二苯乙烯苷对脑缺血再灌注大鼠大脑皮质NGF、PKAc及GAP-43蛋白表达的影响

作     者：周芝文 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨杰

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：脑缺血再灌注损伤 二苯乙烯苷 神经生长因子 蛋白激酶A催化亚基 生长相关蛋白-43 

摘      要：背景与目的脑缺血损伤后细胞的存活、增殖受多种信号途径的调节。研究显示,外源性神经生长因子(NGF)能够上调cAMP的表达,激活PKA通路,使轴突生长相关蛋白43(GAP-43)的表达增加,促进轴突再生,起到神经保护作用。近年来研究发现中药何首乌(polygonum multiflorum thunb)及其活性成分二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,简称TSG)对脑缺血损伤具有保护作用,但其作用机制与量效关系仍不十分明确。另外,有研究显示二苯乙烯苷能够提高内源性神经生长因子的表达,从而提高小鼠的学习记忆能力,起到脑保护作用。本研究将在大鼠脑缺血-再灌注损伤模型上,以二苯乙烯苷(两组剂量)为干预手段,通过动态观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血半暗带NGF、PKAc与GAP-43蛋白的表达及小、大两组TSG剂量对三者的影响,结合病理、神经功能和细胞凋亡方面,探讨该药在脑缺血保护作用中的可能机制及量效关系,以期为脑缺血的防治以及新药的开发提供实验基础。 方法200～300g健康雄性SD大鼠,随机分为4组:对照组(n=24),模型组(n=24),小剂量TSG组(n=24),大剂量TSG组(n=24)。小剂量为60mg/kg/d、大剂量为120mg/kg/d两种剂量灌胃,给药体积5ml/kg/d,模型组以等量的生理盐水灌胃,第七天灌胃后1h行Longa线栓法制备大脑中动脉栓塞模型(MCAO)。按Longa的5级标准评分法评价神经功能缺损。再灌注6h、24h、48h、7d共4个时间点处死大鼠。分别采用HE染色观察缺血周边区病理组织学变化;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡;免疫组化法检测NGF、PKAc及GAP-43蛋白表达变化。 结果1、两种剂量TSG组神经功能缺损程度除6h时间点外其余各时间点均低于模型组。 2、模型组与两种剂量TSG组再灌注24h的HE染色均显示出典型的坏死灶和神经元丢失。 3、对照组检测到少量凋亡细胞;模型组与TSG组再灌注6h后凋亡细胞开始增多,24h达高峰,48h明显下降,7d仅有少量表达。与模型组对比,除7d外,其余各时间点两种剂量TSG组凋亡细胞数减少;两种剂量TSG组间无明显差异。 4、对照组各时间点检测到少量NGF、PKAc及GAP-43蛋白的表达。模型组与TSG组NGF、PKAc、GAP-43蛋白的表达变化基本一致,其中前两者再灌注6h后出现阳性表达,24h达到高峰,48h表达下降,7天少量表达;而GAP-43再灌注6h表达同对照组,24h表达增加,48h达高峰,7d仍有表达。对比模型组,TSG治疗组在各时间点NGF、PKAc及GAP-43蛋白的表达明显上调,两个TSG剂量组间无明显差异。 结论***能够诱导大鼠脑缺血-再灌注损伤后NGF蛋白表达上调,激活PKA通路,增加GAP-43蛋白的表达,促进轴突再生。 ***两组剂量上调NGF、PKAc及GAP-43蛋白表达差异不明显。