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金合欢素通过AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路发挥抗骨肉瘤作用

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肿瘤 2022年第6期42卷 388-398页

作者：魏梦琪叶彩红黄华坤杨春梅张露露罗进勇重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的:探究金合欢素(acacetin)对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响,及可能的作用机制。方法:体外培养人骨肉瘤细胞143B和MG63,分别给予不同浓度(0、20、25、30和35μmol/L)的金合欢素处理;随后,分别采用结晶紫染色和MTT法... 详细信息

目的:探究金合欢素(acacetin)对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响,及可能的作用机制。方法:体外培养人骨肉瘤细胞143B和MG63,分别给予不同浓度(0、20、25、30和35μmol/L)的金合欢素处理;随后,分别采用结晶紫染色和MTT法检测细胞的增殖能力,Hoechst33258染色法和FCM法检测细胞的凋亡情况,细胞划痕愈合实验和Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力;最后,采用蛋白质印迹法检测细胞内增殖相关蛋白[增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和c-Myc]、凋亡相关蛋白[Bcl-2、Bax和剪切型Caspase-3(cleaved-Caspase-3)]以及迁移和侵袭相关蛋白[基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、Snail和波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)]的表达水平,并进一步检测AKT、磷酸化-AKT(phospho-AKT,p-AKT)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、p-GSK-3β(ser9)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况。结果:结晶紫染色和MTT法检测结果表明,金合欢素可抑制骨肉瘤细胞143B和MG63的增殖,且蛋白质印记实验结果表明金合欢素处理可降低143B细胞内增殖相关蛋白(PCNA、Cyclin D1和c-Myc)的表达水平(P均金合欢素可促进骨肉瘤细胞143B的凋亡,且蛋白质印记实验结果显示金合欢素处理可使143B细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下降,促凋亡蛋白Bax、凋亡标志蛋白cleaved-Caspase-3的表达水平升高(P均金合欢素可抑制骨肉瘤细胞143B的迁移和侵袭,且蛋白质印记实验结果显示金合欢素处理可使143B细胞内MMP-2、Vimentin的表达水平下降,E-cadherin的表达水平升高(P均金合欢素处理可使143B细胞内的p-AKT、p-GSK-3β(ser9)和β-catenin蛋白表达水平下降(P均金合欢素可抑制人骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡,其可能是通过阻断AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路发挥作用。

关键词：骨肉瘤金合欢素 AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路细胞增殖细胞运动

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金合欢素逆转卵巢癌铂耐药的机制研究

中国实用妇科与产科杂志 2023年第8期39卷 842-848页

作者：彭佳欣张自辉洪莉武汉大学人民医院妇产科湖北武汉430060

目的探讨金合欢素逆转卵巢癌铂耐药的效应及机制。方法2022年3月至2022年10月在武汉大学人民医院中心实验室采用金合欢素、顺铂(DDP)或联合用药作用于人卵巢癌SKOV3及SKOV3/DDP细胞系,两种细胞系分别分为空白对照组、金合欢素组、顺铂... 详细信息

目的探讨金合欢素逆转卵巢癌铂耐药的效应及机制。方法2022年3月至2022年10月在武汉大学人民医院中心实验室采用金合欢素、顺铂(DDP)或联合用药作用于人卵巢癌SKOV3及SKOV3/DDP细胞系,两种细胞系分别分为空白对照组、金合欢素组、顺铂组和联合处理组,分别检测细胞生物学特性,采用流式细胞仪检测顺铂单药组和联合处理组细胞对DDP药物的摄取,定量反转录聚合酶连锁反应(RT-qPCR)和免疫印迹实验(Western-Blot)检测各处理组对三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A3(ABCA3)表达的影响。结果金合欢素对SKOV3和SKOV3/DDP的IC50分别为(50.20±0.89)μmol/L和(53.38±1.90)μmol/L,DDP对SKOV3和SKOV3/DDP的IC50分别为(3.65±0.07)μmol/L和(32.57±0.83)μmol/L,耐药指数为8.94±0.37;SKOV3细胞联合处理组较空白对照组、金合欢素组、顺铂组增殖能力减弱(克隆数78.67±5.31、323.67±3.86、156.33±6.60、155.67±5.90,P金合欢素组、顺铂组增殖能力减弱(克隆数37.33±4.78 vs.284.67±6.80、129.67±5.44、277.33±6.13,P金合欢素与DDP联用可增加细胞内顺铂药物累积,与单药组比较差异具有统计学意义(P金合欢素逆转卵巢癌细胞顺铂耐药的机制与抑制ABCA3的表达有关。结论金合欢素可提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与抑制ABCA3的表达增加细胞内DDP药物累积有关。

关键词：卵巢癌金合欢素化疗耐药 ABCA3

金合欢素磷脂复合物介孔二氧化硅纳米粒制备及其体内药动学研究

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中成药 2023年第8期45卷 2464-2471页

作者：杨金枝崔晓鸽郑州澍青医学高等专科学校河南郑州450064

目的制备金合欢素磷脂复合物介孔二氧化硅纳米粒,并考察其体内药动学。方法以大豆磷脂用量、水浴温度、搅拌时间为影响因素,复合率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化磷脂复合物处方,X射线粉末衍射进行晶型分析,测定油水分配系数。溶... 详细信息

目的制备金合欢素磷脂复合物介孔二氧化硅纳米粒,并考察其体内药动学。方法以大豆磷脂用量、水浴温度、搅拌时间为影响因素,复合率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化磷脂复合物处方,X射线粉末衍射进行晶型分析,测定油水分配系数。溶剂挥发法制备介孔二氧化硅纳米粒,测定体外释药、包封率、载药量、粒径、PDI、Zeta电位,在扫描电镜下观察微观结构。18只大鼠随机为3组,分别灌胃给予金合欢素、磷脂复合物、介孔二氧化硅纳米粒的0.5%CMC-Na混悬液(30 mg/kg),于0、0.17、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12 h采血,UPLC-MS/MS法测定金合欢素血药浓度,计算主要药动学参数。结果最优处方为大豆磷脂用量140 mg,水浴温度46℃,搅拌时间4 h,复合率接近100%。原料药以无定形状态存在于磷脂复合物中,油水分配系数明显升高。介孔二氧化硅纳米粒呈球形,平均包封率为87.48%,载药量为5.67%,粒径为168.27 nm,PDI为0.073,Zeta电位为0.043 mV,240 min内累积释放度约为90%。与原料药、磷脂复合物比较,介孔二氧化硅纳米粒t_(max)缩短(P金合欢素口服吸收。

关键词：金合欢素磷脂复合物介孔二氧化硅纳米粒制备体内药动学溶剂挥发法 UPLC-MS/MS

金合欢素调节Sirt1/AMPK/Nrf2信号通路对糖尿病白内障大鼠氧化应激损伤的影响

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眼科新进展 2024年第6期44卷 433-437页

作者：罗元元曹静洁王海营封传唐陶富胡洁湖南省永州职业技术学院医学技术学院湖南省永州市425000 中南大学湘雅医院眼科湖南省长沙市410005

目的探讨金合欢素对糖尿病白内障(DC)大鼠氧化应激损伤的影响及其对沉默调节蛋白1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的调控作用。方法60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、金合欢素低剂量组、金合欢素... 详细信息

目的探讨金合欢素对糖尿病白内障(DC)大鼠氧化应激损伤的影响及其对沉默调节蛋白1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的调控作用。方法60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组、金合欢素+Sirt1抑制剂(EX527)组,除对照组以外均构建DC大鼠模型,其中,金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组大鼠分别经颈部皮下注射10 mg·kg^(-1)、20 mg·kg^(-1)的金合欢素,金合欢素+EX527组大鼠经颈部皮下注射20 mg·kg^(-1)金合欢素,均为每天2次,同时金合欢素+EX527组大鼠经皮下埋入渗透微型泵每天泵入3.5 mg·kg^(-1)EX527,其余组别均泵入等量生理盐水,给药持续4周。给药结束后,测量血压和空腹血糖(FBG),裂隙灯照射法观察大鼠晶状体混浊状况,HE染色观察晶状体组织病理学变化,ELISA测定血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量,Western blot检测Sirt1、p-AMPK、AMPK、Nrf2蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠晶状体上皮细胞呈片状、条索状,发生迁移性聚集,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P金合欢素低、高剂量组大鼠晶状体上皮细胞迁移性聚集现象改善,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均降低,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均升高(均为P金合欢素高剂量组比较,金合欢素+EX527组晶状体上皮细胞形态改变和聚集现象加重,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P金合欢素可能通过激活Sirt1/AMPK/Nrf2通路保护DC大鼠免受氧化应激损伤。

关键词：金合欢素糖尿病白内障氧化应激损伤沉默调节蛋白1/腺苷酸活化蛋白激酶/核因子E2相关因子2信号通路

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金合欢素对哮喘幼年大鼠的改善作用及机制

中国药房 2024年第20期35卷 2466-2470页

作者：吕士申张忠文邵淑琳滕州市中心人民医院儿科三病区山东滕州277599 滕州市中心人民医院儿内科山东滕州277599

目的基于沉默信息调节因子1(SIRT1)/AMP活化蛋白激酶(AMPK)信号通路探讨金合欢素对哮喘幼年大鼠的改善作用及机制。方法将幼年SD大鼠随机分为对照组、哮喘组、金合欢素组(13.33 mg/kg,灌胃)、SIRT抑制剂EX-527组(1 mg/kg,腹腔注射)、金... 详细信息

目的基于沉默信息调节因子1(SIRT1)/AMP活化蛋白激酶(AMPK)信号通路探讨金合欢素对哮喘幼年大鼠的改善作用及机制。方法将幼年SD大鼠随机分为对照组、哮喘组、金合欢素组(13.33 mg/kg,灌胃)、SIRT抑制剂EX-527组(1 mg/kg,腹腔注射)、金合欢素+EX-527组(13.33 mg/kg金合欢素,灌胃+1 mg/kg EX-527,腹腔注射),每组12只(雌雄各半)。除对照组外,其余各组大鼠以腹腔注射卵清蛋白致敏+雾化吸入卵清蛋白增敏的方式复制哮喘模型。造模后,各药物组大鼠灌胃或(和)腹腔注射相应药液,每天1次,持续2周。末次给药后,检测其支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、嗜酸性粒细胞数占比和白细胞介素5(IL-5)、IL-4、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,观察肺组织病理形态学变化和杯状细胞异常增生情况,检测肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,以及SIRT1、AMPK和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)蛋白的表达情况。结果与对照组比较,哮喘组大鼠肺组织中有大量的炎症细胞浸润和明显的杯状细胞异常增生;BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞数占比和IL-5、IL-4、TNF-α水平,肺组织过碘酸希夫染色(PAS)评分,以及肺组织中MDA水平均显著升高(P金合欢素组大鼠肺组织的病理改变和杯状细胞异常增生均有所减轻,各定量指标均显著改善(P金合欢素对哮喘幼年大鼠氧化应激及气道炎症的改善作用。结论金合欢素可抑制哮喘幼年大鼠的氧化应激和气道炎症,上述作用可能与激活SIRT1/AMPK信号通路有关。

关键词：金合欢素哮喘氧化应激气道炎症 SIRT1/AMPK信号通路幼年大鼠

金合欢素的降血脂及抗动脉粥样硬化作用及机制初探

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药学学报 2019年第5期54卷 846-853页

作者：席梅邢建国王丽郑瑞芳杜郁洪斌新疆医科大学新疆乌鲁木齐830011 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家卫生健康委抗生素生物工程重点实验室北京100050 新疆维吾尔自治区药物研究所新疆乌鲁木齐830002

本文旨在研究金合欢素对小鼠血脂代谢及动脉粥样硬化的影响并初步探索其作用机制。利用不同浓度的金合欢素处理人肝癌细胞HepG2后,采用RT-qPCR和Western blot方法分别检测LDLR mRNA水平和蛋白表达情况以及SREBP-2的蛋白表达情况。C57BL... 详细信息

本文旨在研究金合欢素对小鼠血脂代谢及动脉粥样硬化的影响并初步探索其作用机制。利用不同浓度的金合欢素处理人肝癌细胞HepG2后,采用RT-qPCR和Western blot方法分别检测LDLR mRNA水平和蛋白表达情况以及SREBP-2的蛋白表达情况。C57BL/6J小鼠给予金合欢素灌胃处理5周,全自动生化分析仪检测血清中总胆固醇(total cholesterol, TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)和甘油三酯(triglyceride, TG)等指标, Western blot检测低密度脂蛋白受体(LDL receptor, LDLR)和固醇调节元件结合蛋白2 (sterol-regulatory element binding protein-2, SREBP-2)蛋白表达水平。载脂蛋白ApoE基因敲除(apolipoprotein E knockout, ApoE KO)小鼠灌胃给药12周后,全自动生化分析仪检测小鼠血清中的血脂水平等指标;油红O染色观察主动脉全长及主动脉根部斑块中脂质沉积情况; RT-qPCR和Western blot分别检测LDLR mRNA水平和蛋白表达情况以及SREBP-2蛋白水平; 16S rDNA测序分析小鼠肠道内容物的菌群组成变化情况(动物实验经医药生物技术研究所实验动物伦理审查委员会批准)。体外实验结果表明,金合欢素显著上调LDLR mRNA和蛋白水平,同时在蛋白水平增加转录因子SREBP-2的表达。体内实验结果表明,金合欢素与对照组相比可以显著降低C57BL/6J小鼠血清中TC和LDL-C水平。机制研究显示,金合欢素显著提高肝组织中的LDLR水平,同时升高SREBP-2的蛋白水平。ApoE KO小鼠的血脂结果及斑块形态学分析发现,金合欢素组与高脂饮食组间的差异没有统计学意义。肠道菌群分析结果显示,金合欢素处理组肠道菌群的组成与高脂饮食组相比存在结构差异。总之,金合欢素可能通过调控转录因子SREBP-2来增加LDLR的表达,进而降低C57BL/6J小鼠血清中LDL-C水平,调节小鼠的血脂代谢,同时对ApoE KO小鼠的肠道菌群也有影响,提示其可能具有潜在抑制动脉粥样硬化的作用。

关键词：金合欢素血脂代谢低密度脂蛋白受体动脉粥样硬化肠道菌群

金合欢素通过调节Sirt1介导的AMPK/Nrf2信号通路改善肺炎链球菌感染引起的肺泡上皮细胞损伤

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中国免疫学杂志 2024年第3期40卷 513-518页

作者：范彩霞张宗林伏瑶姜红临沂市人民医院临床药理研究中心临沂276000 临沂市人民医院药学部临沂276000 临沂市人民医院中心实验室临沂276000

目的:探讨金合欢素通过调节沉默信息调节因子相关酶1(Sirt1)介导的5'-磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对肺炎链球菌(SP)感染引起的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法:SP感染体外培养的肺泡上皮细胞A549建立... 详细信息

目的:探讨金合欢素通过调节沉默信息调节因子相关酶1(Sirt1)介导的5'-磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对肺炎链球菌(SP)感染引起的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法:SP感染体外培养的肺泡上皮细胞A549建立细胞损伤模型,采用终浓度分别为0、5、25、50、100、150、200μmol/L的金合欢素处理,CCK-8检测各处理组细胞活力并筛选金合欢素最佳作用浓度。体外培养的A549细胞随机分为5组:对照组、模型组、金合欢素(150μmol/L)组、EX527(Sirt1抑制剂,40μmol/L)组、金合欢素(150μmol/L)+EX527组(40μmol/L),对照组不进行处理,其余各组以SP感染建立细胞损伤模型,150μmol/L金合欢素和40μmol/L EX527分别处理,CCK-8、流式细胞术分别检测各组细胞活力与凋亡率;试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)水平及IL-10、IL-1β、TNF-α水平;免疫印迹法检测各组细胞增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白caspase-9、Bax表达、Sirt1与AMPK/Nrf2信号通路蛋白p-AMPK/AMPK、Nrf2表达。结果:与对照组比较,模型组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达降低(P金合欢素+EX527组分别比较,金合欢素组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达均升高(P金合欢素可通过上调Sirt1表达激活AMPK/Nrf2信号,进而促进抗炎因子分泌,减少ROS和促炎因子产生,减轻炎症与氧化应激,最终缓解神经元损伤。

关键词：金合欢素 Sirt1 AMPK/Nrf2信号 SP 肺泡上皮细胞损伤

金合欢素纳米混悬剂的制备及其体内药动学研究

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中成药 2022年第11期44卷 3415-3421页

作者：张佩琛王涛郑州澍青医学高等专科学校河南郑州450064 郑州大学河南郑州450001

目的制备金合欢素纳米混悬剂,并考察其体内药动学。方法高压均质法制备纳米混悬剂,测定粒径、Zeta电位、溶解度、体外溶出。以PVP K30占比、稳定剂用量、均质次数为影响因素,粒径为评价指标,Box-Behnken响应面法优化制备工艺。大鼠随机... 详细信息

目的制备金合欢素纳米混悬剂,并考察其体内药动学。方法高压均质法制备纳米混悬剂,测定粒径、Zeta电位、溶解度、体外溶出。以PVP K30占比、稳定剂用量、均质次数为影响因素,粒径为评价指标,Box-Behnken响应面法优化制备工艺。大鼠随机分为3组,分别灌胃给予金合欢素、物理混合物、金合欢素纳米混悬剂的0.5%CMC-Na混悬液(50 mg/kg),取血,HPLC-MS法测定金合欢素血药浓度,计算主要药动学参数。结果最佳条件为PVP K30占比47%,稳定剂用量215 mg,均质次数12次,粒径为214.7 nm,PDI为0.094,Zeta电位为-31.6 mV,溶解度提高至11.71倍,12 h内累积溶出度达95.82%。与原料药比较,纳米混悬剂t_(max)缩短(P金合欢素溶解度和溶出度,促进药物吸收。

关键词：金合欢素纳米混悬剂制备体内药动学高压均质法 HPLC-MS

金合欢素对糖尿病肾病大鼠肾损伤及TLR4/NF-κB信号通路的影响

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药物评价研究 2023年第9期46卷 1943-1948页

作者：刘曼邵翔李玉婷刘倩盼谭鹏王越苏州九龙医院肾内科江苏苏州215129 苏州九龙医院中心实验室江苏苏州215129 苏州九龙医院老年科江苏苏州215129

目的探讨金合欢素对糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤及Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法通过高脂高糖饲料喂养及ip链脲佐菌素(STZ)建立DN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,金合欢素低、高剂量(40、80 mg·kg... 详细信息

目的探讨金合欢素对糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤及Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法通过高脂高糖饲料喂养及ip链脲佐菌素(STZ)建立DN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,金合欢素低、高剂量(40、80 mg·kg^(-1))组,金合欢素(80 mg·kg^(-1))+脂多糖(LPS,0.1 mg·kg^(-1))组,缬沙坦(20 mg·kg^(-1))组,每组10只,并以正常喂养且不ip STZ的10只大鼠作为对照组。干预结束后,尾静脉取血,检测大鼠空腹血糖含量;收集大鼠24 h尿液,分析尿蛋白含量;腹部主动脉取血,ELISA法检测血清中血肌酐、血尿素氮水平及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;分离双肾组织,透射电镜及HE染色检测肾组织损伤情况;Western blotting检测Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组肾组织严重受损,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加(P金合欢素低、高剂量组肾组织损伤得到缓解,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著降低(P金合欢素高剂量组相比,金合欢素+LPS组肾组织损伤加剧,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加(P金合欢素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路改善DN大鼠肾损伤。

关键词：金合欢素 TLR4/NF-κB信号通路糖尿病肾病肾损伤炎症因子