菟丝子黄酮通过ERK/Nrf2-ARE信号通路缓解睾丸氧化损伤的研究

作     者：李利娟 

作者单位：新疆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：白生宾;廖礼彬

授予年度：2022年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：菟丝子黄酮 睾丸 TM3细胞 睾酮 Nrf2-ARE信号通路 

摘      要：目的:探究菟丝子黄酮（Total Flavonoids from Semen Cuscutae,TFSC）缓解睾丸氧化损伤的作用及其可能机制。方法:1)将48只雄性Balb/c小鼠随机分为四组:对照组、模型组、TFSC低剂量组和TFSC高剂量组,每组12只。除对照组,其余各组均用腹腔注射环磷酰胺（cyclophosphamide,CP）构建睾丸损伤模型,TFSC低（35mg/kg）、高（70mg/kg）剂量组分别进行TFSC灌胃干预,连续4周。观察小鼠体重、生殖器官指数和精子数目及活率;组织切片观察睾丸形态改变;FRAP法和TBA法检测睾丸组织中T-AOC和MDA含量变化;2)ELISA检测小鼠血清睾酮含量;3)Western blotting检测睾丸组织中p-ERK/ERK、Nrf2、NQO1、HO-1、Bax和Bcl-2蛋白的表达情况;4)体外培养TM3细胞（小鼠睾丸间质细胞）,CCK8法筛选丙烯醛（acrolein,ACR）的细胞半数致死量及TFSC的最适作用剂量;设置对照组、ACR模型组、TFSC低（100μg/m L）、中（200μg/m L）、高（400μg/m L）剂量组;CCK8检测TFSC对ACR诱导的细胞增殖的影响;5)流式细胞仪检测TM3细胞的凋亡情况;6)FRAP法和TBA法检测TM3细胞中T-AOC和MDA含量变化;7)Western blotting检测细胞中p-ERK/ERK、Nrf2、NQO1、HO-1、Bax、caspase-3和Bcl-2蛋白的表达情况。结果:1)与对照组相比,模型组小鼠体重、睾丸重量及睾丸指数、精子数目及活率均明显降低（P0.05）,睾丸组织结构受损,生精小管内的各级生精细胞层数减少,排列紊乱,管腔变大,腔内精子细胞数量稀疏;睾丸组织内氧化应激指标MDA明显升高（P0.05）,总抗氧化能力（T-AOC）降低（P0.05）,提示造模成功。与模型组相比,TFSC干预组小鼠体重、睾丸重量及睾丸指数、精子数目及精子活率均升高（P0.05）,睾丸组织损伤程度减弱,T-AOC升高（P0.05）,MDA含量降低（P0.05）,睾丸氧化损伤缓解;2)ELISA结果显示,与对照组相比,模型组睾酮含量降低（P0.05）;与模型组相比,TFSC高剂量组小鼠血清睾酮含量升高（P0.05）;3)Western blotting结果显示,与对照组相比,模型组睾丸组织中p-ERK/ERK、Nrf2、NQO1、HO-1和Bcl-2蛋白表达降低（P0.05）,Bax蛋白表达升高（P0.05）;与模型组相比,TFSC干预组睾丸组织p-ERK/ERK、Nrf2、NQO1和Bcl-2蛋白表达升高（P0.05）,Bax蛋白表达降低（P0.05）;4)TFSC浓度为100、200和400μg/m L时明显促进TM3细胞增殖（P0.05）;ACR浓度为33.97μmol/L时,达到细胞半数致死量。与对照组相比,模型组细胞增殖率明显降低（P0.05）;与模型组相比,TFSC中、高剂量组细胞增殖率升高（P0.05）;5)流式结果显示,与对照组相比,ACR干预TM3细胞后,凋亡率明显增高（P0.05）;而TFSC中、高剂量组细胞凋亡率降低（P0.05）;6)与对照组相比,ACR模型组MDA含量升高（P0.05）,T-AOC降低（P0.05）;与ACR模型组相比,TFSC干预后细胞内MDA含量降低（P0.05）,T-AOC升高（P0.05）;7)Western blotting结果显示,p-ERK/ERK、Nrf2、NQO1、HO-1和Bcl-2蛋白表达在ACR模型组明显降低（P0.05）,而TFSC能提高其表达（P0.05）;Bax和caspase-3蛋白表达在ACR模型组明显升高（P0.05）,TFSC能降低其表达（P0.05）。加入Nrf2抑制剂ML385后,与抑制剂未干预组相比,Nrf2、NQO1、HO-1和Bcl-2的表达降低（P0.05）,Bax的表达升高（P0.05）。结论:TFSC可能通过激活ERK/Nrf2-ARE信号通路,促进TM3细胞增殖,抑制其凋亡,从而缓解环磷酰胺诱导的小鼠睾丸氧化损伤。