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转基因食品致敏性评价细胞模型研究进展

卫生研究 2012年第6期41卷 1044-1049页

作者：陈晨贾旭东中国疾病预防控制中心营养与食品安全所北京100021

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性,尤其是引起食物过敏的可能性成为广大民众关心的主要问题之一。目前,国际上转基因作物致敏性评价的研究和开发的热点之一是使用细胞模型进行致敏性评价,本文简单介绍了转基因食品致敏性评... 详细信息

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性,尤其是引起食物过敏的可能性成为广大民众关心的主要问题之一。目前,国际上转基因作物致敏性评价的研究和开发的热点之一是使用细胞模型进行致敏性评价,本文简单介绍了转基因食品致敏性评价的现状,重点对细胞模型方面的研究进展进行了综述。

关键词：食品基因修饰致敏性评价细胞模型

啮齿类动物模型在食品致敏性评价中作用的研究进展

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现代预防医学 2017年第9期44卷 1681-1684页

作者：胥可凌晓斐张振玲济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院山东省医学科学院山东省职业卫生与职业病防治研究院

食品安全问题受到世界各国的关注,随着新食物产品的不断开发研究,关于是否会增加人体致敏风险等问题成为众专家学者竞相争论的焦点,啮齿类动物模型以其特有的优势在食物致敏性评价中占有重要位置,本文例举了BN大鼠、Balb/c小鼠、C3H/He... 详细信息

食品安全问题受到世界各国的关注,随着新食物产品的不断开发研究,关于是否会增加人体致敏风险等问题成为众专家学者竞相争论的焦点,啮齿类动物模型以其特有的优势在食物致敏性评价中占有重要位置,本文例举了BN大鼠、Balb/c小鼠、C3H/HeJ小鼠此三类最具代表性的啮齿类动物模型,并对致敏过程中常见致敏原及其影响因素、致敏途径和体内检测指标作一综述,为食品致敏性评价提供参考。

关键词：食物过敏动物模型致敏性评价

加工方式对花生致敏性的影响及其致敏性评价研究进展

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食品科学 2015年第23期36卷 283-287页

作者：饶欢田阳陶莎薛文通中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083

花生蛋白是一种理想的食品加工原料,同时也是一种致死率较高的食物过敏原,严重危害人类健康。本文主要综述食品加工方式对花生过敏蛋白致敏性的影响,以及体内、体外致敏性评价方法,为低致敏或无致敏花生制品的开发提供参考和指导。

关键词：加工花生过敏源致敏性评价

转基因食品致敏性评价啮齿类动物模型研究进展

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中国食品卫生杂志 2009年第5期21卷 473-477页

作者：孙拿拿彭于发贾旭东李宁中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所北京100050

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为广大民众关心的问题,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一。目前,使用动物模型评价转基因作物的致敏性,是国际上研究和开发的热点领域,本文就转基因食品致敏性评价啮... 详细信息

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为广大民众关心的问题,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一。目前,使用动物模型评价转基因作物的致敏性,是国际上研究和开发的热点领域,本文就转基因食品致敏性评价啮齿类动物模型的研究进展进行了综述。

关键词：食品基因修饰致敏性评价啮齿类动物模型

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高压下酶法消减三种虾制品致敏性评价

高压下酶法消减三种虾制品致敏性评价

作者：王星璇天津商业大学

学位级别：硕士

以南美白对虾虾仁、虾肉和虾蛋白为研究对象,采用高压结合酶法处理,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测其致敏性变化,确定消减三种制品致敏性的条件。然后,采用豚鼠的全身性过敏反应及离体回肠平滑肌过敏性收缩实验评价处理后的三种制品致... 详细信息

以南美白对虾虾仁、虾肉和虾蛋白为研究对象,采用高压结合酶法处理,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测其致敏性变化,确定消减三种制品致敏性的条件。然后,采用豚鼠的全身性过敏反应及离体回肠平滑肌过敏性收缩实验评价处理后的三种制品致敏性的消减效果,并测定致敏动物血清中细胞因子的变化。从体内和分子水平评价致敏性的消减效果。采用高压结合胰蛋白酶处理虾仁、虾肉和虾蛋白,用ELISA检测处理后三种制品的致敏性变化,确定处理条件。结果显示,虾蛋白致敏性消减效果最佳的条件为:40℃、压力200MPa、保压时间40min、加酶量为2000U/g底物、底物浓度为3%。在此条件下虾蛋白致敏性消减率为97.043%(抗原与抗体反应OD值为0.0233)。虾肉致敏性消减效果最佳的条件为:40℃、压力200MPa、保压时间40min、加酶量为3000U/g底物、底物浓度为150g/100m L。在此条件下虾肉致敏性消减率为94.035%(抗原与抗体反应OD值为0.045)。虾仁致敏性消减效果最佳的条件为:40℃、压力200MPa、保压时间40min、加酶量为3000U/g底物、底物浓度为150g/100m L。在此条件下虾仁致敏性消减率为94.493%(抗原与抗体反应OD值为0.041)。以PBS盐溶液作为阴性对照,未处理虾蛋白作为阳性对照,以豚鼠为受试动物,进行过敏性评价,观察豚鼠全身过敏反应,以及豚鼠离体回肠收缩力的变化。结果表明,高压结合酶法处理后的虾仁及其制品的致敏性显著降低(P致敏性消减效果要优于虾仁及虾肉组。以PBS盐溶液作为阴性对照,未处理虾蛋白作为阳性对照,观察过敏豚鼠血清中细胞因子、免疫球蛋白以及组胺的变化。结果表明过敏豚鼠血清中IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、TNF-α、IgE、HIS的含量明显增加;且过敏豚鼠血清中IFN-γ与IL-4比值明显降低,过敏豚鼠的Th细胞的平衡向Th2偏移。高压结合酶处理后的虾仁及其制品的致敏性显著降低。因此,高压下酶法处理可以有效消减虾仁、虾肉和虾蛋白的致敏性;致敏豚鼠的血清中部分细胞因子发生显著变化,且释放更多组胺等炎症因子;过敏导致Th细胞的平衡向Th2偏移。

关键词：高压结合酶南美白对虾致敏性评价全身过敏反应 Schultz-Dale反应细胞因子 Th1/Th2细胞平衡

BALB/c小鼠致敏模型建立及Komagataella phaffii表达猪肌红蛋白的潜在致敏性评价

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BALB/c小鼠致敏模型建立及Komagataella phaffii表达猪肌红蛋白的...

作者：徐佳媛江南大学

学位级别：硕士

近年来,食物过敏在全球的发病率日益增高,已成为威胁人类健康的公共性食品安全问题之一,对食物过敏患者造成了沉重的生理和心理负担。另一方面,资源短缺、环境污染等可持续发展问题对清洁、高产能的新型蛋白资源提出需求,比如昆虫蛋白... 详细信息

近年来,食物过敏在全球的发病率日益增高,已成为威胁人类健康的公共性食品安全问题之一,对食物过敏患者造成了沉重的生理和心理负担。另一方面,资源短缺、环境污染等可持续发展问题对清洁、高产能的新型蛋白资源提出需求,比如昆虫蛋白、微生物来源蛋白、基因工程表达蛋白等新型蛋白资源或生产技术。然而这些蛋白存在致敏性风险,会对食物致敏风险管理带来新的挑战,致敏性评价将成为保证未来食品安全的基础。目前用于评价食物致敏性的金标准方法为以人为研究对象的双盲对照膳食挑战试验,但执行难度大、风险高。动物模型虽已广泛用于食物致敏性评价,但现有的评价指标体系无法反映食物过敏发生的机理变化,难以预测受试物的潜在致敏能力大小。改善致敏风险评价模型,完善致敏性评价指标体系,对于合理控制未来食品致敏是必要的。本论文以卵清白蛋白（OVA）作为食物过敏阳性物,成功构建了食物过敏BALB/c小鼠模型,引入肠道菌群与血清代谢组联合免疫生化指标分析以完善致敏性评价体系,并将所建立的致敏性评价模型应用于基因工程Komagataella phaffii所表达猪肌红蛋白致敏性的评价。基于评价结果,结合体外评价方法综合分析表达蛋白发酵液中的致敏性组分,为其生产纯化工艺的优化及安全风险的控制提供了方向,主要研究内容及结果如下:（1）通过多次灌胃及腹腔注射激发的方式成功构建食物过敏BALB/c小鼠模型。以OVA为过敏阳性物,通过灌胃给予5次OVA,每次间隔7天,末次灌胃后7天腹腔注射OVA处理BALB/c小鼠。小鼠在腹腔注射OVA后60 min内出现搔鼻、竖毛、活动减少等过敏症状,血清中的OVA特异性免疫球蛋白G（Ig G）、免疫球蛋白E（Ig E）、组胺（HIS）、单核细胞趋化蛋白-1（m MCP-1）各项免疫相关生化指标均显著上升。通过分离小鼠活性脾淋巴细胞,免疫荧光染色、流式细胞仪分选及体外过敏原再刺激验证,经OVA处理的小鼠脾淋巴细胞中辅助型T细胞1/辅助型T细胞2（Th1/Th2）平衡向Th2型分化,发生了由OVA特异性引起的Th2型免疫反应,表明OVA过敏小鼠模型构建成功。（2）经过血清代谢组学与肠道菌群检测与分析及多组学联合免疫生化指标数据挖掘,发现在BALB/c小鼠中,OVA过敏的发生与肠道菌群及血清代谢组的变化存在紧密联系。通过分析OVA处理组小鼠肠道菌群的α-多样性、群落组成特征及与对照组小鼠之间的β-多样性,发现OVA过敏小鼠肠道菌群物种丰度明显下降,群落组成特征改变,共发现12种显著差异的菌群（科水平）。OVA过敏小鼠血清代谢组发生显著改变,共发现18种差异代谢物（p＜0.05,投影值的变量重要性（VIP）＜1,变化倍率（FC）＞1.5）。肠道差异菌群、差异代谢物及免疫生化指标之间的相关性分析,结合肠道功能预测及血清代谢物通路富集分析,发现肠道中的Muribaculaceae、Erysipelotrichaceae、理研菌科、乳杆菌、梭菌纲等物种,血清中的吲哚代谢衍生物及氨酰-t RNA生物合成通路丰度与食物过敏的发生存在关联。（3）将所建立的致敏性评价模型应用于Komagataella phaffii所表达猪肌红蛋白的致敏性评价,发现酵母表达产生的猪肌红蛋白提取液具有致敏性,致敏性可能由杂质组分产生。BALB/c小鼠分别多次灌胃给予及单次腹腔注射60%纯度与88%纯度的发酵猪肌红蛋白后,均出现搔鼻、活动减少或竖毛等过敏症状,血清及T细胞分析等免疫指标显著上升,但60%纯度发酵猪肌红蛋白处理的小鼠多项免疫生化指标改变程度高于88%纯度发酵猪肌红蛋白。60%纯度组肠道菌群发生了与OVA过敏小鼠相似的由过敏引起的变化,包括多种差异菌群丰度、肠道氨酰t RNA合成通路丰度改变,而88%纯度组仅表现出相似改变的趋势,改变程度低于60%纯度组。与猪肌红蛋白结构功能相似的天然猪血红蛋白纯品未表现出致敏性。（4）过敏原序列相似性检索与体外模拟消化实验分析显示猪肌红蛋白本身不具有致敏性,造成发酵蛋白提取液具有致敏性的组分为杂质物质。将猪肌红蛋白序列与Allergen Online（AOL）及美国国家生物技术信息中心（NCBI）数据库进行相似性检索,未发现猪肌红蛋白与现有过敏原或有毒蛋白存在交叉反应的可能性。60%纯度和88%纯度的发酵猪肌红蛋白提取液中的主要蛋白条带在体外消化后被降解,说明猪肌红蛋白不具有抗消化特性。结合小鼠模型评价结果,推断酵母表达产生的猪肌红蛋白本身不具有致敏性,产生致敏性的为杂质组分,为微生物表达猪肌红蛋白生产纯化工艺的优化及安全风险控制提供了方向。

关键词：食物过敏致敏性评价肠道菌群代谢组学微生物发酵猪肌红蛋白

转基因食品致敏性评价BALB/c小鼠动物模型和RBL-2H3细胞模型研究

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转基因食品致敏性评价BALB/c小鼠动物模型和RBL-2H3细胞模型研究

作者：陈晨中国疾病预防控制中心

学位级别：硕士

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为人民群众关心的问题,其中,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一。目前,使用动物模型和细胞模型评价转基因作物的致敏性是国际上研究和开发的热点领域,正确应用动物模... 详细信息

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为人民群众关心的问题,其中,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一。目前,使用动物模型和细胞模型评价转基因作物的致敏性是国际上研究和开发的热点领域,正确应用动物模型和细胞模型,以及其他评价方法能够有效地对转基因食品致敏性进行评价。本研究应用已知致敏原卵清蛋白(OVA)建立腹腔注射致敏BALB/c小鼠模型,并使用不同致敏强度的蛋白(花生凝集素、p-乳球蛋白和马铃薯酸性磷酸酶)来验证该模型的可行性;此外,本研究还对RBL-2H3细胞作为转基因食品致敏细胞模型的可行性进行了初步探讨。1. BALB/c小鼠致敏模型的建立目的：建立BALB/c、鼠致敏动物模型,探讨腹腔注射途径下BALB/c小鼠模型的最佳致敏剂量和致敏频次,研究最适致敏周期和动物性别。方法：(1)致敏剂量实验：64只BALB/c小鼠随机分成4组,每组16只,雌雄各半。分别腹腔注射给予0.25mL含0mg、0.05mg、0.5mg和5mg OVA的PBS溶液(浓度为Omg/mL、0.2mg/mL、2mg/mL和20mg/mL),注射时间为第0、3、6、9和12天,在第28天取血。(2)致敏频次实验：64只BALB/c小鼠随机分成4组,每组16只,雌雄各半。第1组在第0天和第7天腹腔注射给予0.25mLPBS;第2组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予0.25mLPBS;第3组在第0天和第7天腹腔注射给予0.25mL含0.05mgOVA的PBS溶液;第4组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予0.25mL含0.05mgOVA的PBS溶液。(3)致敏周期实验：64只BALB/c小鼠随机分成4组,每组16只,雌雄各半。第1组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予0.25mL PBS,在第14天取血;第2组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予0.25mL PBS,在第28天取血;第3组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予含0.05mg OVA的PBS溶液,在第14天取血;第4组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予含0.05mg OVA的PBS溶液,在第28天取血。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测OVA特异性IgE和IgG1含量。结果：(1)致敏剂量实验：与阴性对照组相比,雄鼠低、中剂量组OVA特异性IgE含量显著升高,低剂量组的OVA特异性IgE含量最高;雌鼠高、低剂量组的OVA特异性IgE含量显著升高,低剂量组的OVA特异性IgE含量最高。各剂量组OVA特异性IgGl含量显著高于对照组,并且低剂量组中OVA特异性IgG1含量最高。(2)致敏频次实验：与阴性对照组相比,BALB/c小鼠致敏两次(第0、7天)和致敏五次(第0、3、6、9、12天)的血清中OVA特异性IgE和IgG1含量显著升高(P致敏五次血清中OVA特异性IgE含量显著高于致敏两次。(3)致敏周期实验：与阴性对照组相比,BALB/c小鼠第14天和28天的血清中OVA特异性IgE和IgG1含量显著升高(P性别比较：与阴性对照组相比,雌雄小鼠血清中OVA特异性IgE和IgG1含量显著升高。雌性小鼠血清中OVA特异性IgE和IgG1含量与雄性小鼠相比没有显著性差异。结论：根据以上实验结果得出的比较理想的BALB/c小鼠致敏模型实验方案是：在第0、3、6、9、12天腹腔注射给予BALB/c小鼠0.05mg致敏蛋白,在第28天检测小鼠血清中蛋白特异性IgE和IgG1。当然,还需要使用不同致敏强度的蛋白进一步验证该BALB/c小鼠致敏动物模型,使其能够更好地应用于转基因食品致敏性评价体系中。2. BALB/c小鼠致敏模型的验证目的：使用不同致敏强度的蛋白验证建立的BALB/c小鼠致敏模型,并对评价指标进行探讨,以期为转基因食品的致敏性评价提供更可靠的动物模型和评价指标。方法：210只BALB/c小鼠随机分为4个实验组—分别为OVA(阳性模式蛋白)组(30只)、PNA组(30只)、β-LG组(30只)和PAP组(30只),以及1个对照组(90只)。实验组在第0、3、6、9和12天分别腹腔注射给予0.2mg/mL的OVA、PNA、β-LG和PAP,0.25mL/只(即0.05mg/只)。对照组在第0、3、6、9和12天腹腔注射0.25mL溶剂PBS。第28天,每组10只小鼠内眦静脉取血,3000rpm离心15分钟分离血清。血清于-20℃冻存备用,用于致敏蛋白特异性抗体IgE、IgG1和IgG测定。取血后处死小鼠,无菌取脾,进行脾细胞培养和细胞因子分析。第30天,激发过敏反应,对比腹腔注射激发和灌胃激发两

关键词：转基因食品致敏性评价动物模型细胞模型

转基因食品致敏性评价啮齿类动物模型（BN大鼠和C3H/HeJ小鼠）研究

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转基因食品致敏性评价啮齿类动物模型（BN大鼠和C3H/HeJ小鼠）研究

作者：孙拿拿中国农业科学院

学位级别：硕士

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为广大民众关心的问题,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一。目前,使用动物模型评价转基因作物的致敏性,是国际上研究和开发的热点领域,正确应用动物模型,再结合其他评... 详细信息

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为广大民众关心的问题,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一。目前,使用动物模型评价转基因作物的致敏性,是国际上研究和开发的热点领域,正确应用动物模型,再结合其他评价方法,能够有效地对转基因食品致敏性进行评价。本研究应用已知致敏原——卵清蛋白(OVA),对挪威棕色(Brown Norway, BN)大鼠模型进行了进一步的完善,并对C3H/HeJ小鼠作为转基因食品致敏性动物模型的可行性进行了初步探讨。1.挪威棕色(Brown Norway, BN)大鼠模型的进一步完善目的:研究经口灌胃途经下BN大鼠模型的最适性别和周龄,探讨最佳致敏周期及致敏原剂量。方法:通过经口灌胃途径给予不同性别(雌性和雄性)、不同周龄(4周龄和8周龄)的BN大鼠高、中、低剂量(10.0mg/d, 1.0mg/d, 0.1mg/d)的已知致敏原——卵清蛋白(OVA),共35天。分别于第28、35天内眦取血分离血清,检测血清中OVA特异性IgE。于第35天处死大鼠,取脾脏、胸腺、空肠及肠系膜淋巴结,进行组织病理学检测。结果:(1)与阴性对照组相比,雌性4周龄和8周龄BN大鼠,经口灌胃给予1.0mg/d OVA组第28、35天血清中OVA特异性IgE浓度显著升高(P性IgE浓度均无显著差异;(2)与阴性对照组相比,各组雄性4周龄BN大鼠第28、35天血清中OVA特异性IgE浓度均无显著差异;(3)与阴性对照组相比,雄性8周龄BN大鼠仅经口灌胃给予0.1mg/d OVA组血清中OVA特异性IgE浓度在第28天显著升高(P性8周龄BN大鼠第28、35天血清中OVA特异性IgE浓度均无显著差异。(4)阴性对照组和经口灌胃OVA各组空肠组织粘膜固有层均有少量嗜酸性粒细胞浸润。结论:经口灌胃途径给予BN大鼠已知致敏原OVA,(1)雌性BN大鼠比雄性BN大鼠致敏性更敏感;(2)BN大鼠的周龄对敏感性并无影响;(3)经口灌胃给予1.0mg/d OVA为致敏剂量;(4)致敏周期为28-35天。2. C3H/HeJ小鼠模型的初步探讨目的:研究C3H/HeJ小鼠作为食品致敏性评价动物模型的可行性,探讨不同致敏途径适当的致敏周期以及辅助性T淋巴细胞因子的变化。方法:通过经口灌胃及腹腔注射两种途径给予雌性C3H/HeJ小鼠致敏蛋白——卵清蛋白(OVA),共35天。分别在第14、28、35天内眦取血分离血清,测定血清中OVA特异性IgE。于第35天取脾脏,荧光实时定量PCR检测Th2型细胞因子IL-4及Th1型细胞因子IFN-γ的mRNA表达水平。结果:与阴性对照组相比,经口灌胃OVA组小鼠第28和35天血清中OVA特异性IgE浓度显著升高(P性IgE浓度显著升高(P性对照组相比,OVA组与OVA+ Al(OH)3组小鼠细胞因子IL-4的表达水平均显著升高;细胞因子IFN-γ的mRNA表达水平均显著降低。结论:C3H/HeJ小鼠可能可以作为食品致敏性评价动物模型,经口灌胃途径或腹腔注射途径的致敏周期可选择14天或28天。

关键词：转基因食品致敏性评价卵清蛋白(OVA) 动物模型

两步酶解法制备低致敏性乳清蛋白及其致敏性评价

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食品安全质量检测学报 2024年第7期15卷 103-112页

作者：张贤莉黄玉浩韩玥颖张磊林芸芸林洪李振兴中国海洋大学食品科学与工程学院青岛266003 山东敏原康生物科技有限公司烟台264003

目的探究两步复合酶解工艺处理对牛乳清蛋白(whey protein isolate,WPI)结构和致敏性的影响。方法实验采用邻苯二甲醛法、体积排阻色谱法分析WPI水解物在不同酶解时间下的水解程度,同时采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunoassay,EL... 详细信息

目的探究两步复合酶解工艺处理对牛乳清蛋白(whey protein isolate,WPI)结构和致敏性的影响。方法实验采用邻苯二甲醛法、体积排阻色谱法分析WPI水解物在不同酶解时间下的水解程度,同时采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunoassay,ELISA)、细胞模型和小鼠模型对水解物进行体外和体内的致敏性评估,并利用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)分析水解物中的残留过敏原表位。结果WPI经碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶顺序酶解3.0 h后水解度达到14.19%,在水解2.0~3.0 h期间,WPI水解物主要由小肽(性抗体的结合能力降低了97.83%,细胞模型和小鼠模型结果证实,酶解产物的体外、体内致敏性显著降低,与空白对照组无显著性差异。UPLC-MS/MS结果表明WPI水解3.0 h产物中70.59%的肽段不含过敏原表位。结论复合酶解工艺有效降低了WPI致敏性,本研究构建的致敏性综合评价体系可为低敏乳制品水解工艺的开发提供指导。

关键词：乳清蛋白水解残留抗原性过敏原表位致敏性评价