势，与大鼠TBI后学习记忆严重障碍到逐渐恢复的变化趋势相一致，高度提示两者之间存在一定联系;据此推测，CacyBP可能是创伤性脑损伤后影响神经元退变及认知功能改变的关键分子之一。

关键词：创伤性脑损伤钙周期素结合蛋白海马认知障碍

大鼠创伤性脑损伤后脑组织钙周期素结合蛋白的表达及意义

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中华创伤杂志 2011年第6期27卷 559-562页

作者：梁明贺晓生费舟章翔顼红雨霍军丽陈晓燕第四军医大学附属西京医院神经外科西安710032

目的探讨大鼠创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）后脑组织中钙周期素结合蛋白（calcyclin binding protein，CacyBP）的表达规律及意义。方法雄性sD大鼠60只，按随机数字表法分为正常对照组（10只）和TBI组（50只）；采用头... 详细信息

目的探讨大鼠创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）后脑组织中钙周期素结合蛋白（calcyclin binding protein，CacyBP）的表达规律及意义。方法雄性sD大鼠60只，按随机数字表法分为正常对照组（10只）和TBI组（50只）；采用头颅侧向旋转致伤方法制作TBI模型，并按伤后大鼠处死时间分为6，24，72h、7，14d共5个亚组，每组10只。采用免疫组化方法检测CacyBP在大鼠脑组织中的表达变化规律和分布情况。CacyBP阳性结果判断标准以细胞浆内出现棕黄染色颗粒为阳性，反之为阴性。结果大鼠脑组织中CacyBP主要分布在海马、齿状回及皮层下神经元的胞浆中。与正常对照组的CacyBP高表达比较，TBI后6h，其表达量明显减少，为最低值（P〈0．01），随后表达量逐渐递增，至损伤后14d其表达量恢复高值，与正常对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论在TBI后，CacyBP出现一个表达低峰，提示在不同机制影响下其可能对脑损伤的发生、发展发挥重要作用。

关键词：脑损伤海马齿状回钙周期素结合蛋白

钙周期素结合蛋白促进胃癌细胞迁移侵袭和MMP-2、MMP-9、p-ERK1/2、p-AKT水平上调

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中国组织化学与细胞化学杂志 2019年第2期28卷 134-141页

作者：张萌张向东夏永欣刘晓政南阳市中心医院消化科

目的探讨钙周期素结合蛋白(calcyclin binding protein/Siah-1-interacting protein, CacyBP/SIP)对胃癌细胞侵袭迁移的影响和潜在机制。方法采用免疫组织化学和Western blot方法检测不同T分期胃癌组织中CacyBP/SIP水平;Western blot检测胃癌细胞中CacyBP/SIP水平;MKN-45细胞转染si-CacyBP/SIP与Ad-CacyBP/SIP后,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭情况,Western blot检测MMP-2、MMP-9和p-ERK1/2、p-AKT水平。结果 CacyBP/SIP在胃癌组织和胃癌细胞中高表达;胃癌组织中CacyBP/SIP表达水平与T分期呈正相关;敲减CacyBP/SIP抑制MKN-45细胞的迁移侵袭能力和MMP-2、MMP-9、p-ERK1/2、p-AKT蛋白表达水平;过表达CacyBP/SIP促进MKN-45细胞迁移侵袭能力和MMP-2、MMP-9、p-ERK1/2、p-AKT蛋白表达水平。结论 CacyBP/SIP对胃癌转移侵袭能力的促进作用可能与其上调MMP-2、MMP-9、p-ERK1/2、p-AKT水平有关。

关键词：钙周期素结合蛋白胃癌侵袭迁移

钙周期素结合蛋白(CacyBP)在创伤性脑损伤中的意义和机制

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中华神经外科疾病研究杂志 2012年第4期11卷 289-292页

作者：贺晓生梁明第四军医大学西京医院神经外科陕西西安710032

创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）为神经外科严重疾患,其死亡率、致残率居各类创伤之首[1,2]。TBI后神经细胞受损、缺失或死亡,造成神经功能严重受损从而导致偏瘫、失语、学习记忆障碍,或者昏迷,甚至死亡。随着全球交通、建... 详细信息

创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）为神经外科严重疾患,其死亡率、致残率居各类创伤之首[1,2]。TBI后神经细胞受损、缺失或死亡,造成神经功能严重受损从而导致偏瘫、失语、学习记忆障碍,或者昏迷,甚至死亡。随着全球交通、建筑和工矿等企业的高速发展,其发病率呈逐年上升趋势,危害严重,已经成为严重的社会问题。对TBI的细胞生物学机理,缺乏突破性认识,

关键词：钙周期素结合蛋白创伤性脑损伤分子机制

钙周期素结合蛋白在乳腺癌转移性腋淋巴结中表达的预后价值

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宁夏医学杂志 2015年第4期37卷 289-291,封2页

作者：柳全霞王宁菊马刚宁夏医科大学总医院肿瘤内科宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院呼吸内科宁夏银川750004

目的研究乳腺癌转移性腋淋巴结中钙周期素结合蛋白(Cacy BP/SIP)的表达与患者复发转移及预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测Cacy BP/SIP在乳腺癌术后腋淋巴结中的表达,分析其表达与患者复发转移及预后的相关性。结果 Cacy BP/SIP在... 详细信息

目的研究乳腺癌转移性腋淋巴结中钙周期素结合蛋白(Cacy BP/SIP)的表达与患者复发转移及预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测Cacy BP/SIP在乳腺癌术后腋淋巴结中的表达,分析其表达与患者复发转移及预后的相关性。结果 Cacy BP/SIP在转移性腋淋巴结中高表达(34.88%),腋淋巴结无转移者无表达。在转移性腋淋巴结中复发转移组Cacy BP/SIP的阳性表达率46.67%,无复发转移组的阳性表达率7.70%。Cacy BP/SIP在转移性腋淋巴结中的表达与患者的生存率呈负相关性,与累积复发转移风险呈正相关性。结论 Cacy BP/SIP可能参与并促进乳腺癌的复发转移、影响患者生存。

关键词：乳腺肿瘤钙周期素结合蛋白复发转移预后

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钙周期素结合蛋白的细胞周期依赖性转位现象

中华老年多器官疾病杂志 2013年第4期12卷 304-308页

作者：陈阳白薇刘崇霞杨芳路国华王晓明李源宁晓暄第四军医大学西京医院老年病科西安710032

目的研究钙周期素结合蛋白（CacyBP／SIP）在胃癌细胞SGC7901中亚细胞定位与细胞周期的关系。方法利用双胸腺嘧啶脱氧核苷（胸苷）阻滞法将胃癌细胞SGC790l进行细胞周期同步化，流式细胞术检测细胞周期同步化效果。免疫荧光染色法观察Ca... 详细信息

目的研究钙周期素结合蛋白（CacyBP／SIP）在胃癌细胞SGC7901中亚细胞定位与细胞周期的关系。方法利用双胸腺嘧啶脱氧核苷（胸苷）阻滞法将胃癌细胞SGC790l进行细胞周期同步化，流式细胞术检测细胞周期同步化效果。免疫荧光染色法观察CacyBP／SIP在不同时期的亚细胞定位。蛋白质印迹法检测CacyBP／SIP总蛋白及核蛋白在不同时期的表达水平。结果采用双胸苷阻滞法使SGC7901细胞阻滞于G，／s期，撤药后培养4h，细胞进入S期。大多数细胞在8～12h时进入G2／M期，16h又重新进入G1期。免疫荧光染色发现，在G1和S期时，CacyBP／SIP主要分布在细胞浆中，而在以G2期为主的细胞中，CacyBP／SIP聚集在核周或进入胞核，说明CacyBP／SIP存在细胞周期依赖性的核转位。在细胞的各时相中CacyBP／SIP总蛋白无明显变化，但在G2期时CacyBP／SIP的核蛋白表达水平增高。结论CacyBP／SIP存在细胞周期依赖的转位现象，可能参与了G2／M期的调控作用。

关键词：胃癌细胞钙周期素结合蛋白细胞周期细胞定位

CacyBP/SIP对子宫内膜异位症间质细胞侵袭、迁移及血管生成的影响

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中国医疗设备 2024年第8期39卷 139-145页

作者：杨涛杜秀芳杨宏洁付昌娜康晓蓓林开清石家庄市妇幼保健院产科河北石家庄050000 浙江大学医学院附属妇产科医院产科浙江杭州311399

目的探讨钙周期素结合蛋白(Calcyclin-Binding Protein/Siah-1-Interacting Protein,CacyBP/SIP)对子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)间质细胞侵袭、迁移及血管生成的作用机制。方法选取2021年1月至2022年12月在石家庄市妇幼保健院产科就诊的60例EMs患者为研究对象,经腹腔镜手术,取子宫内膜组织并分离子宫内膜间质细胞。使用重组CacyBP/SIP慢病毒、抑制剂转染细胞之后检测病毒、抑制剂转染结果,实验分为5组,分别为CacyBP/SIP慢病毒组、慢病毒阴性对照组、CacyBP/SIP抑制剂组、抑制剂阴性对照组及未治疗组。定量PCR鉴定各组细胞CacyBP/SIP水平,Transwell法检测各组细胞侵袭、迁移,MTT比色法检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测各组细胞凋亡,免疫印迹法检测各组细胞血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)表达水平。结果与抑制剂阴性对照组比较,CacyBP/SIP慢病毒组24、48、72 h细胞增殖升高(P蛋白表达升高(P<0.05),与CacyBP/SIP慢病毒组比较,CacyBP/SIP抑制剂组的上述指标降低(P<0.05);未治疗组、慢病毒阴性对照组、抑制剂阴性对照组、CacyBP/SIP慢病毒组、CacyBP/SIP抑制剂组细胞凋亡率分别为8.54%±0.26%、8.42%±0.38%、8.46%±0.19%、3.38%±0.15%、18.42%±1.23%,与抑制剂阴性对照组比较,CacyBP/SIP慢病毒组细胞凋亡率降低(P<0.05),与CacyBP/SIP慢病毒组比较,CacyBP/SIP抑制剂组细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论CacyBP/SIP的低表达可降低EMs间质细胞的增殖、侵袭及迁移能力,推测其通过抑制VEGF、COX-2基因,可抑制血管生成。

关键词：钙周期素结合蛋白子宫内膜异位症间质细胞细胞侵袭细胞迁移血管生成