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胡椒碱减轻H2O2引起的兔心房肌细胞内向整流钾电流及超速激活延迟整流钾电流的异常改变

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中国病理生理杂志 2012年第5期28卷 839-845页

作者：刘岩李泱林琨田苗王玉堂单兆亮解放军总医院心内科北京100853 解放军总医院老年心血管病研究所北京100853

目的:研究胡椒碱对H2O2引起的兔单个心房肌细胞内向整流钾电流(IK1)及超速激活的延迟整流钾电流(IKUr)异常的影响。方法:采用全细胞膜片钳技术分析50μmol/L H2O2对兔单个心房肌细胞IK1和IKUr的影响,并研究预先应用7μmol/L胡椒碱对其... 详细信息

目的:研究胡椒碱对H2O2引起的兔单个心房肌细胞内向整流钾电流(IK1)及超速激活的延迟整流钾电流(IKUr)异常的影响。方法:采用全细胞膜片钳技术分析50μmol/L H2O2对兔单个心房肌细胞IK1和IKUr的影响,并研究预先应用7μmol/L胡椒碱对其的保护作用。结果:7μmol/L胡椒碱对正常兔心房肌细胞IK1和IKUr及其通道动力学无显著影响。在50μmol/L H2O2作用下,兔心房肌细胞IK1峰值由(-148.2±16.7)pA/pF降低至(-64.2±9.8)pA/pF(P电流-电压曲线上移;而IKUr峰值由(16.0±2.1)pA/pF降低至(6.1±1.4)pA/pF(P电流-电压曲线下移,通道稳态激活曲线右移,通道稳态失活曲线左移及恢复时间减慢,而且存在频率依赖性特征。预先给予7μmol/L胡椒碱,明显减轻H2O2对IK1和IKUr的抑制作用(P超速激活延迟整流钾通道动力学的异常影响。结论:胡椒碱可减轻氧化应激对心房肌细胞IK1和IKUr的影响。

关键词：胡椒碱过氧化氢心房肌细胞内向整流钾电流超速激活延迟整流钾电流

羧甲基壳聚糖对大鼠单一心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流的作用

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羧甲基壳聚糖对大鼠单一心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流的作用

作者：宋志国中国医科大学

学位级别：硕士

前言房颤(atrial fibrillation，AF)是临床上最常见的持续性心律失常，也是危害人类健康的重要疾病。目前，AF的形成机制尚无定论，大量临床实践和流行病学研究表明，心房电重构对房颤的发生和维持起重要作用，因而抑制通道重构是... 详细信息

前言房颤(atrial fibrillation，AF)是临床上最常见的持续性心律失常，也是危害人类健康的重要疾病。目前，AF的形成机制尚无定论，大量临床实践和流行病学研究表明，心房电重构对房颤的发生和维持起重要作用，因而抑制通道重构是治疗AF的热点之一。心房电重构会对复极电流产生重要影响，钾通道电流是心肌动作电位复极的主要电流，所以钾通道电流是AF的重点研究对象。超快速激活型(ultrarapid delayed rectifier potassium current，I)是一种延迟整流钾电流(delayed rectifier potassium current，I)，它在心房肌中表达较多，而在心室肌中表达很少或不表达，选择性抑制I将可能把对AF的治疗作用与作用于心室的致心律失常作用完全分离开来，从而达到有效而安全的治疗目标。因此，高效、特异性的I阻断药在抗AF等房性心律失常方面有着重大意义。甲壳质广泛存在于甲壳类动物、昆虫和其它无脊椎动物的外壳中。壳聚糖是甲壳质脱去乙酰基的产物。实验表明壳聚糖具有抗感染、抗肿瘤、防治高血压和抗心律失常等方面的作用。羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan，CMCS)是壳聚糖经羧甲基化而得的一种水溶性多糖，本实验以前的实验曾观察到CMCS具有抑制豚鼠单一心室肌细胞延迟外向钾电流的作用，本实验应用膜片钳技术首次研究CMCS对大鼠单一心房肌细胞I的作用，进一步揭示其在心血管尤其抗房性心律失常方面的作用机制。实验方法 1．大鼠单一心房肌细胞的制备 Wistar大鼠，200～250 g，雌雄不限，中国医科大学实验动物部提供。戊巴比妥钠20 mg·kg腹腔麻醉，取出心脏，主动脉插管，在37℃恒温和供氧条件下用Langendorff装置进行灌流。用二步酶解法分离出单个心房肌细胞，当数量最多、质量最好时收集细胞。将分离的心房肌细胞放在KB液中，置于4℃冰箱稳定lh后即可使用。 2.膜片钳制技术全细胞模式记录IKur 将分离的心肌细胞置于容积1. smL平放于倒置显微镜上的浴槽中，挑选表面光滑，横纹清晰，无收缩的心房肌细胞行千兆封接，全细胞状态形感后，用pCLAMPS.5·‘软件程序对细胞发放刺激并记录电流信号轨迹。铎文献方法，采用经典的双脉冲刺激方案获得‘Ku一即首先给一个时程为乡叩 ms，保持电位一60 mV，去极化到+30mV的条件脉冲，间隔20Ins后，再给予波宽1200 ms的方波刺激，保持电位一60mV，刺激电压从一40mV一+50 mv，步阶电压 10 mV。当记录的电流稳定后(1一2而n)开始累积给药观察电流的变化并实时记录。 3.统计分析一记录的电流在pCLAMPS .5 .1中进行分析和电流大小的测量.。IKur的幅度是刺激结束时相对于零电流水平的幅值，实验结果用又士s表示，实验数菇死理是将细胞给药前后的电流值进行配对资料t检验，P电流值分别由给药前的(1.8士O .7)和(2.0土0.6)nA下降(14土6)%(n二 12，P电流来反映细胞膜单一的(或多个的)离子通道分子活动的技术。该技术是对细胞和分子水平的生理学研究方法的一次革命，使昔日“肉汤生理学(broth physiofo留)”与“闪电生理学(lightuing physiology)”在分子水平上结合起来，使人们对膜通道的认识耳目一新。全细胞记录(whole一eeu recording)是膜片钳技术的一种记录方式，近年来在研究离子通道的变化对细胞功能的影响，以及在药物作用机制的研究中被广泛采用。随着膜片钳技术在心血管方面的广泛应用，为了解不同疾病机理，为研制新的更为特效的药物开辟了道路。本实验应用膜片钳技术研究了CMCS 对大鼠单一心房肌细胞IKur的作用，阐明了其在抗房性心律失常方面的作用机制。 2.大鼠单一心房肌细胞的制备心房肌细胞直径明显小于心室肌细胞，高阻封接的难度要大于心室肌，因而对单个心房肌细胞质量的要求更高。目前关于心肌(心房肌和心室肌)细胞分离的技术已经成熟，但取得数量多、活性好的细胞还是不容易的，本实验按文献方法，经两次消

关键词：羟甲基壳聚糖膜片钳技术心房心肌钾通道超速激活延迟整流钾电流

β3肾上腺素能受体对慢性心力衰竭大鼠左心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流的影响

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β3肾上腺素能受体对慢性心力衰竭大鼠左心房肌细胞超速激活延迟...

作者：曾芳暨南大学

学位级别：硕士

目的：建立慢性心力衰竭（CHF）及在此基础上β3肾上腺素能受体（β3-AR）进一步上调的大鼠模型，探讨β3-AR对CHF大鼠左心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流（IKur）的影响。方法：1.将24只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组和心衰模型组... 详细信息

目的：建立慢性心力衰竭（CHF）及在此基础上β3肾上腺素能受体（β3-AR）进一步上调的大鼠模型，探讨β3-AR对CHF大鼠左心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流（IKur）的影响。方法：1.将24只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组和心衰模型组。心衰模型组利用腹主动脉缩窄法建立CHF大鼠模型，然后进一步被随机分为CHF对照组和BRL组。BRL组大鼠经尾静脉注射β3-AR特异性激动剂BRL-37344（4.0nmol/kg/min,10min,2次/周）共4周。2.利用超声心动图检测3组大鼠的左心房内径（LAD）、左心房射血分数（LAEF）。3.利用酶解法分离获得大鼠单个左心房肌细胞。4.利用全细胞膜片钳技术测定3组大鼠单个左心房肌细胞的IKur。结果：1.超声心动图指标：BRL组大鼠的LAD明显大于CHF对照组（P电流密度最大。指令电压在0mV～+60mV时，CHF对照组大鼠左心房肌细胞IKur较Sham组明显减弱（P<0.05或<0.01）;指令电压在-30mV～+60mV，BRL组大鼠左心房肌细胞IKur显著低于CHF对照组（P<0.05或<0.01）。结论：β3-AR上调参与了CHF大鼠左心房结构重构和收缩功能下降，并加重了CHF大鼠左心房IKur重构。

关键词： β3-肾上腺素能受体心力衰竭大鼠心房超速激活延迟整流钾电流

大蒜素对兔心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流的作用

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中华老年多器官疾病杂志 2013年第5期12卷 381-386页

作者：陈晨王禹张德贤傅义程陈曦徐斌杨洁尹彤朱庆磊李泱解放军总医院老年心血管病研究所北京100853

目的研究大蒜素对兔单个心房肌细胞超速激活的延迟整流钾电流（I_KUr）的作用，探讨其抗房性心律失常的机制。方法采用双酶法分离兔单个心房肌细胞，应用细胞外局部灌流法给药，采用全细胞膜片钳技术记录电流，以观察大蒜素对kUr的作用... 详细信息

目的研究大蒜素对兔单个心房肌细胞超速激活的延迟整流钾电流（I_KUr）的作用，探讨其抗房性心律失常的机制。方法采用双酶法分离兔单个心房肌细胞，应用细胞外局部灌流法给药，采用全细胞膜片钳技术记录电流，以观察大蒜素对kUr的作用。结果大蒜素200gmol／L对正常兔心房肌细胞I_KUr有显著的抑制效应，使I_KUr峰值由（14．5±3．2）pA／pF降至（7．9±1．2）pA／pF（P〈0．01，n=15）。大蒜素可使I_KUr的电流．电压曲线降低，且随着除极化电位的增加，作用更加明显，提示其作用具有电压依赖性。同时，发现大蒜素对I_KUr的抑制效应存在浓度依赖性，半数抑制浓度（IC50）为149．6μmol／L。门控动力学机制研究发现，大蒜素可以使通道激活曲线右移，延迟激活；使通道稳态失活左移，加速失活；使通道失活后恢复时间延长，减缓通道失活后的再次激活。从不同环节减少，I_KUr通道的开放，降低电流密度。结论大蒜素抑制心房肌细胞膜上I_KUr，这可能是其治疗房性心律失常的细胞电生理基础。

关键词：大蒜素心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流膜片钳技术

β3肾上腺素能受体激动对心力衰竭大鼠心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流的影响

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中华临床医师杂志(电子版) 2013年第24期7卷 11446-11449页

作者：曾芳赵强王淑香李彪吴同果广州市红十字会医院暨南大学医学院第四附属医院心血管内科

目的探讨选择性β3肾上腺素能受体(β3-AR)激动剂BRL-37344对慢性心力衰竭(CHF)大鼠左心房心肌细胞超速激活延迟整流钾电流(IKur)的影响。方法 24只雄性Wistar大鼠分为假手术组(Sham组,n=6)和CHF组(n=18),采用主动脉缩窄法建立CHF大鼠... 详细信息

目的探讨选择性β3肾上腺素能受体(β3-AR)激动剂BRL-37344对慢性心力衰竭(CHF)大鼠左心房心肌细胞超速激活延迟整流钾电流(IKur)的影响。方法 24只雄性Wistar大鼠分为假手术组(Sham组,n=6)和CHF组(n=18),采用主动脉缩窄法建立CHF大鼠模型。CHF组大鼠再分为CHF对照组和BRL组(经尾静脉注射BRL-37344 0.4 nmol/kg,每周2次,共4周)。酶解法分离得到大鼠左心房肌细胞。采用全细胞膜片钳技术测定左心房肌细胞Ikur(以电流密度pA/pF表示)。结果当指令电压为+60 mV时,三组心房肌细胞Ikur电流密度最大,分别为(12.07±2.35)pA/pF、(8.15±1.14)pA/pF、(4.81±1.25)pA/pF。当指令电压在0+60 mV时,CHF对照组大鼠心房肌细胞IKur较Sham组明显减弱(P<0.05或<0.01);指令电压在-30+60 mV,BRL组大鼠心房肌细胞IKur显著低于CHF对照组(P<0.05或<0.01)。结论 BRL-37344激动β3-AR显著抑制了CHF大鼠心房肌细胞IKur。

关键词：心力衰竭受体,肾上腺素能β3 大鼠心房超速激活延迟整流钾电流

夹竹桃麻素对过氧化氢所致兔心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流及瞬时外向钾电流异常的保护作用

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中国心脏起搏与心电生理杂志 2012年第5期26卷 422-426页

作者：刘岩李泱林琨田苗王玉堂单兆亮解放军总医院心内科北京100853 解放军总医院老年心血管病研究所北京100853

目的研究夹竹桃麻素(APO)对过氧化氢(H2O2)引起的兔单个心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流(IKUr)及瞬时外向钾电流(Ito)异常的保护作用。方法用酶解法分离兔心房肌细胞,将细胞分为4组:对照组(细胞不经任何处理)、H2O2组(细胞经50μmol/L... 详细信息

目的研究夹竹桃麻素(APO)对过氧化氢(H2O2)引起的兔单个心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流(IKUr)及瞬时外向钾电流(Ito)异常的保护作用。方法用酶解法分离兔心房肌细胞,将细胞分为4组:对照组(细胞不经任何处理)、H2O2组(细胞经50μmol/L的H2O2培养0.5 h)、H2O2+APO组(细胞预先经100μg/ml APO培养1 h后再加入50μmol/L的H2O2培养0.5 h)、APO组(细胞经100μg/mlAPO培养1.5 h)。采用全细胞膜片钳技术记录4组细胞IKUr和Ito,分析50μmol/L的H2O2对兔单个心房肌细胞IKUr及Ito的影响,并研究预先应用100μg/ml APO对其的保护作用。结果①与对照组比较,H2O2组使兔心房肌细胞IKUr峰值降低(6.1±1.4 pA/pF vs16.0±2.1 pA/pF,P电流得到部分恢复(10.1±1.3 pA/pF),与H2O2组比差异有显著性(P0.05,n=15)。②与对照组比较,H2O2组使兔心房肌细胞Ito峰值降低(20.8±2.0 pA/pF vs 42.6±3.0 pA/pF,P电流得到部分恢复(31.8±2.7 pA/pF),与H2O2组比差异显著(P0.05,n=15)。H2O2使Ito通道稳态激活曲线右移,通道稳态失活曲线及恢复时间不变,关闭态失活加速,APO可以部分恢复上述改变。结论 APO可减轻氧化应激对心房肌细胞IKUr及Ito的影响。

关键词：电生理学夹竹桃麻素心房肌细胞过氧化氢超速激活延迟整流钾电流瞬时外向钾电流

胡椒碱减轻H2O2引起的兔心房肌细胞内向整流钾电流(IK1)及超速激活延迟整流钾电流(IKUr)的异常的改变

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胡椒碱减轻H2O2引起的兔心房肌细胞内向整流钾电流(IK1)及超速激...