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西马特罗分子印迹荧光检测试纸条的研制

分析化学 2016年第10期44卷 1477-1481页

作者：张连明黄小云张英明李建平张兰曾英桂林理工大学化学与生物工程学院成都理工大学材料与化学化工学院广西分析测试研究中心

将分子印迹技术良好的选择性与试纸条快速检测的特点相结合,研制了一种快速检测西马特罗的分子印迹试纸条。以西马特罗为模板分子,化学聚合法制备西马特罗分子印迹聚合物,将其附着在硝酸纤维素膜上。洗脱模板分子后,裁剪压制得到分子印... 详细信息

将分子印迹技术良好的选择性与试纸条快速检测的特点相结合,研制了一种快速检测西马特罗的分子印迹试纸条。以西马特罗为模板分子,化学聚合法制备西马特罗分子印迹聚合物,将其附着在硝酸纤维素膜上。洗脱模板分子后,裁剪压制得到分子印迹试纸条。试纸条识别样品中西马特罗后,滴加荧光物质曙红Y,根据反应区内西马特罗与曙红Y反应后荧光猝灭程度对西马特罗进行分析。研究结果表明,在0.01;00μg/m L浓度范围内,荧光猝灭程度随着西马特罗浓度的增加而增大,最低检测浓度为0.01μg/m L。此试纸条制备简单,操作简便,可用于现场检测。将其用于猪肉和饲料样品中西马特罗的快速测定,结果令人满意。

关键词：试纸条分子印迹西马特罗荧光曙红Y

西马特罗多克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立

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河南农业科学 2020年第6期49卷 157-164页

作者：司艳芳李鹏郭东光孙国鹏岳锋王选年新乡学院生命科学技术学院河南新乡453003 郑州大学生命科学技术学院河南郑州450000

为建立一种特异、敏感、快速、准确的西马特罗(Cimaterol,CIM)残留检测方法,成功合成其完全抗原并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立其免疫学检测方法。应用重氮化法偶联西马特罗与载体蛋白BSA、OVA,合成免疫抗原CIM-BSA和检测抗原CI... 详细信息

为建立一种特异、敏感、快速、准确的西马特罗(Cimaterol,CIM)残留检测方法,成功合成其完全抗原并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立其免疫学检测方法。应用重氮化法偶联西马特罗与载体蛋白BSA、OVA,合成免疫抗原CIM-BSA和检测抗原CIM-OVA,并采用UV、SDS-PAGE、质谱3种方法进行完全抗原的鉴定。用CIM-BSA免疫新西兰大白兔制备抗西马特罗多克隆抗体并建立间接竞争ELISA检测方法。结果表明,成功合成了西马特罗完全抗原,具有合成抗原的分子特征;免疫新西兰大白兔后,成功制备了抗西马特罗多克隆抗体,其效价为1∶64000,对西马特罗的半数抑制质量浓度为4.26μg/L,与特布他林、莱克多巴胺、沙丁胺醇、齐帕特罗等β2型受体激动剂药物无交叉反应。经过条件优化,建立了西马特罗间接竞争性ELISA检测方法,其最低检测限为0.04μg/L,在0.1~12.8μg/L检测范围内,线性关系拟合度为R2=0.9771,拟合曲线方程为y=-0.2469x+0.6623。检测猪尿和饲料样品,回收率分别为96.3%~103.9%和67.0%~105.0%。综上,成功建立了具有良好应用前景的西马特罗间接竞争ELISA免疫学检测方法。

关键词：西马特罗重氮化法完全抗原间接竞争ELISA 多克隆抗体残留检测

西马特罗单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

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中国酿造 2020年第9期39卷 169-173页

作者：吴小胜臧勇军李斌贾芳芳万宇平马玉华何方洋北京勤邦生物技术有限公司北京102206 河南双汇投资发展股份有限公司河南漯河462003 广州市从化区动物卫生监督所广东广州510900 北京市食品安全免疫快速检测工程技术研究中心北京102206

通过制备西马特罗半抗原,载体蛋白与之偶联合成免疫原,免疫原用于免疫动物,获得抗西马特罗单克隆抗体,制备能够检测猪尿中西马特罗残留量的酶联免疫试剂盒。结果表明,该试剂盒对猪尿中西马特罗的检测限为0.295μg/L,半抑制浓度(IC50)值... 详细信息

通过制备西马特罗半抗原,载体蛋白与之偶联合成免疫原,免疫原用于免疫动物,获得抗西马特罗单克隆抗体,制备能够检测猪尿中西马特罗残留量的酶联免疫试剂盒。结果表明,该试剂盒对猪尿中西马特罗的检测限为0.295μg/L,半抑制浓度(IC50)值为0.870μg/L,回收率范围为81.5%~103.5%,标准曲线线性范围为0.1~8.1μg/L,精密度试验结果批内、批间的相对标准偏差(RSD)均西马特罗德快速检测。

关键词：西马特罗单克隆抗体酶联免疫吸附测定试剂盒

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DNA辅助识别的西马特罗分子印迹传感器

分析化学 2018年第11期46卷 1770-1777页

作者：张连明张东友曾英李建平桂林理工大学电磁化学功能物质广西重点实验室化学与生物工程学院成都理工大学材料与化学化工学院

利用DNA改善印迹孔穴对模板分子空间识别性能,建立了高选择性印迹材料的制备新方法,并用于痕量西马特罗的测定。在金电极表面自组装固定双链DNA,待西马特罗与DNA双链进行结合后,以西马特罗-DNA复合物为模板,电聚合制备西马特罗-DNA复合... 详细信息

利用DNA改善印迹孔穴对模板分子空间识别性能,建立了高选择性印迹材料的制备新方法,并用于痕量西马特罗的测定。在金电极表面自组装固定双链DNA,待西马特罗与DNA双链进行结合后,以西马特罗-DNA复合物为模板,电聚合制备西马特罗-DNA复合物的分子印迹聚合物膜。去除待测分子西马特罗,得到对西马特罗具有高特异性识别能力的分子印迹传感器。对传感器制备及工作条件进行了优化,利用紫外吸收光谱对西马特罗与DNA的结合方式进行了研究。结果表明,二者之间的相互作用模式为沟槽式结合。印迹膜以乙醇-乙酸（8∶1,V/V）为洗脱剂,洗脱时间为35 min,重吸附时间为45 min。以铁氰化物作为探针,其氧化电流与西马特罗浓度在1. 0×10;～1. 0×10;mol/L范围内呈线性关系,检出限为3. 2×10;mol/L（S/N=3）。将传感器成功应用于猪肉样品中西马特罗的检测,结果良好。

关键词：分子印迹西马特罗电化学传感器 DNA 选择性识别

酶联免疫吸附法快速检测畜禽产品中西马特罗药物残留

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食品安全质量检测学报 2022年第21期13卷 6923-6931页

作者：司艳芳岳锋郭东光齐永华李鹏孙国鹏李新丽马钰鑫王选年新乡学院生物技术研究中心新乡453000 新乡学院3D打印学院新乡453000

目的建立一种以单链抗体为基础的酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测畜禽产品中西马特罗(cimaterol,CIM)药物残留。方法以重氮化法合成的西马特罗完全抗原CIM-牛血清白蛋白(bovine albumin,BSA)免疫新西... 详细信息

目的建立一种以单链抗体为基础的酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测畜禽产品中西马特罗(cimaterol,CIM)药物残留。方法以重氮化法合成的西马特罗完全抗原CIM-牛血清白蛋白(bovine albumin,BSA)免疫新西兰大白兔,用兔脾细胞总RNA反转录合成c DNA第一链,设计引物扩增兔源抗体重链可变区(heavy chain variable region,VH)和轻链可变区(light chain variable region,VL),通过45 bp的连接肽(Linker)使用新型重叠延伸聚合酶链式反应技术(splicing by overlap extension polymerase chain reaction,SOE-PCR)连接成VH-Linker-VL并大量制备;利用噬菌体表面展示技术将单链抗体(single-chain variable fragment,Sc Fv)片段与噬菌体展示载体p CANTAB-5e连接,电转化至大肠杆菌TG1感受态细胞,得到兔源噬菌体Sc Fv抗体库。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)判断是否偶联成功,用紫外(ultraviolet,UV)扫描及基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption tandem time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)测定人工抗原的偶联比。用ELISA测定免疫兔血清质量。鉴定合成抗体库并对抗体库进行4轮淘选,取最优的CIM-Sc Fv进行氨基酸序列分析。结果CIM-BSA及CIM-鸡卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)偶联比分别为8:1及10:1,免疫血清校价为1:32000,半数抑制浓度为9.77 ng/m L,标准曲线的拟合度为0.997。抗西马特罗兔源噬菌体Sc Fv免疫库的插入率为92%,库容为1×1010 pfu,多样性为83.3%,经淘选获得一株与CIM有结合活性的噬菌体Sc Fv菌。结论西马特罗完全抗原的合成效果良好,可用于建立西马特罗检测方法,兔源噬菌体抗体库为快速获得CIM单链抗体奠定基础,为西马特罗快速检测提供了新思路。

关键词：畜禽产品西马特罗重氮化法兔源噬菌体抗体库单链抗体噬菌体展示

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西马特罗单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定

畜牧与兽医 2016年第3期48卷 123-126页

作者：李君华吴萌程华李亚璞闫静辉李春生河北省科学院生物研究所河北石家庄050081

为建立检测西马特罗(CIM)的免疫学方法,本试验采用重氮化法成功合成了人工免疫抗原CIM-BSA,并用人工合成的抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备抗CIM的单克隆抗体(CIM m Ab),并对其效价、敏感性、特异性和亲和性等免疫学特性进行... 详细信息

为建立检测西马特罗(CIM)的免疫学方法,本试验采用重氮化法成功合成了人工免疫抗原CIM-BSA,并用人工合成的抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备抗CIM的单克隆抗体(CIM m Ab),并对其效价、敏感性、特异性和亲和性等免疫学特性进行了鉴定。结果表明,免疫的5只小鼠血清效价均达到1∶1×105,IC50均在10ng/m L以下,其中4号、5号小鼠的效价达2×105,IC50小于1ng/m L。融合后筛选出1C8、2G11、2D4共3株分泌抗CIM小分子的高特异、高灵敏的单克隆抗体的细胞株,细胞培养上清ELISA效价分别为1∶1.28×104、1∶6.4×103、1∶3.2×103,腹水效价分别为1∶4.1×105、1∶2.0×105、1∶2.0×105,3株细胞株分泌的抗CIM的单克隆抗体经亚型试剂盒测定均为Ig G1/λ链,亲和常数(Ka)经测定分别为5.5×108、2.4×108、1.0×108(L/mol),其中亲和力最高的细胞株1C8对CIM的IC50为0.288 ng/m L,与CL小分子的CR%为0.576%,与其他类似物的CR%均小于0.02%。本试验获得了灵敏度高、特异性好的CIM m Ab,为CIM残留检测的免疫学方法的建立奠定了基础。

关键词：西马特罗单克隆抗体融合免疫学特性 ELISA

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西马特罗免疫抗原合成方法的比较

畜牧与兽医 2014年第8期46卷 61-64页

作者：李春生李君华武孝利李素红闫静辉吴萌河北省科学院生物研究所河北石家庄050081 秦皇岛市农产品质量安全监督检验中心河北秦皇岛066000 保定市动物产品检验检测中心河北保定071000

为探讨西马特罗(CIM)免疫抗原合成的有效途径,本研究采用重氮化法、碳化二亚胺法和BS3法分别合成CIM免疫抗原,并采用SDSPAGE和紫外光谱扫描对合成抗原进行了鉴定,并将3种免疫抗原免疫BALB/c小鼠,对免疫效果进行了比较。试验表明,3种方... 详细信息

为探讨西马特罗(CIM)免疫抗原合成的有效途径,本研究采用重氮化法、碳化二亚胺法和BS3法分别合成CIM免疫抗原,并采用SDSPAGE和紫外光谱扫描对合成抗原进行了鉴定,并将3种免疫抗原免疫BALB/c小鼠,对免疫效果进行了比较。试验表明,3种方法均合成了CIM免疫抗原,经偶联比的计算,重氮化法的偶联比比较理想,且免疫小鼠后可获得高效价、高特异的抗体。

关键词：西马特罗半抗原完全抗原偶联比率

酶联免疫分析方法测定动物性食品中西马特罗残留

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食品安全质量检测学报 2021年第8期12卷 3090-3097页

作者：张燕陈启镌罗美芬孙魁魁曾道平杨金易广东产品质量监督检验研究院顺德528300 温氏食品集团股份有限公司云浮527499 华南农业大学食品学院广州510642

目的建立检测西马特罗药物残留的酶联免疫分析方法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。方法对主要影响因素,包括包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、竞争时间、标准品稀释液pH等参数进行优化,对样品进行前处理,经提取净化后进行检测... 详细信息

目的建立检测西马特罗药物残留的酶联免疫分析方法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。方法对主要影响因素,包括包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、竞争时间、标准品稀释液pH等参数进行优化,对样品进行前处理,经提取净化后进行检测,并对ELISA检测结果与仪器方法进行对比。结果西马特罗ELISA方法的最佳反应条件为:抗原稀释倍数为100000,抗体稀释倍数为150000,标品稀释液pH为7.5,竞争反应时间为20 min。在最佳反应条件下,绘制标准曲线,西马特罗的IC50为1.32μg/L,线性范围为0.16~6.95μg/L,检出限为0.09μg/L。西马特罗在0.16、0.32、1.6μg/kg添加水平的回收率分别为80.31%~113.81%,变异系数低于10%,且实际样品的测定结果与超高效液相串联质谱法的相关性良好(r2=0.9962)。结论本研究建立的ELISA方法具有较高的灵敏性,适合西马特罗残留检测。

关键词：动物性食品酶联免疫分析方法西马特罗

7个β-受体激动剂的电喷雾质谱裂解规律研究

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药物分析杂志 2018年第8期38卷 1419-1426页

作者：王聪梁瑞强钮正睿曹进中国食品药品检定研究院北京100050

目的:对7个β-受体激动剂(西马特罗、西布特罗、克伦特罗、莱克多巴胺、特布他林、沙丁胺醇、氯丙那林)的电喷雾质谱裂解规律进行研究。方法:采用电喷雾正离子化-四极杆飞行时间质谱,碰撞气为高纯氮气,干燥气温度为350℃,干燥气流速10 L... 详细信息

目的:对7个β-受体激动剂(西马特罗、西布特罗、克伦特罗、莱克多巴胺、特布他林、沙丁胺醇、氯丙那林)的电喷雾质谱裂解规律进行研究。方法:采用电喷雾正离子化-四极杆飞行时间质谱,碰撞气为高纯氮气,干燥气温度为350℃,干燥气流速10 L·min^(-1),毛细管出口电压为125 V,对7个不同类型β-受体激动剂进行质谱分析。结果:β-受体激动剂在正离子检测模式下易发生质子化,形成[M+H]^+的准分子离子,用高分辨质谱对准分子离子进行碰撞诱导解离,形成特征碎片离子,根据精确质量数对碎片离子进行确证,分析各类β-受体激动剂的裂解规律。结论:本文提出的电喷雾质谱裂解规律可为β-受体激动剂的筛查、确证提供参考。

关键词： β-受体激动剂西马特罗西布特罗克伦特罗莱克多巴胺特布他林沙丁胺醇氯丙那林电喷雾-四极杆飞行时间质谱裂解规律