西马特罗多克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立

作     者：司艳芳 李鹏 郭东光 孙国鹏 岳锋 王选年 SI Yanfang;LI Peng;GUO Dongguang;SUN Guopeng;YUE Feng;WANG Xuannian

作者机构：新乡学院生命科学技术学院河南新乡453003 郑州大学生命科学技术学院河南郑州450000 

出 版 物：《河南农业科学》 (Journal of Henan Agricultural Sciences)

年 卷 期：2020年第49卷第6期

页      面：157-164页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2018YFC1602902) 河南省科技攻关项目(192102110066) 

主　　题：西马特罗 重氮化法 完全抗原 间接竞争ELISA 多克隆抗体 残留检测 

摘      要：为建立一种特异、敏感、快速、准确的西马特罗(Cimaterol,CIM)残留检测方法,成功合成其完全抗原并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立其免疫学检测方法。应用重氮化法偶联西马特罗与载体蛋白BSA、OVA,合成免疫抗原CIM-BSA和检测抗原CIM-OVA,并采用UV、SDS-PAGE、质谱3种方法进行完全抗原的鉴定。用CIM-BSA免疫新西兰大白兔制备抗西马特罗多克隆抗体并建立间接竞争ELISA检测方法。结果表明,成功合成了西马特罗完全抗原,具有合成抗原的分子特征;免疫新西兰大白兔后,成功制备了抗西马特罗多克隆抗体,其效价为1∶64000,对西马特罗的半数抑制质量浓度为4.26μg/L,与特布他林、莱克多巴胺、沙丁胺醇、齐帕特罗等β2型受体激动剂药物无交叉反应。经过条件优化,建立了西马特罗间接竞争性ELISA检测方法,其最低检测限为0.04μg/L,在0.1~12.8μg/L检测范围内,线性关系拟合度为R2=0.9771,拟合曲线方程为y=-0.2469x+0.6623。检测猪尿和饲料样品,回收率分别为96.3%~103.9%和67.0%~105.0%。综上,成功建立了具有良好应用前景的西马特罗间接竞争ELISA免疫学检测方法。