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菟丝子黄酮通过ERK/Nrf2-ARE信号通路缓解睾丸氧化损伤的研究

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菟丝子黄酮通过ERK/Nrf2-ARE信号通路缓解睾丸氧化损伤的研究

作者：李利娟新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:探究菟丝子黄酮（Total Flavonoids from Semen Cuscutae,TFSC）缓解睾丸氧化损伤的作用及其可能机制。方法:1)将48只雄性Balb/c小鼠随机分为四组:对照组、模型组、TFSC低剂量组和TFSC高剂量组,每组12只。除对照组,其余各组均用腹... 详细信息

目的:探究菟丝子黄酮（Total Flavonoids from Semen Cuscutae,TFSC）缓解睾丸氧化损伤的作用及其可能机制。方法:1)将48只雄性Balb/c小鼠随机分为四组:对照组、模型组、TFSC低剂量组和TFSC高剂量组,每组12只。除对照组,其余各组均用腹腔注射环磷酰胺（cyclophosphamide,CP）构建睾丸损伤模型,TFSC低（35mg/kg）、高（70mg/kg）剂量组分别进行TFSC灌胃干预,连续4周。观察小鼠体重、生殖器官指数和精子数目及活率;组织切片观察睾丸形态改变;FRAP法和TBA法检测睾丸组织中T-AOC和MDA含量变化;2)ELISA检测小鼠血清睾酮含量;3)Western blotting检测睾丸组织中p-ERK/ERK、Nrf2、NQO1、HO-1、Bax和Bcl-2蛋白的表达情况;4)体外培养TM3细胞（小鼠睾丸间质细胞）,CCK8法筛选丙烯醛（acrolein,ACR）的细胞半数致死量及TFSC的最适作用剂量;设置对照组、ACR模型组、TFSC低（100μg/m L）、中（200μg/m L）、高（400μg/m L）剂量组;CCK8检测TFSC对ACR诱导的细胞增殖的影响;5)流式细胞仪检测TM3细胞的凋亡情况;6)FRAP法和TBA法检测TM3细胞中T-AOC和MDA含量变化;7)Western blotting检测细胞中p-ERK/ERK、Nrf2、NQO1、HO-1、Bax、caspase-3和Bcl-2蛋白的表达情况。结果:1)与对照组相比,模型组小鼠体重、睾丸重量及睾丸指数、精子数目及活率均明显降低（P＜0.05）,睾丸组织结构受损,生精小管内的各级生精细胞层数减少,排列紊乱,管腔变大,腔内精子细胞数量稀疏;睾丸组织内氧化应激指标MDA明显升高（P＜0.05）,总抗氧化能力（T-AOC）降低（P＜0.05）,提示造模成功。与模型组相比,TFSC干预组小鼠体重、睾丸重量及睾丸指数、精子数目及精子活率均升高（P＜0.05）,睾丸组织损伤程度减弱,T-AOC升高（P＜0.05）,MDA含量降低（P＜0.05）,睾丸氧化损伤缓解;2)ELISA结果显示,与对照组相比,模型组睾酮含量降低（P＜0.05）;与模型组相比,TFSC高剂量组小鼠血清睾酮含量升高（P＜0.05）;3)Western blotting结果显示,与对照组相比,模型组睾丸组织中p-ERK/ERK、Nrf2、NQO1、HO-1和Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.05）,Bax蛋白表达升高（P＜0.05）;与模型组相比,TFSC干预组睾丸组织p-ERK/ERK、Nrf2、NQO1和Bcl-2蛋白表达升高（P＜0.05）,Bax蛋白表达降低（P＜0.05）;4)TFSC浓度为100、200和400μg/m L时明显促进TM3细胞增殖（P＜0.05）;ACR浓度为33.97μmol/L时,达到细胞半数致死量。与对照组相比,模型组细胞增殖率明显降低（P＜0.05）;与模型组相比,TFSC中、高剂量组细胞增殖率升高（P＜0.05）;5)流式结果显示,与对照组相比,ACR干预TM3细胞后,凋亡率明显增高（P＜0.05）;而TFSC中、高剂量组细胞凋亡率降低（P＜0.05）;6)与对照组相比,ACR模型组MDA含量升高（P＜0.05）,T-AOC降低（P＜0.05）;与ACR模型组相比,TFSC干预后细胞内MDA含量降低（P＜0.05）,T-AOC升高（P＜0.05）;7)Western blotting结果显示,p-ERK/ERK、Nrf2、NQO1、HO-1和Bcl-2蛋白表达在ACR模型组明显降低（P＜0.05）,而TFSC能提高其表达（P＜0.05）;Bax和caspase-3蛋白表达在ACR模型组明显升高（P＜0.05）,TFSC能降低其表达（P＜0.05）。加入Nrf2抑制剂ML385后,与抑制剂未干预组相比,Nrf2、NQO1、HO-1和Bcl-2的表达降低（P＜0.05）,Bax的表达升高（P＜0.05）。结论:TFSC可能通过激活ERK/Nrf2-ARE信号通路,促进TM3细胞增殖,抑制其凋亡,从而缓解环磷酰胺诱导的小鼠睾丸氧化损伤。

关键词：菟丝子黄酮睾丸 TM3细胞睾酮 Nrf2-ARE信号通路

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菟丝子黄酮的微胶囊化及释放性能研究

农业工程学报 2006年第9期22卷 264-266页

作者：吴春陈林林李健哈尔滨商业大学食品工程学院哈尔滨150076

该试验采用微胶囊技术,选用β-环糊精、阿拉伯胶、乙基纤维素作为复合壁材,对菟丝子黄酮进行微胶囊化,旨在提高菟丝子黄酮的稳定性,掩盖来自提取原料的不良风味,改善其油溶性,扩大其应用范围。结果表明:芯壁材比为10∶90,3种壁材配比为1... 详细信息

该试验采用微胶囊技术,选用β-环糊精、阿拉伯胶、乙基纤维素作为复合壁材,对菟丝子黄酮进行微胶囊化,旨在提高菟丝子黄酮的稳定性,掩盖来自提取原料的不良风味,改善其油溶性,扩大其应用范围。结果表明:芯壁材比为10∶90,3种壁材配比为19.82∶31.51∶48.67,单甘酯加入量为芯材的0.4%,产品包埋率可达88.31%。微胶囊化产品芯材在不同极性的介质中均有释放的特性,在油溶性介质中的持续释放时间最长。说明该微胶囊化产品作为天然抗氧化剂可用于油溶性介质,通过控制释放发挥其抗氧化作用。

关键词：菟丝子黄酮微胶囊化释放性能

菟丝子黄酮对精索静脉曲张大鼠生精功能的影响

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解剖学研究 2022年第5期44卷 419-424页

作者：郭石磊张丽云李志强张云吴真富福建省宁德市医院泌尿外科福建宁德352100

目的探究菟丝子黄酮(FSC)对核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的调控作用以及对精索静脉曲张(VC)大鼠生精功能的影响。方法 90只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、迈之灵组、FSC低、中、高剂量组,并建立VC大鼠模... 详细信息

目的探究菟丝子黄酮(FSC)对核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的调控作用以及对精索静脉曲张(VC)大鼠生精功能的影响。方法 90只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、迈之灵组、FSC低、中、高剂量组,并建立VC大鼠模型。实验结束肾静脉取血,检测血清中丙二醛(MDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活性;取左侧附睾分析精子浓度与精子活力;取睾丸观察组织形态变化和细胞凋亡情况,检测一氧化氮(NO)含量以及Nrf2、HO-1蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠睾丸组织结构病变明显,生精小管上皮变薄,出现变形甚至塌陷,生精细胞缺失,管腔内精子数量明显变少;血清中MDA含量[模型组、假手术组分别为(1.86±0.12)nmol/mL、(0.42±0.06)nmol/L]、生精细胞凋亡指数[模型组、假手术组分别为(26.50±1.89)%、(5.33±0.51)%]、NO含量[模型组、假手术组分别为(1.63±0.10)mg/mL、(0.88±0.08)mg/mL]明显升高(P0.05)。结论 FSC可以通过激活睾丸组织中Nrf2/HO-1信号通路,抗氧化应激、抗细胞凋亡,保护VC大鼠生精功能。

关键词：菟丝子黄酮核因子E2相关因子2 血红素加氧酶-1 精索静脉曲张生精功能

菟丝子黄酮对H2O2诱导的COV434人卵巢颗粒细胞氧化应激的影响

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妇产与遗传（电子版） 2023年第1期13卷 18-24页

作者：班兆乔李慕军广西医科大学第一附属医院生殖医学中心南宁537300

目的研究菟丝子黄酮(flavonoid from semen cuscutae,FSC)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人卵巢颗粒细胞氧化应激的影响以及可能相关的作用机制。方法使用不同浓度H_(2)O_(2)处理人卵巢颗粒细胞(COV434)2 h,用CCK-8检测法评估细胞增殖活... 详细信息

目的研究菟丝子黄酮(flavonoid from semen cuscutae,FSC)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人卵巢颗粒细胞氧化应激的影响以及可能相关的作用机制。方法使用不同浓度H_(2)O_(2)处理人卵巢颗粒细胞(COV434)2 h,用CCK-8检测法评估细胞增殖活力,以确定构建细胞外氧化应激模型的H_(2)O_(2)刺激浓度;检测不同浓度的FSC对细胞的毒性作用;使用25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL的FSC处理氧化应激模型组细胞,CCK-8法检测FSC对细胞增殖活力的影响。根据处理条件将细胞分为四组:Control组,FSC组,H_(2)O_(2)组,FSC+H_(2)O_(2)组,使用CCK-8检测细胞增殖率,活性氧(ROS)试剂盒测定细胞内ROS含量,采用Western blot测定AMPK、P-AMPK、Bax和P53蛋白的表达量。结果0.5 mmol/L的H_(2)O_(2)处理2 h为构建COV434细胞氧化应激模型最佳条件。同时,100μg/mL FSC处理24h为最佳预处理条件。H_(2)O_(2)处理后细胞增殖活力下降,ROS水平上升,FSC处理可以降低ROS水平。Western Blot结果表明,H_(2)O_(2)处理后P-AMPK蛋白表达下调,P53和Bax表达升高,而FSC可以逆转这一趋势。结论H_(2)O_(2)可能通过抑制AMPK通路进而影响下游P53、Bax的表达,FSC可逆转H_(2)O_(2)所致的COV434细胞氧化损伤这一作用。

关键词：卵巢功能不全菟丝子黄酮氧化应激

菟丝子黄酮对大鼠种植窗期子宫内膜容受性的影响

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广州中医药大学学报 2022年第8期39卷 1886-1892页

作者：李莹陈建玲吴佩蔚黄亚哲张帅张丹南阳市中心医院生殖医学科河南南阳473400 郑州大学第二附属医院生殖医学部河南郑州450000

【目的】观察菟丝子黄酮对大鼠种植窗期子宫内膜容受性的影响。【方法】将40只胚胎种植窗期大鼠皮下注射米非司酮溶液建立胚胎着床障碍模型后,随机分为模型组、Stattic[信号转导和转录激活因子3(STAT3)抑制剂]+中药组、中药组、阳性对照... 详细信息

【目的】观察菟丝子黄酮对大鼠种植窗期子宫内膜容受性的影响。【方法】将40只胚胎种植窗期大鼠皮下注射米非司酮溶液建立胚胎着床障碍模型后,随机分为模型组、Stattic[信号转导和转录激活因子3(STAT3)抑制剂]+中药组、中药组、阳性对照组,每组10只,另设正常组10只。在妊娠第1~5天:Stattic+中药组先后给予Stattic混悬液3.75 mg/kg、菟丝子黄酮混悬液530.1 mg/kg灌胃;中药组给予530.1 mg/kg菟丝子黄酮混悬液灌胃;阳性对照组给予阿司匹林混悬液4.8 mg/kg灌胃;正常组和模型组给予等体积生理盐水(4 mL/kg)灌胃。每日1次。给药结束后,观察大鼠种植窗期一般情况,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平,观察着床胚泡情况,苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠子宫内膜组织病理形态,免疫组织化学染色法检测子宫内膜微血管密度(MVD),蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测大鼠子宫内膜STAT3信号通路相关蛋白表达。【结果】模型组、Stattic+中药组、中药组、阳性对照组、正常组,大鼠子宫内膜胚泡着床数目依次增多(P菟丝子黄酮可能通过激活STAT3信号通路改善大鼠种植窗期子宫内膜容受性。

关键词：菟丝子黄酮子宫内膜容受性种植窗期信号转导和转录激活因子3信号通路大鼠

菟丝子黄酮对少弱精子症大鼠睾丸GM-CSF表达的影响

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中华男科学杂志 2020年第7期26卷 639-644页

作者：孟晓彤廖礼彬马伊萱艾科拜尔·喀迪尔白生宾新疆医科大学基础医学院新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第二临床医学院新疆乌鲁木齐830011

目的:探究菟丝子黄酮对少弱精子症大鼠睾丸GM-CSF表达的影响。方法:SD雄性大鼠30只,随机分为空白对照组、模型组和菟丝子黄酮组,每组各10只,菟丝子黄酮组和模型组腹腔注射环磷酰胺,建立少弱精子症模型。菟丝子黄酮组灌服菟丝子黄酮混悬... 详细信息

目的:探究菟丝子黄酮对少弱精子症大鼠睾丸GM-CSF表达的影响。方法:SD雄性大鼠30只,随机分为空白对照组、模型组和菟丝子黄酮组,每组各10只,菟丝子黄酮组和模型组腹腔注射环磷酰胺,建立少弱精子症模型。菟丝子黄酮组灌服菟丝子黄酮混悬液,空白对照组和模型组灌服等量生理盐水,连续4周。取附睾液进行精子计数及活动率测定,制作睾丸切片并分别在光镜和电镜下观察睾丸组织学变化及超微结构改变。用蛋白芯片检测各组大鼠睾丸GM-CSF的表达情况。结果:模型组大鼠与空白对照组、菟丝子黄酮组大鼠相比,附睾液精子数目降低(P菟丝子黄酮组大鼠的睾丸组织结构正常,精子数目、活动率与空白对照组的差异无统计学意义。菟丝子黄酮组和空白对照组大鼠睾丸GM-CSF的表达量均低于蛋白芯片可测得的最小值故而未测得准确数值,模型组大鼠睾丸GM-CSF表达显著上升。结论:环磷酰胺所致少弱精子症大鼠睾丸GM-CSF表达增强,经过菟丝子黄酮干预后GM-CSF表达与空白对照组的差异无统计学意义。

关键词：菟丝子黄酮少弱精子症粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

菟丝子黄酮对幼年大鼠睾丸支持细胞增殖和分化的影响及机制

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北京中医药大学学报 2019年第2期42卷 131-137页

作者：胡素芹郭健简郭血骄刘思佳李春蕊北京中医药大学中医学院北京102488

目的观察不同浓度菟丝子黄酮对幼年大鼠睾丸支持细胞增殖与分化的作用并探讨其机制。方法分离20 d龄幼年大鼠睾丸支持细胞,并体外培养。随机分为对照组和菟丝子黄酮低、中、高剂量(200、400、800 mg/L)组。MTT法检测各组支持细胞的增殖... 详细信息

目的观察不同浓度菟丝子黄酮对幼年大鼠睾丸支持细胞增殖与分化的作用并探讨其机制。方法分离20 d龄幼年大鼠睾丸支持细胞,并体外培养。随机分为对照组和菟丝子黄酮低、中、高剂量(200、400、800 mg/L)组。MTT法检测各组支持细胞的增殖率;免疫组化法检测各组支持细胞中Ki67的表达;Western blot法检测各组支持细胞中蛋白CK-18、AR、p-Akt和Akt的表达水平。结果与对照组相比,菟丝子黄酮低、中、高剂量组支持细胞增殖率显著增加(P菟丝子黄酮可通过上调AR的表达,激活PI3K/Akt通路,增加Akt的磷酸化,促进幼年支持细胞的增殖和分化。

关键词：菟丝子黄酮支持细胞增殖分化 PI3K/Akt信号通路大鼠

菟丝子黄酮对去势雌性大鼠血脂和血管雌激素受体的影响

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中成药 2008年第2期30卷 255-256页

作者：王晓敏王建红邹志坚刘海云江西中医学院江西南昌330006 广东药学院广东广州510240 南昌大学第四附属医院江西南昌330003

菟丝子是旋花科植物菟丝子（Guscuta chinenis Lam）的成熟种子，足温补肾刚的要约，该药在临床上应用广泛，疗效确切，其主要成分为黄酮类化合物。它能促进下丘脑——垂体促性腺功能，提高垂体对促性腺激素释放激素的反应性.

关键词：血脂雌激素受体菟丝子黄酮去势大鼠

菟丝子黄酮对心理应激雌性大鼠海马-下丘脑-垂体-卵巢轴性激素受体的影响

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中草药 2006年第1期37卷 90-92页

作者：柯江维王建红赵宏江西省儿童医院江西南昌330006 江西中医学院江西南昌330006

生殖内分泌系统是易受应激损伤的一个系统，心理应激可引起生殖内分泌紊乱，引发生殖内分泌疾病。目前西医对此类疾病尚缺乏有效的调节手段，主要以激素替代治疗，长期应用激素均有明显的副作用，且疗效不确定，而中医药具有整体调控和... 详细信息

生殖内分泌系统是易受应激损伤的一个系统，心理应激可引起生殖内分泌紊乱，引发生殖内分泌疾病。目前西医对此类疾病尚缺乏有效的调节手段，主要以激素替代治疗，长期应用激素均有明显的副作用，且疗效不确定，而中医药具有整体调控和多靶点、多方式调节的特点，因而对女性卵巢功能失调类疾病的防治显示出一定的优势。现代中西医结合基础研究表明，肾与下丘脑-垂体-卵巢轴及生殖内分泌相关。中医认为卵巢功能失调与肾、肝、脾、瘀血有密切关系，肾虚是其根本原因，肾虚是由于介导神经内分泌免疫网络系统平衡功能的相关物质的基因表达出现异常，使神经内分泌免疫的功能失衡，治疗当以补肾为主，因肾为先天之本，藏经，主生殖，补肾中药对下丘脑、垂体、卵巢等存在着多元性和双向性的调节作用。

关键词：下丘脑-垂体-卵巢轴激素受体心理应激菟丝子黄酮大鼠海马生殖内分泌系统生殖内分泌疾病神经内分泌免疫激素替代治疗卵巢功能失调