检索结果-南通市图书馆

蛋白激酶a催化亚基VdPKAC1对菌丝型大丽轮枝菌V07DF2培养性状及致病力的调控

中国农业科学 2014年第17期47卷 3382-3391页

作者：邓晟张昕林玲江苏省农业科学院植物保护研究所

【目的】通过同源重组敲除技术,解析菌丝型大丽轮枝菌中蛋白激酶a催化亚基基因VdPKAC1在调控微菌核发育、产孢及其致病力方面的作用。【方法】利用Invitrogen公司的Gateway技术构建VdPKAC1的同源重组敲除质粒。该质粒的潮霉素抗性基... 详细信息

【目的】通过同源重组敲除技术,解析菌丝型大丽轮枝菌中蛋白激酶a催化亚基基因VdPKAC1在调控微菌核发育、产孢及其致病力方面的作用。【方法】利用Invitrogen公司的Gateway技术构建VdPKAC1的同源重组敲除质粒。该质粒的潮霉素抗性基因盒两端分别为靶标基因5′和3′端各1 kb的DNA序列。通过农杆菌AGL-1的介导,将该质粒的T-DNA区域整合到来源于棉花的菌丝型大丽轮枝菌V07DF2菌株中。从6个随机选择的含有潮霉素抗性基因片段的转化子中,通过靶标基因的PCR检测,获得了5个VdPKAC1基因敲除突变体。经过Southern杂交检测,选择了3个敲除突变体材料(2B5、C5和HH2)进行突变表型的观察和分析。在液体PDB培养7 d后观察敲除突变体与野生型菌株的黑色素产生情况;在固体PDA培养28 d后,观察敲除突变体与野生菌株的菌丝生长和休眠结构形成情况。此外,利用棉花根提取物对液体Cazpek-Dox培养7 d的各菌株分别进行诱导处理,在处理24、72 h后分别统计分生孢子数量,以此对敲除突变体和野生菌株的分生孢子产生能力进行评估。最后,将孢子浓度为1×107个/mL的突变体和野生菌株的分生孢子液灌根接种2叶期的棉花,测定其致病力。【结果】Southern杂交结果表明,在上述5个敲除突变体中,只有2B5和C5两个菌株为T-DNA单拷贝插入,而其他菌株均存在T-DNA异位整合的情况。在PDA培养条件下,3个敲除突变体(2B5、C5和HH2)与野生型相比具有黑色素合成增加,气生菌丝更加发达的特点。其中,敲除突变体2B5和C5在平板培养条件下还形成了野生型菌株没有的、与典型微菌核形态不同的深褐色"链状休眠菌丝体结构"。在棉花根提取物的诱导处理下,3个敲除突变体产生的分生孢子数量少于野生型菌株。另外,致病力分析结果表明,敲除突变体材料仍然具有一定的致病力,但却显著弱于野生菌株V07DF2。【结论】在大丽轮枝菌中,通过蛋白激酶A介导的环腺苷酸信号途径控制多种重要性状,而VdPKAC1是这一途径中的重要成员。以前的报道证实,VdPKAC1负调控微菌核的数量,而本研究利用菌丝型菌株V07DF2在PDA培养基上不产生微菌核的这一特性,通过同源重组原理敲除该负调控基因,成功获得可以在PDA上产生休眠结构的菌丝型大丽轮枝菌菌株的突变体。这些突变体材料将为大丽轮枝菌微菌核发育信号途径及其调控基因的发掘提供平台和基础。

关键词：大丽轮枝菌棉花黄萎病蛋白激酶a催化亚基微菌核致病力生物学性状

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

烟曲霉蛋白激酶a催化亚基对孢子萌发和抗氧化损伤的调节作用

引用

医学研究生学报 2010年第10期23卷 1025-1028页

作者：周秀芝赵巍王斌喻娜娜闫志勇钱冬萌宋旭霞丁守怡青岛大学医学院青岛266071 滨州医学院病原生物学教研室

目的烟曲霉（Aspergillus fumigatus）是一种重要的条件致病性真菌,在免疫受损宿主体内引起侵袭性曲霉病。cAMP-PKA信号通路调控真菌的生长、发育等重要过程。文中检测了烟曲霉野生株（WT株）及蛋白激酶A（protein kinase a,PKA）催化... 详细信息

目的烟曲霉（Aspergillus fumigatus）是一种重要的条件致病性真菌,在免疫受损宿主体内引起侵袭性曲霉病。cAMP-PKA信号通路调控真菌的生长、发育等重要过程。文中检测了烟曲霉野生株（WT株）及蛋白激酶A（protein kinase a,PKA）催化亚基基因突变株（ΔpkaC1株）的孢子萌发曲线、菌株生长、对H2O2的敏感性,分析pkaC1在烟曲霉孢子萌发、抗氧化损伤中的作用。方法WT株和ΔpkaC1株孢子接种于曲霉菌基础培养液（Aspergillusminimal medium,AMM）,观察孢子萌发曲线和菌株径向生长曲线。孢子与不同浓度H2O2作用后涂于AMM上培养,计数残存菌落个数。结果WT株和ΔpkaC1株孢子均于培养4.5 h后开始出现第1个萌发管,ΔpkaC1株孢子萌发1个或1个以上萌发管的萌发动力学降低;ΔpkaC1出现第2个萌发管的时间相对于WT株推迟约1 h,于培养13 h时,WT株100%萌发2个或2个以上萌发管,此时ΔpkaC1株萌发2个或2个以上萌发管的萌发率约为42%。ΔpkaC1株生长缓慢,同时期菌落直径仅为WT株的1/3~1/2。低浓度的H2O2（0.005%~0.050%）处理后,WT株与ΔpkaC1株孢子的存活率差异有显著统计学意义（P〈0.01）;对高浓度H2O2（0.100%~0.500%）,存活率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论cAMP-PKA信号通路中PKA催化亚基在烟曲霉孢子萌发和抗氧化损伤中起着调节作用。

关键词：烟曲霉蛋白激酶a催化亚基过氧化氢氧化损伤

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

二苯乙烯苷对脑缺血再灌注大鼠神经保护的作用机制

引用

中南大学学报（医学版） 2010年第4期35卷 321-328页

作者：杨杰周芝文杨期东郑丽君曾进中南大学湘雅医院神经内科长沙410078

目的:探讨二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用机制。方法:雄性SD大鼠96只,随机分为4组:对照组,模型组,小剂量[60mg/(kg·d)]TSG组,大剂量[120mg/(kg·d)]TSG组,每组24只。TSG或生理盐水灌胃7d后应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,术后6,24,48h及7d观察动物神经行为学变化并评分,免疫组织化学法检测神经生长因子(NGF)、生长相关蛋白(GAP)-43和蛋白激酶a催化亚基(PKAc)蛋白的表达。结果:神经功能评分显示模型组各时间点均有明显的神经功能缺损症状,除6h时间点外,两个剂量TSG治疗组其余各时间点神经功能评分明显低于模型组,差异有统计学意义(P蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P蛋白表达两两之间呈正相关。结论:TSG可能通过诱导大鼠脑缺血-再灌注损伤后NGF蛋白表达上调,激活PKA通路,增加轴突再生标志物GAP-43蛋白的表达,从而起到神经保护作用。

关键词：二苯乙烯苷脑缺血再灌注神经生长因子生长相关蛋白-43 蛋白激酶a催化亚基

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

多头带绦虫转录组学分析及TmPKA-C基因的克隆与原核表达

多头带绦虫转录组学分析及TmPKA-C基因的克隆与原核表达

引用

作者：杨洋中国农业科学院

学位级别：硕士

脑多头蚴病(Cerebral coenurosis)是一种羊等动物的致死性中枢神经系统寄生虫病,由多头带绦虫(Taenia multiceps)的中绦期幼虫——脑多头蚴(Coenurus cerebralis)所引起。人也可以作为中间宿主被感染。多头带绦虫的生活史包括成虫、脑... 详细信息

脑多头蚴病(Cerebral coenurosis)是一种羊等动物的致死性中枢神经系统寄生虫病,由多头带绦虫(Taenia multiceps)的中绦期幼虫——脑多头蚴(Coenurus cerebralis)所引起。人也可以作为中间宿主被感染。多头带绦虫的生活史包括成虫、脑多头蚴(囊液、原头节和囊壁)、六钩蚴三个时期。为了与寄生生活相适应,多头带绦虫在不同发育阶段所表达的基因有所不同,研究其期特异性表达基因,对于进一步了解多头带绦虫虫体的发育机理及寄生生活具有重大意义。本研究利用RNA-seq转录组测序技术对多头带绦虫的六钩蚴、原头节、囊壁、成虫以及成虫的头颈节、未成熟-成熟节片和孕节共7个转录组样品进行了分析,共鉴定出12822个基因(FPKM>0)。分析了六钩蚴、原头节、囊壁和成虫之间以及成虫的头颈节、未成熟-成熟节片和孕节之间的差异表达基因(DEGs),其中成虫时期上调表达的基因数量高于其他时期,未成熟-成熟节片上调表达的基因数量高于头颈节和孕节,并且发现了大量与虫体发育和宿主相互作用相关的基因。通过进一步分析,在不同发育时期共鉴定到2437个期特异性上调表达基因,在成虫的不同组织部位共鉴定到1228个组织特异上调表达基因。GO分析发现,期特异性和组织特异性上调表达基因主要聚类到细胞过程和代谢过程、结合和催化活性以及细胞和细胞组分。KEGG分析发现这些特异性上调表达基因主要参与代谢、遗传信息处理、细胞过程和环境信息处理等过程。qRT-PCR实验结果表明,差异表达基因的mRNA转录水平与转录组学分析结果基本一致,说明运用RNA-seq测序技术鉴定的差异表达基因具有很高的可信度。根据转录组分析结果,筛选出蛋白激酶a催化亚基基因家族为进一步研究对象。该基因家族包含4个蛋白激酶a催化亚基基因,分别命名为TmPKA-C1、TmPKA-C2、TmPKA-C3和TmPKA-C4。根据4个TmPKA-C基因的开放阅读框(ORF)设计特异性引物,以成虫总RNA为模板,RT-PCR扩增获得了4个TmPKA-C基因的完整ORF。序列分析结果表明,这4个TmPKA-C基因均具有典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性位点、蛋白激酶ATP结合位点以及蛋白激酶结构域。综合生物信息学分析结果,选取TmPKA-C1和TmPKA-C2蛋白研究其反应原性。将TmPKA-C1和TmPKA-C2基因连接到pET30a原核表达载体,构建重组表达质粒,转入大肠杆菌感受态Transetta(DE3)后诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,重组蛋白TmPKA-C1和TmPKA-C2在原核系统获得了高效表达,分子大小分别为42 kDa和46 kDa,主要以包涵体的形式存在。Western blotting实验结果表明,重组蛋白TmPKA-C1和TmPKA-C2均具有反应原性,但TmPKA-C2反应原性较弱。进一步鉴定重组蛋白TmPKA-C1的反应原性,发现其能与人工感染脑多头蚴绵羊第19周的血清发生特异性反应,这为筛选羊脑多头蚴病诊断抗原奠定了基础。

关键词：多头带绦虫转录组学蛋白激酶a催化亚基原核表达反应原性

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

二苯乙烯苷对脑缺血再灌注大鼠大脑皮质NGF、PKAc及GAP-43蛋白表达的影响

二苯乙烯苷对脑缺血再灌注大鼠大脑皮质NGF、PKAc及GAP-43蛋白表...

引用

作者：周芝文中南大学

学位级别：硕士

背景与目的脑缺血损伤后细胞的存活、增殖受多种信号途径的调节。研究显示,外源性神经生长因子(NGF)能够上调cAMP的表达,激活PKA通路,使轴突生长相关蛋白43(GAP-43)的表达增加,促进轴突再生,起到神经保护作用。近年来研究发现中药何首乌... 详细信息

背景与目的脑缺血损伤后细胞的存活、增殖受多种信号途径的调节。研究显示,外源性神经生长因子(NGF)能够上调cAMP的表达,激活PKA通路,使轴突生长相关蛋白43(GAP-43)的表达增加,促进轴突再生,起到神经保护作用。近年来研究发现中药何首乌(polygonum multiflorum thunb)及其活性成分二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,简称TSG)对脑缺血损伤具有保护作用,但其作用机制与量效关系仍不十分明确。另外,有研究显示二苯乙烯苷能够提高内源性神经生长因子的表达,从而提高小鼠的学习记忆能力,起到脑保护作用。本研究将在大鼠脑缺血-再灌注损伤模型上,以二苯乙烯苷(两组剂量)为干预手段,通过动态观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血半暗带NGF、PKAc与GAP-43蛋白的表达及小、大两组TSG剂量对三者的影响,结合病理、神经功能和细胞凋亡方面,探讨该药在脑缺血保护作用中的可能机制及量效关系,以期为脑缺血的防治以及新药的开发提供实验基础。方法200～300g健康雄性SD大鼠,随机分为4组:对照组(n=24),模型组(n=24),小剂量TSG组(n=24),大剂量TSG组(n=24)。小剂量为60mg/kg/d、大剂量为120mg/kg/d两种剂量灌胃,给药体积5ml/kg/d,模型组以等量的生理盐水灌胃,第七天灌胃后1h行Longa线栓法制备大脑中动脉栓塞模型(MCAO)。按Longa的5级标准评分法评价神经功能缺损。再灌注6h、24h、48h、7d共4个时间点处死大鼠。分别采用HE染色观察缺血周边区病理组织学变化;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡;免疫组化法检测NGF、PKAc及GAP-43蛋白表达变化。结果1、两种剂量TSG组神经功能缺损程度除6h时间点外其余各时间点均低于模型组。2、模型组与两种剂量TSG组再灌注24h的HE染色均显示出典型的坏死灶和神经元丢失。3、对照组检测到少量凋亡细胞;模型组与TSG组再灌注6h后凋亡细胞开始增多,24h达高峰,48h明显下降,7d仅有少量表达。与模型组对比,除7d外,其余各时间点两种剂量TSG组凋亡细胞数减少;两种剂量TSG组间无明显差异。4、对照组各时间点检测到少量NGF、PKAc及GAP-43蛋白的表达。模型组与TSG组NGF、PKAc、GAP-43蛋白的表达变化基本一致,其中前两者再灌注6h后出现阳性表达,24h达到高峰,48h表达下降,7天少量表达;而GAP-43再灌注6h表达同对照组,24h表达增加,48h达高峰,7d仍有表达。对比模型组,TSG治疗组在各时间点NGF、PKAc及GAP-43蛋白的表达明显上调,两个TSG剂量组间无明显差异。结论***能够诱导大鼠脑缺血-再灌注损伤后NGF蛋白表达上调,激活PKA通路,增加GAP-43蛋白的表达,促进轴突再生。***两组剂量上调NGF、PKAc及GAP-43蛋白表达差异不明显。

关键词：脑缺血再灌注损伤二苯乙烯苷神经生长因子蛋白激酶a催化亚基生长相关蛋白-43

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：