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GADD45g通过抑制e2f1在急性髓系白血病中发挥抑癌作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第7期26卷 736-742页

作者：常利珍赵杨杨郭丹王楠尹静任倩尤娜马小彤中国医学科学院血液病医院血液学研究所暨实验血液学国家重点实验室

目的:检测转录因子e2f1与生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g(GADD45g)基因在急性髓系白血病(AML)患者中表达的相关性,探讨GADD45g是否通过抑制e2f1诱导AML细胞DNA损伤、凋亡、衰老、周期阻滞和提高药物敏感性。方法:选取2013年1月至2016年1... 详细信息

目的:检测转录因子e2f1与生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g(GADD45g)基因在急性髓系白血病(AML)患者中表达的相关性,探讨GADD45g是否通过抑制e2f1诱导AML细胞DNA损伤、凋亡、衰老、周期阻滞和提高药物敏感性。方法:选取2013年1月至2016年12月中国医学科学院血液病医院初诊为AML患者32例骨髓标本及AML细胞系U937、HL60、THP-1和Molm-13,用q PCR检测组织和细胞中GADD45g和e2f1 m RNA的表达水平,并分析其相关性。构建e2f1过表达载体,并制备重组慢病毒在过表达GADD45g的Molm-13和THP-1细胞中过表达e2f1,通过彗星实验、Annexin V/7AAD流式细胞术、β-半乳糖苷酶染色和PI染色流式细胞术等确定GADD45g是否通过抑制e2f1对AML细胞发挥抑癌作用。结果:AML患者骨髓和细胞系中GADD45g和e2f1 m RNA的表达呈显著负相关(r=–0.663,Pe2f1的表达(均Pe2f1的Molm-13和THP-1细胞,与对照组比较,过表达组细胞GADD45g和e2f1蛋白表达水平均显著升高(均Pe2f1细胞的凋亡、衰老率和DNA损伤水平均显著降低(均Pe2f1逆转了GADD45g诱导的周期阻滞(均Pe2f1在AML中发挥抗肿瘤作用。

关键词：转录因子e2f1 生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g 急性髓系白血病细胞凋亡

长链非编码RNA GAS5调节喉癌细胞生物学行为的实验研究

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临床肿瘤学杂志 2018年第9期23卷 811-816页

作者：贺松坡曹银生张晓静许昌市中心医院耳鼻喉科河南许昌461000

目的探讨长链非编码RNA GAS5(lnc RNA GAS5)对喉癌Hep2细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测喉癌和癌旁正常组织中GAS5的表达,分析其表达与喉癌临床病理特征的关系。Hep2细胞中分别转染pc DNA3. 1-GAS5或... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA GAS5(lnc RNA GAS5)对喉癌Hep2细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测喉癌和癌旁正常组织中GAS5的表达,分析其表达与喉癌临床病理特征的关系。Hep2细胞中分别转染pc DNA3. 1-GAS5或si GAS5,另分别转染pc DNA3. 1-NC或si NC作对照。MTT法检测转染后Hep2细胞增殖活性,流式细胞术检测Hep2细胞周期和凋亡,QPCR法和Western blotting法检测e2f1、BTf3 m RNA和蛋白的表达。结果喉癌组织和癌旁正常组织中GAS5表达水平分别为0. 56±0. 10和0. 98±0. 11,差异有统计学意义(P24、48、72、96 h Hep2细胞存活率明显低于pc DNA3. 1-NC组,差异有统计学意义(Pe2f1、BTf3 m RNA和蛋白的水平均低于pc DNA3. 1-NC组,差异具有统计学意义(Pe2f1、BTf3 m RNA和蛋白的水平均高于si NC组,差异具有统计学意义(Pe2f1和BTf3表达,从而参与调控喉癌细胞的增殖和凋亡。

关键词：喉癌 GAS5 转录因子e2f1 通用转录因子3 增殖凋亡

e2f1 siRNA通过抑制血红素诱导的神经元凋亡发挥保护作用

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安徽医科大学学报 2020年第6期55卷 842-847页

作者：赵丹李贤玉袁美春吴艳石柳柳张志锋湖北医药学院生理教研室十堰442000 胚胎干细胞研究湖北省重点实验室十堰442000 武当特色中药研究湖北省重点实验室十堰442000

目的探讨e2f转录因子1(e2f1)在血红素诱导的大鼠原代皮层神经元损伤中的作用及机制。方法体外培养大鼠原代皮层神经元并鉴定,采用不同浓度血红素处理神经元,12 h后LDH实验及MTT实验检测细胞损伤;免疫荧光双染观察神经元e2f1定位;Western... 详细信息

目的探讨e2f转录因子1(e2f1)在血红素诱导的大鼠原代皮层神经元损伤中的作用及机制。方法体外培养大鼠原代皮层神经元并鉴定,采用不同浓度血红素处理神经元,12 h后LDH实验及MTT实验检测细胞损伤;免疫荧光双染观察神经元e2f1定位;Western blot检测神经元e2f1表达;将神经元分为溶剂组(DMSO组)、损伤组(Hemin组)、阴性对照组(Hemin+Control siRNA组)、治疗组(Hemin+e2f1siRNA组)进行TUNeL染色及caspase活性检测。结果神经元培养至第7天,NeuN染色阳性率达95%;血红素(50、100、200μmol/L)处理后神经元LDH释放率增加、细胞生存率降低、e2f1表达上调(f=22.9,Pf=343.4,Pf=127.7,PeL结果显示血红素诱导神经元凋亡增加,治疗组凋亡减少(f=67.2,Pe活性检测显示血红素损伤组神经元caspase-3、caspase-8、caspase-9活性升高(t=15.7,t=9.7,t=7.8,Pe-3、caspase-8、caspase-9活性降低(t=8.6,t=7.3,t=5.7,Pe2f1 siRNA可能通过抑制血红素诱导的神经元凋亡而发挥神经保护作用。

关键词：脑出血血红素转录因子e2f1 细胞凋亡神经保护

CADM1、Rb、e2f1在膀胱尿路上皮癌中的表达及其与临床病理特征间的相关性研究

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CADM1、Rb、E2F1在膀胱尿路上皮癌中的表达及其与临床病理特征间...

作者：张新天津医科大学

学位级别：硕士

目的:通过前期研究我们发现,CADM1在膀胱尿路上皮癌中表达降低或缺失,与病理分级呈负相关,上调CADM1的表达可以明显降低肿瘤细胞的增殖和侵袭能力,下调CADM1的表达后,肿瘤细胞的增殖和侵袭能力明显增加;而在肝癌细胞中发现,CADM1可通过R... 详细信息

目的:通过前期研究我们发现,CADM1在膀胱尿路上皮癌中表达降低或缺失,与病理分级呈负相关,上调CADM1的表达可以明显降低肿瘤细胞的增殖和侵袭能力,下调CADM1的表达后,肿瘤细胞的增殖和侵袭能力明显增加;而在肝癌细胞中发现,CADM1可通过Rb/e2f信号通路抑制肿瘤细胞周期G1/S期的转化,进而抑制肿瘤的形成,本研究通过收集膀胱尿路上皮癌患者的临床资料,比较膀胱尿路上皮癌组织与正常膀胱黏膜组织间CADM1、Rb、e2f1表达量的差异,并验证三者之间及三者与临床病理特征之间的相关性,为下一步研究此信号通路在膀胱尿路上皮癌发生发展中的作用奠定理论基础。方法:收集86例膀胱尿路上皮癌组织标本及24例正常膀胱黏膜标本,采用qPCR和WB方法检测膀胱尿路上皮癌组织和正常组织标本中CADM1、Rb、e2f1 mRNA及蛋白的表达情况,分析癌组织中三者蛋白和mRNA的表达量与正常膀胱黏膜组织间的差异,以及三者蛋白表达之间的相关性及其与临床病理特征之间的关系。结果:1、qPCR结果显示,在膀胱尿路上皮癌组织标本中,平均CADM1 mRNA表达量(0.754±0.225)低于正常组织(1.340±0.180,P=0.024);平均Rb mRNA的表达量(0.725±0.247)低于正常组织(1.476±0.248,P=0.033);平均e2f1 mRNA表达量(1.443±0.304)高于正常组织(0.463±0.178),差异均有统计学意义。2、WB结果提示,在膀胱尿路上皮癌组织标本中,平均CADM1蛋白表达量(0.342±0.105)低于正常组织(0.538±0.185,P=0.008);平均Rb蛋白表达量(0.369±0.154)低于正常组织(0.477±0.188,P=0.015);平均e2f1蛋白表达量(0.579±0.183)高于正常组织(0.302±0.107,P=0.041),差异有统计学意义。3、在86例膀胱尿路上皮癌组织标本中,采用Spearman相关分析得出,CADM1、Rb间的表达呈正相关(r=0.785,P=0.017),CADM1与e2f1间的表达呈负相关(r=-0.534,P=0.008),Rb与e2f1间的表达呈负相关(r=-0.457,P=0.003)。4、在三者蛋白的表达量与临床病理特征之间的相关性分析中,CADM1、Rb、e2f1的表达量与患者的性别、年龄、肿瘤大小和肿瘤数目无明显相关性,低级别癌组织中CADM1的表达量(0.376±0.009)较高级别癌组织(0.327±0.005)更高(Pe2f1的表达量(0.553±0.017)则较高级别组(0.609±0.012)低(P=0.012)。结论:1、膀胱尿路上皮癌组织中CADM1、Rb表达量明显降低,e2f1表达量升高。2、在膀胱尿路上皮癌组织中,CADM1、Rb两者之间的表达呈正相关,且两者与e2f1、病理分级呈负相关;e2f1的表达与病理分级呈正相关。3、通过我们的研究,发现了膀胱尿路上皮癌中CADM1、Rb、e2f1的表达变化以及他们的临床病理特征,为下一步研究CADM1与Rb/e2f信号通路在膀胱尿路上皮癌发生发展中的作用奠定理论基础。

关键词：膀胱尿路上皮癌细胞粘附分子1 视网膜母细胞瘤基因转录因子e2f1 相关性

口腔鳞状细胞癌中RbAP48、e2f1的表达及临床意义

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口腔鳞状细胞癌中RbAP48、E2F1的表达及临床意义

作者：候聪芳内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的检测口腔鳞状细胞癌中RbAP48、e2f1的表达,解析二者与临床病理参数之间的关联,并探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测70例OSCC中RbAP48、e2f1的表达情况,用卡方检验(Χ2检验)分析其与临床病理参数之间的相关关联,两者之间... 详细信息

目的检测口腔鳞状细胞癌中RbAP48、e2f1的表达,解析二者与临床病理参数之间的关联,并探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测70例OSCC中RbAP48、e2f1的表达情况,用卡方检验(Χ2检验)分析其与临床病理参数之间的相关关联,两者之间的相关性采用Spearman秩相关法分析。结果(1)通过免疫组织化学法对70例口腔鳞状细胞癌进行检测结果显示,RbAP48主要表达在OSCC组织的细胞核中,呈黄色或棕黄色颗粒状分布,其阳性表达率为64.29%(45/70);e2f1主要表达在OSCC组织的细胞质与核中,呈黄色或棕黄色颗粒状弥漫性分布,细胞核棕黄色深染,e2f1的阳性表达率为55.71%(39/70)。(2)在高分化组中RbAP48的阳性表达率为73.68%(14/19),中低分化组中阳性率为60.78%(31/51),两组之间的差异无统计学意义(P>0.05);Ⅰ+Ⅱ期组中RbAP48阳性表达率为44.83%(13/29),Ⅲ+Ⅳ组则为78.05%(32/41),两组间差异有统计学意义(P17/36),两组之间比较有统计学意义(Pe2f1阳性表达率为52.63%(10/19),中低分化组为56.86%(29/51),两组间的差异无统计学意义(P>0.05);临床分期中,e2f1在Ⅰ+Ⅱ期组中阳性表达率为55.17%(16/29),Ⅲ+Ⅳ组为56.10%(23/41),两组比较无统计学意义(P>0.05);e2f1在淋巴结转移阳性组中阳性表达率为50.00%(17/34),淋巴结转移阴性组则为61.11(22/36),两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。由统计结果分析显示,e2f1在OSCC中表达与临床病理参数(淋巴结转移、临床分期、分化程度、患者性别及年龄)均未见显著相关。(4)本研究70例口腔鳞状细胞癌中,RbAP48和e2f1共同阳性表达的有26例,RbAP48和e2f1共同阴性表达的有19例,RbAP48阳性而e2f1阴性表达的有12例,RbAP48为阴性而e2f1为阳性的有13例。通过Spearman秩相关分析法得出在口腔鳞状细胞癌中RbAP48与e2f1间无显著相关性(rs=0.143,P>0.05)。结论本研究证实:(1)口腔鳞状细胞癌中有RbAP48表达,并且与OSCC淋巴结转移、临床分期呈正相关关系,结果提示在口腔癌中存在Rb通路,且与口腔癌的预后密切相关,可能成为评估口腔癌预后的重要指标之一;(2)本研究结果显示e2f1在口腔鳞状细胞癌中呈高表达状态,但其与临床病理参数之间无显著关联,e2f1与RbAP48的表达在口腔鳞状细胞癌中无明显相关性,二者确切的分子作用机制目前尚不清楚,有待于进行更加深入的研究和探讨。

关键词：口腔鳞状细胞癌 RbAP48 转录因子e2f1 淋巴结转移细胞周期

eB病毒相关胃癌中DNA甲基转移酶3a的作用和调控机制研究

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EB病毒相关胃癌中DNA甲基转移酶3a的作用和调控机制研究

作者：宋慧青岛大学

学位级别：硕士

eB病毒(epstein-Barr virus,eBV)是一种普遍存在的γ疱疹病毒,世界上约90%的人都曾感染eBV并获得适应性免疫。在特定的情况下,eBV感染可导致多种淋巴细胞和上皮细胞源性肿瘤的发生。eBV相关胃癌(eBV-associated gastric carcinoma,eBVa ... 详细信息

eB病毒(epstein-Barr virus,eBV)是一种普遍存在的γ疱疹病毒,世界上约90%的人都曾感染eBV并获得适应性免疫。在特定的情况下,eBV感染可导致多种淋巴细胞和上皮细胞源性肿瘤的发生。eBV相关胃癌(eBV-associated gastric carcinoma,eBVa GC)是胃癌的一种独特的分子亚型,抑癌基因启动子区异常高甲基化的表观基因型状态在eBVa GC的发展过程中起关键作用,已有多项研究证明eBVa GC中宿主细胞DNA高甲基化现象较eBV阴性胃癌(eBV-negative gastric carcinoma,eBVn GC)更为普遍。DNA甲基化是目前为止研究最透彻的表观遗传机制,是在DNA序列不变的情况下调节基因转录的修饰形式,主要由DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)家族催化完成。已知哺乳动物细胞中主要包括3种有活性的DNMTs:DNMT1、DNMT3a和DNMT3b。目的:选择eBV阳性和阴性胃癌细胞为研究对象,探讨eBV对DNMT3a的调控作用,明确eBV核抗原1(epstein-Barr nuclear antigen 1,eBNA1)和潜伏膜蛋白2A(Latent membrane protein 2A,LMP2A)通过影响DNMT3a表达参与eBVa GC发生发展的作用机制,为eBVa GC的治疗提供新的可选择的治疗靶点。方法:(1)采用GV657构建eBV核抗原eBNA1编码基因的表达载体(GV657-eBNA1),转染eBV阴性胃癌细胞系BGC823和SGC7901,加入1mg/ml的嘌呤霉素(Puromycin),筛选出稳定表达外源性eBNA1的细胞系BGC823-eBNA1和SGC7901-eBNA1。(2)实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)检测BGC823-eBNA1及SGC7901-eBNA1细胞中eBNA1 m RNA表达水平。(3)蛋白免疫印迹(Western Blot)检测BGC823-eBNA1、SGC7901-eBNA1以及瞬时表达eBNA1细胞中eBNA1、e2f转录因子1(e2f transcription factor 1,e2f1)及DNMT3a的蛋白表达水平。(4)免疫荧光(Immunofluorescence)技术检测DNMT3a在细胞中的定位。(5)分别采用靶向eBNA1、LMP2A、e2f1及DNMT3a编码基因的小干扰RNA作用eBV阳性胃癌细胞系SNU719,检测eBNA1、LMP2A、e2f1以及DNMT3a等相关基因的表达水平。(6)用Nf-κB抑制剂BAY11-7082、靶向p65和IκBα编码基因的小干扰RNA处理eBV阳性胃癌细胞系SNU719,检测DNMT3a蛋白表达水平的变化。(7)CCK-8、Transwell、流式细胞术分析DNMT3a对eBV阳性和阴性胃癌细胞增殖、周期、凋亡以及迁移的作用。(8)用DNMT抑制剂5-Aza-Cd R处理eBV阳性胃癌细胞系SNU719,检测BZLf1蛋白表达水平及基因组DNA整体甲基化水平变化。结果:(1)重组表达载体GV657-eBNA1转染并筛选3周后,镜下观察到90%以上的绿色荧光蛋白,结果显示BGC823和SGC7901细胞系可稳定表达外源性eBNA1。(2)BGC823-eBNA1和SGC7901-eBNA1细胞中可检测到eBNA1 m RNA转录,而对照细胞无eBNA1 m RNA转录。(3)BGC823-eBNA1和SGC7901-eBNA1细胞中可检测到eBNA1蛋白表达;与对照组比较,e2f1和DNMT3a的表达在稳定和瞬时转染eBNA1的细胞中明显上调。(4)免疫荧光检测结果显示,DNMT3a的荧光强度在瞬时转染eBNA1的eBV阴性胃癌细胞系中明显增强,且在细胞核和细胞质中均有表达。(5)在eBV阳性胃癌细胞系SNU719中干扰eBNA1表达后,e2f1和DNMT3a表达均下调;分别干扰LMP2A和e2f1后,DNMT3a表达也均下调。(6)分别采用BAY11-7082和靶向p65编码基因的小干扰RNA抑制Nf-κB信号通路后,DNMT3a的表达受到抑制;而靶向干扰IκBα表达,激活Nf-κB信号通路后,DNMT3a的表达则明显增加。(7)在eBV阳性胃癌细胞系SNU719和eBV阴性胃癌细胞系SGC7901中抑制DNMT3a表达后,与对照组比较,CCK-8结果显示细胞增殖受到抑制,流式细胞分析检测显示细胞周期被阻滞在G1/S期、细胞凋亡程度明显增加,Transwell结果显示细胞迁移能力明显下降。(8)用5-Aza-Cd R处理eBV阳性胃癌细胞系SNU719后,B

关键词： eB病毒 eB病毒相关胃癌 eB病毒核抗原1 转录因子e2f1 甲基转移酶3a

PRPS2在不同生精功能障碍睾丸组织中的表达以及对生精细胞凋亡和增殖的影响

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生殖医学杂志 2019年第4期28卷 380-386页

作者：董世桃杨智敏张明哲杨名慧王文华遵义医学院附属医院生殖中心遵义563003

目的探讨磷酸核糖焦磷酸合成酶2(RRPS2)在生精功能不同的睾丸组织中的表达情况以及可能的生物学机制。方法收集2015年7至2017年6月期间在我院病理科存档的石蜡包埋睾丸组织标本63例,其中45例标本来自无精子症或严重少精子症患者,18例组... 详细信息

目的探讨磷酸核糖焦磷酸合成酶2(RRPS2)在生精功能不同的睾丸组织中的表达情况以及可能的生物学机制。方法收集2015年7至2017年6月期间在我院病理科存档的石蜡包埋睾丸组织标本63例,其中45例标本来自无精子症或严重少精子症患者,18例组织标本取自生精功能正常者,采用免疫组化法检测生精功能不同的睾丸组织中PRPS2表达情况。采用流式细胞术和MTT方法分析PRPS2基因沉默或过表达对GC1精原细胞、GC2精母细胞和TM4支持细胞凋亡和增殖活性的影响。采用qRT-PCR和Western blot法检测PRPS2对e2f1转录因子表达的影响。结果重度生精功能不良的睾丸组织(35.71%)以及唯支持细胞综合征睾丸组织(21.43%)中PRPS2高表达,显著低于生精功能正常的睾丸组织(72.22%)(P1细胞株中PRPS2表达量显著高于GC2和TM4细胞株(P1细胞、GC2细胞和TM4细胞凋亡率较空白对照组显著增加,而增殖活性显著降低(Pe2f1mRNA和蛋白表达量较空白对照组显著降低(Pe2f1mRNA和蛋白表达量较空白对照组和shPRPS2细胞组显著上调(Pe2f1转录因子的表达有关。

关键词： PRPS2 生精功能障碍无精子症转录因子e2f1 生物学功能

e2f1上调CCNA2表达影响卵巢癌增殖能力

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中国妇幼保健 2019年第19期34卷 4563-4566页

作者：韩静陈典刚杨鹰吴佳燕陆军军医大学新桥医院妇产科重庆400037 陆军军医大学新桥医院肿瘤研究所重庆400037

目的探讨转录因子e2f1上调细胞周期蛋白A2 (CCNA2)表达对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响。方法利用TCGA网站分析卵巢癌组织与卵巢正常组织中e2f1与CCNA2的mRNA表达情况,利用TCGA卵巢癌RNA-seq数据分析e2f1基因与CCNA2基因表达相关性,利用... 详细信息

目的探讨转录因子e2f1上调细胞周期蛋白A2 (CCNA2)表达对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响。方法利用TCGA网站分析卵巢癌组织与卵巢正常组织中e2f1与CCNA2的mRNA表达情况,利用TCGA卵巢癌RNA-seq数据分析e2f1基因与CCNA2基因表达相关性,利用小RNA敲低e2f1表达,利用q PCR检测e2f1、CCNA2 mRNA表达水平,利用western blot检测e2f1、CCNA2蛋白表达水平,eDU流式检测法检测SKOV3细胞增殖情况,利用网站预测CCNA2启动子区域e2f1结合位点。结果卵巢癌组织中e2f1及CCNA2的表达明显高于正常卵巢组织,卵巢癌中e2f1表达与CCNA2表达具有相关性,敲低e2f1表达会减少CCNA2的表达,敲低e2f1的表达会抑制SKOV3细胞增殖,CCNA2转录起始位点附近存在e2f1转录因子的结合位点。结论 e2f1上调CCNA2表达促进卵巢癌细胞系SKOV3细胞的增殖。

关键词：转录因子e2f1 细胞周期蛋白A2 卵巢癌增殖