钙周期素结合蛋白（CacyBP）在胃癌细胞多药耐药性形成中的作用

作     者：程翌 

作者单位：第四军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：樊代明

授予年度：2004年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：钙周期素结合蛋白 多药耐药性 S100蛋白家族 泛素-蛋白连接酶 

摘      要：胃癌是我国最常见的肿瘤之一，化疗仍是目前肿瘤治疗的主要手段。肿瘤细胞多药耐药性(MDR)的存在是影响临床肿瘤病人化疗效果的主要障碍。肿瘤细胞多药耐药性的形成是一个多分子参与的复杂过程，目前并未完全阐明其中机制。我们以前的研究发现，在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR中，钙周期素结合蛋白(CacyBP)基因在mRNA水平显著高表达。但CacyBP基因在蛋白水平表达是否增高以及它是否在胃癌细胞多药耐药性形成过程中发挥作用还不清楚，本研究对此进行了初步探讨。 目的：制备抗CacyBP多克隆抗体，从蛋白水平研究CacyBP在胃癌细胞多药耐药性形成过程中表达及亚细胞定位的变化，探讨其参与细胞耐药的可能机制。同时观察CacyBP在胃癌组织和正常胃组织中的表达情况。 方法：(1)构建CacyBP基因原核表达载体并转化至***，IPTG诱导CacyBP融合蛋白的表达;(2)以固化Ni吸收色谱法纯化目的蛋白;(3)以表达的融合目的蛋白为抗原免疫小鼠制备抗CacyBP抗血清;(4)Western blot方法检测CacyBP在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR及其亲本细胞系SGC7901中的表达情况;(5)细胞免疫荧光技术检测了CacyBP在SGC7901/ADR细胞和SGC7901细胞中亚细胞定位;(6)激光扫描共聚焦显微镜技术检测了SGC7901/ADR细胞和SGC7901细胞中游离钙离子浓度;(7) 第四军医大学硕士学位论文 免疫组织化学和组织芯片技术观察了CacyBP在胃癌组织和为正 常组织中的表达情况，同时观测了Ca。yBP的表达和胃癌临床病理 资料的关系。 结果:(l)成功表达出重组CacyBP融合蛋白，表达量约占菌 体总蛋白的10%;(2)用固化Ni’十吸收色谱法得到了纯度很高的 融合目的蛋白;(3)制备出特异性较高的抗CacyBP抗血清;(4) CacyBP在胃癌耐药细胞系SGC79OI/ADR中的表达高于其亲本细胞 系Soc79ol:(5)CaeyBP在SGC79ol细胞中主要分布于胞浆中， 而在耐药细胞系SGC7901/ADR中胞浆和胞核都有分布;(6)耐药 细胞SGC7901/ADR内游离钙离子浓度明显高于其亲本细胞 SGC7901;(7) CacyBP在胃癌组织中的表达强于胃正常组织，但 未发现CacyBP的表达和胃癌组织的何种临床病理相关。 结论:(1)胃癌细胞多药耐药性形成过程中CacyBP的表达和 亚细胞定位都发生了改变，提示 CacyBP可能与胃癌细胞耐药性的 形成有关;(2) CacyBP在胃癌细胞耐药性形成过程中的变化可能 和胞内C扩+浓度变化有关;(3) Ca。yBP在胃癌组织中表达核正常 组织中的表达不同，提示它在胃癌发生过程中可能也发挥一定的 作用。