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小干扰RNA抑制肝癌细胞胰岛素样生长因子Ⅱ基因表达的初步研究

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小干扰RNA抑制肝癌细胞胰岛素样生长因子Ⅱ基因表达的初步研究

作者：马彦暨南大学

学位级别：硕士

目的：设计靶向IGF-Ⅱ基因的siRNA，观察其对肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响及IGF-Ⅱ表达的抑制作用;明确有效抑制肝癌细胞人胰岛素样生长因子Ⅱ基因mRNA表达的siRNA序列及其作用浓度，为肝癌的基因治疗提供依据。方法：本实验靶向IGF-... 详细信息

目的：设计靶向IGF-Ⅱ基因的siRNA，观察其对肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响及IGF-Ⅱ表达的抑制作用;明确有效抑制肝癌细胞人胰岛素样生长因子Ⅱ基因mRNA表达的siRNA序列及其作用浓度，为肝癌的基因治疗提供依据。方法：本实验靶向IGF-Ⅱ mRNA不同位点设计的3条siRNA序列转入肝癌细胞株SMMC-7721，并行FAM荧光标记，同时设立一个无任何靶基因的siRNA作为阴性对照(siRNA4)。通过脂质体将合成的siRNA1～3分别转入SMMC-7721肝癌细胞株，以siRNA4、未转染细胞及转染空脂质体细胞为对照。荧光显微镜下观察siRNA的转染效率;MTF法检测siRNA对细胞生长的抑制;用RT-PCR检测siRNA对IGF-Ⅱ mRNA表达的抑制作用。结果：利用FAM荧光标记观察到siRNA转染效率可达65～80％。实验组siRNA1、2、3与对照组、脂质体组和siRNA4的MTF值以及细胞存活率在各时点均有显著性差异(P＜0.01)，随着时间延长抑制效果增强，以siRNA3效果最为显著。将siRNA3用于进行下一步浓度效应实验，观察四个转染终浓度：10、20、40、80nM的siRNA3对基因的作用。半定量RT-PCR结果表明，当siRNA浓度达到10nM时就可降解mRNA，随着浓度增加抑制效果增强，在40nM时作用最强，可达86.34％。将40nM siRNA1～3分别转染细胞，均有不同程度抑制作用，其中siRNA3抑制率最高，与生长抑制实验结果一致，因此筛选出最有效siRNA序列为siRNA3，其序列为正义链：5′-GUUCUUCCAAUAUGACACC-3′，反义链：5′-GGUGUCAUAUUGGAAGAAC-3′。结论：设计合成靶向IGF-ⅡmRNA序列的siRNA，采用化学合成及脂质体转染肝癌细胞株SMMC-7721，有较高的转染效率，筛选出一条siRNA并明确其最佳有效浓度，这条siRNA能有效抑制肝癌细胞生长及IGF-ⅡmRNA的表达。在肝癌的基因治疗中，IGF-Ⅱ是有效靶点，有利于进一步明确该方法用于肝癌的基因治疗。

关键词： RNA干扰小干扰RNA 肝细胞癌胰岛素样生长因子ii

胰岛素样生长因子及其受体在前列腺移行区组织中的表达及意义

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胰岛素样生长因子及其受体在前列腺移行区组织中的表达及意义

作者：刘凯隆河北医科大学

学位级别：硕士

目的：前列腺增生症（benign prostatic hyperplasia,BPH）是老年男性的常见病。到目前为止前列腺增生症的真正病因还不明确。我们知道它是一种雄激素依赖疾病，基质-上皮相互作用在调节前列腺生长发育过程中起着重要作用，这种作用受... 详细信息

目的：前列腺增生症（benign prostatic hyperplasia,BPH）是老年男性的常见病。到目前为止前列腺增生症的真正病因还不明确。我们知道它是一种雄激素依赖疾病，基质-上皮相互作用在调节前列腺生长发育过程中起着重要作用，这种作用受局部多肽生长因子的调节。胰岛素样生长因子I（IGF-I）和ii（IGF-ii）均为强有丝分裂源，通过与胰岛素样生长因子I类受体（IGF-IR）结合，对多种细胞发挥促有丝分裂及抗细胞凋亡作用，同样对前列腺基质及上皮细胞具有促有丝分裂及抗细胞凋亡作用。前列腺腺体分三个部分：周边区（Peripheral zone, PZ），中央区(Central zone, CZ)，移行区(Transitional zone, TZ)。移行区是前列腺增生发生的唯一部位。本实验通过对正常及增生前列腺移行区组织中胰岛素样生长因子I、ii及其I类受体表达的研究，对其在前列腺增生的发病过程中的作用进行探讨。方法：实验采用人前列腺组织，分两组:(1)前列腺增生组：30例前列腺增生标本随机选取自我科BPH患者（年龄58-74岁，平均67.2岁），均行耻骨上经膀胱前列腺摘除术，手术摘除的前列腺标本立即按Mc Neal分区方法取移行区组织，用70%酒精固定，放置于4°C冰箱保存备用，所有标本经光镜病理证实为BPH组织。(2)

关键词：前列腺增生症前列腺移行区胰岛素样生长因子I 胰岛素样生长因子ii 胰岛素样生长因子I类受体流式细胞法

IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR、IGF-Ⅱ在结直肠腺瘤中的表达及意义

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世界华人消化杂志 2014年第5期22卷 724-729页

作者：谭晓林刘祥玉米贤军谢彩虹赵超陈冬妹肖文尹泉施为建南方医科大学附属中山市博爱医院消化内科广东省中山市528403 南方医科大学附属中山市博爱医院病理科广东省中山市528403

目的：探讨胰岛素样生长因子（insulin—like growth factor,IGF）-I、IGF-IR、IGF-ii在结直肠腺瘤中的表达及意义方法：选取2011-01／2013—06在我院内镜中心行电子结肠镜检查并经活检病理确诊的100例结直肠腺瘤（colorectal adenoma，... 详细信息

目的：探讨胰岛素样生长因子（insulin—like growth factor,IGF）-I、IGF-IR、IGF-ii在结直肠腺瘤中的表达及意义方法：选取2011-01／2013—06在我院内镜中心行电子结肠镜检查并经活检病理确诊的100例结直肠腺瘤（colorectal adenoma，CRA），30例结直肠癌（colorectal cancer,CRC），30例炎性息肉，同期20例正常结直肠黏膜作为阴性对照组：应用免疫组织化学SP法检测IGF—I、IGF—IR、IGF—ii的表达．结果：IGF—I、***、IGF—ii的阳性表达在正常结直肠黏膜组（5．0％、10．0％、10．0％）与炎性息肉组f6．7％、10．0％、10．0％）无统计学差异（P〉0．05），正常结直肠黏膜组和炎性息肉组与CRA组（36．0％、48．0％、44．0％、、CRC组（63．3％、80．0％、73．3％）比较呈逐渐增加趋势，差异有明显统计学意义（P〈0．01）；在CRA组，IGF—I、IGF—IR、IGF—ii的阳性表达与性别、年龄、数量、部位均无明显关系（P〉0．05），与腺瘤大小、增生程度、组织学分类有显著统计学差异（P〈0．01）：在CRA组，IGF—I、IGF—IR、IGF—ii的表达相互间呈正相关（P〈0．01）．结论：在正常人群的结、直肠黏膜向腺瘤的转化，以及腺瘤的增长和转化过程中，IGFs和IGFs—R轴发挥着极其重要作用，因CLIGF-I、IGF-IR、IGF-ii有可能作为结肠腺瘤癌变的预测指标，对临床早期诊治具有重要意义．

关键词：结直肠腺瘤胰岛素样生长因子I 胰岛素样生长因子ii 胰岛素样生长因子I受体免疫组织化学

原发性肝细胞肝癌组织中IMP3表达与临床特点和基因甲基化相关性的研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2014年第5期34卷 537-542页

作者：黄新立高园园丁军王学浩南京医科大学第一附属医院肝脏外科江苏南京210029 常州市第二人民医院普通外科江苏常州213000 中山大学附属第一医院惠亚医院急诊科广东惠州516081

目的:研究IMP3在原发性肝细胞肝癌中的表达意义以及基因甲基化同IMP3表达的关系。方法:免疫组化检测162例肝细胞肝癌组织中IMP3的表达。分析临床因素与IMP3表达水平的相关性,并随访所选162例术后患者生存情况作生存分析。提取正常肝组... 详细信息

目的:研究IMP3在原发性肝细胞肝癌中的表达意义以及基因甲基化同IMP3表达的关系。方法:免疫组化检测162例肝细胞肝癌组织中IMP3的表达。分析临床因素与IMP3表达水平的相关性,并随访所选162例术后患者生存情况作生存分析。提取正常肝组织、肝癌组织的DNA,通过甲基化特异性定量PCR测定IMP3启动子CpG岛甲基化状态。培养正常肝脏细胞L02和Huh-7肝癌细胞,通过Western blot检测IMP3蛋白的表达。提取两组细胞DNA,分别对IMP3基因启动子区域CpG岛进行甲基化状态检测。结果:原发性肝细胞肝癌组织中IMP3阳性率为67.90%;IMP3表达与患者年龄、肿瘤大小、分级、分期、AFP、早期复发均存在相关性;而与性别、HBsAg无明显相关性。随访显示IMP3阳性患者长期生存明显低于IMP3阴性者。CpG岛甲基化检测显示肝癌组织中P1和P2位点高度去甲基化,而正常肝脏组织中P1和P2则处于甲基化状态。正常肝脏细胞IMP3表达阴性,Huh-7肝癌细胞IMP3表达强阳性。正常肝细胞P1和P2位点处于高度甲基化状态,而Huh-7肝癌细胞P1和P2位点处于去甲基化状态。结论:IMP3在原发性肝细胞肝癌中具有高表达,IMP3高表达提示不良预后;基因的甲基化同IMP3的表达存在一定的相关性。

关键词：胰岛素样生长因子ii mRNA结合蛋白3 IMP3 原发性肝细胞肝癌基因甲基化启动子

促性腺激素释放激素拮抗剂方案对IVF患者血清及卵泡液中IGF-Ⅱ，VEGF及雌孕激素水平的影响及临床意义

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促性腺激素释放激素拮抗剂方案对IVF患者血清及卵泡液中IGF-Ⅱ，V...

作者：王少卿河北医科大学

学位级别：硕士

目的：研究不同剂量促性腺激素释放激素拮抗剂（gonadotropinreleasing hormone antagonist,GnRH-ant）对体外受精-胚胎移植（invitrovitrofertilization and embryo transfer,IVF-ET）患者血清及卵泡液中胰岛素样生长因子I（iinsulin-like growth factor ii,IGF-ii），血管内皮生长因子（vascularendothelial growth factor,VEGF）及雌孕激素水平的影响，以探讨卵泡内的微环境是否因不同方案及不同剂量而产生差异，从而为临床合理使用GnRH-ant提供理论依据。方法：前瞻性研究2012年12月至2014年1月因输卵管因素于我中心行IVF/ICSI-ET的患者资料。纳入标准：年龄10个，血基础E2水平≤50pg／mL，FSH／LH素治疗史;既往有放、化疗，吸烟，麻醉药品依赖者。根据不同方案分为三组： GnRH激动剂（GnRH-a）长方案组（黄体中期，使用GnRH-a0.1mg/d达到降调节标准（FSH600pg/ml时启动GnRH-ant0.125mg/d）。GnRH拮抗剂（GnRH-ant）方案0.25mg组(月经第2天通过阴道B超及血清FSH、LH、E2水平评估卵巢基础状态，并于月经第2～3天应用Gn促排卵。于主导卵泡直径达到14mm或LH达到5mIU/ml左右或E2水平>600pg/ml时启动GnRH-ant0.25mg/d)。研究患者HCG日及取卵日肘静脉血IGF-ii、VEGF、E2、P、E2/P值以及取卵日卵泡液中IGF-ii、VEGF水平及其关系，Gn的用药总量、用药天数，双侧卵巢HCG日直径16mm以上的卵泡数及获卵数，OHSS发生风险率，ICSI卵子成熟率，受精率，卵裂率，可移植胚胎率，新鲜周期临床妊娠率，首次移植周期(新鲜周期和解冻周期)生化妊娠率和临床妊娠率，胚胎种植率，全胚冷冻率，胚胎冷冻率。分析不同剂量拮抗剂对临床结局的影响。结果：三组患者在BMI，年龄，不孕年限，基础窦泡数，基础FSH、LH、E2值等基本资料上没有差异（P>0.05）。Gn总量，Gn天数，HCG日直径≥16mm卵泡数，获卵数，卵裂率，可移植胚胎率，新鲜周期临床妊娠率，新鲜周期活产率，首次移植周期生化妊娠率，首次移植周期临床妊娠率，首次移植周期早期流产率，胚胎种植率，胚胎冷冻率三组间没有统计学差异（P>0.05）。ICSI卵子成熟率拮抗剂0.25mg组及0.125mg组均高于激动剂长方案组（P0.05）。受精率拮抗剂0.25mg组高于激动剂长方案组（X2=4.618P0.05）。而拮抗剂0.125mg组与激动剂长方案组没有统计学差异（X2=0.085P>0.05）。OHSS发生风险率拮抗剂0.25mg组低于激动剂长方案组（X2=6.944P0.05）。全胚冷冻率拮抗剂方案0.125mg组低于激动剂长方案组（X2=4.800P0.05），拮抗剂方案0.25mg组与拮抗剂方案0.125mg组（X2=0.784P>0.05）间无差异。HCG日血清IGF-ii水平和VEGF水平以及取卵日血清IGF-ii水平和VEGF水平、取卵日卵泡液IGF-ii水平和VEGF水平拮抗剂方案0.25mg组显著高于拮抗剂方案0.125mg组和激动剂长方案组，拮抗剂方案0.125mg组显著高于激动剂长方案组（P0.

关键词：促性腺激素释放激素拮抗剂体外受精-胚胎移植胰岛素样生长因子ii 血管内皮生长因子雌激素孕激素

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IMP3在乳腺癌中的表达与相关性研究

IMP3在乳腺癌中的表达与相关性研究

作者：唐芬暨南大学

学位级别：硕士

目的：检测浸润性乳腺癌中IMP3的表达水平，分析IMP3在乳腺癌中各分子类型中的表达差异及IMP3与各项临床病理参数的相关性，评估其对三阴性乳腺癌的预后价值;并进一步探讨乳腺癌预后相关因素及IMP3在乳腺癌治疗中的临床价值。方法：收集... 详细信息

目的：检测浸润性乳腺癌中IMP3的表达水平，分析IMP3在乳腺癌中各分子类型中的表达差异及IMP3与各项临床病理参数的相关性，评估其对三阴性乳腺癌的预后价值;并进一步探讨乳腺癌预后相关因素及IMP3在乳腺癌治疗中的临床价值。方法：收集从2006年1月到2013年9月在广州暨南大学附属第一医院行乳腺癌根治性手术的石蜡病理组织标本，纳入的患者临床病理资料完整，并且全部为女性。根据实验要求制定入选标准，其中术后病理证实为三阴性乳腺癌的组织石蜡切片标本42例,随机选取同期非三阴性乳腺癌组织石蜡切片标本68例。采用免疫组化二步法检测IMP3的表达水平，并与乳腺癌临床病理特征进行相关性分析;对乳腺癌病人进行随访，分析IMP3的表达与三阴性乳腺癌的预后的相关性及与乳腺癌预后相关的临床病理特征。结果：1.110例浸润性乳腺癌组织的实验结果如下：（1）32例IMP3表达阳性，阳性率为29.1%。IMP3阳性表达水平与ER、PR、组织学分级、Ki-67、CK5/6表达状态有关（P0.05)。（2）IMP3在Luminal A型、Luminal B型、三阴性乳腺癌、Her-2过表达型的表达率分别为8.7%(2/23）、5.4%(2/37）、64.3%(27/42）、12.5%(1/8），IMP3在三阴性乳腺癌的阳性表达率显著高于在Luminal A型、Luminal B型及Her-2过表达型的表达，应用2检验发现IMP3在乳腺癌各分子分型中表达的差异具有统计学意义（2=40.988，P=0.000）;使用Kruskal‐Wallis检验对各分子分型与IMP3表达强弱进行相关性分析，发现各分子分型中IMP3的表达不同，IMP3的表达与三阴性乳腺癌密切相关，且三阴性乳腺癌中IMP3多为强表达（2=38.0，P=0.000）。（3）生存曲线图显示IMP3阳性表达组的无病生存时间低于IMP3阴性组，IMP3（+）组的平均生存时间是77.411±6.415个月;IMP3（-）组的平均生存时间是91.441±2.210个月。两组间差异有统计学意义（2=7.151，P=0.007）。（4）肿瘤大小、淋巴结转移状态和IMP3是影响总生存率(overall survivalrate, OS)的独立因素,相对的死亡风险分别为1.05倍、18.59倍和2.61倍。结论：(1)IMP3在浸润性乳腺癌中的表达与ER（-）、PR（-）、Ki-67高表达、组织学分级及CK5/6阳性表达呈正相关,且高表达于三阴性乳腺癌;IMP3阳性表达的无病生存时间低于IMP3阴性表达组。(2)肿瘤大小、淋巴结转移状态和IMP3是影响OS的独立因素。

关键词：胰岛素样生长因子ii mRNA结合蛋白3 乳腺癌三阴性乳腺癌

乙型肝炎病毒X蛋白通过诱导P3启动子低甲基化促进IGF-Ⅱ基因在肝细胞癌中的表达

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乙型肝炎病毒X蛋白通过诱导P3启动子低甲基化促进IGF-Ⅱ基因在肝...

作者：张小娟暨南大学

学位级别：硕士

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白（HBx）对胰岛素样生长因子-ii（IGF-ii）基因P3启动子驱动的mRNA表达的影响及其表观遗传机制。方法：①分别采用定量RT-PCR和亚硫酸氢盐测序法检测HBV感染阳性和阴性肝癌组织中P3mRNA、HBx mRN... 详细信息

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白（HBx）对胰岛素样生长因子-ii（IGF-ii）基因P3启动子驱动的mRNA表达的影响及其表观遗传机制。方法：①分别采用定量RT-PCR和亚硫酸氢盐测序法检测HBV感染阳性和阴性肝癌组织中P3mRNA、HBx mRNA表达水平及P3启动子甲基化状态，并分析其临床病理特征;②进一步分析稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx及其对照细胞株HepG2-control中P3mRNA表达水平及P3启动子甲基化状态;③最后将体外甲基化的IGF-ii基因P3启动子驱动的荧光素酶报告载体pGL3-P3及携带HBx基因的pCMV-tag2B-X质粒共转染HepG2肝癌细胞，采用亚硫酸氢盐测序法及双荧光素酶试验检测HBx蛋白对P3启动子转录活性和甲基化状态的影响。结果：①与HBV阴性的肝癌组织相比，HBV阳性的肝癌组织中P3mRNA水平及P3启动子17个CpG位点的平均甲基化水平分别表现为增高与降低;P3mRNA丰度与HBx mRNA表达水平呈正相关，而与P3启动子甲基化水平呈负相关;HBV阳性的肝细胞癌患者更容易形成门静脉癌栓且癌组织分化程度更低;②在HepG2-HBx及其对照细胞HepG2-control中，也显示了类似的P3mRNA表达水平及P3启动子甲基化水平变化;③体外转染的HBx蛋白显著降低了P3启动子甲基化水平，提高了其转录活性。结论：HBx蛋白可能通过降低P3启动子甲基化水平进而促进肝细胞癌IGF-ii基因表达，有HBx蛋白表达的肝细胞癌患者可能有较差的临床结局，本结果为充分理解HBx蛋白介导的肝细胞癌发病机制提供了新的信息。

关键词：肝细胞癌乙型肝炎病毒X蛋白胰岛素样生长因子ii 启动子低甲基化

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多形性腺瘤发生机制的新进展

口腔颌面外科杂志 2009年第6期19卷 423-426页

作者：汪廷乐宋萌上海交通大学附属第一人民医院口腔科上海200080

涎腺多形性腺瘤是涎腺肿瘤中最常见的一种，占涎腺上皮性肿瘤的50％以上，一直被认为是一种良性慢性生长的肿瘤。涎腺肿瘤的发生是一个多因子参与的过程，目前主要研究分子水平上潜在的致癌基因、肿瘤抑制基因及其所表达的产物之间的失... 详细信息

涎腺多形性腺瘤是涎腺肿瘤中最常见的一种，占涎腺上皮性肿瘤的50％以上，一直被认为是一种良性慢性生长的肿瘤。涎腺肿瘤的发生是一个多因子参与的过程，目前主要研究分子水平上潜在的致癌基因、肿瘤抑制基因及其所表达的产物之间的失活与激活，来阐明肿瘤发生的机制。

关键词：多形性腺瘤基因1 胰岛素样生长因子ii 细胞周期蛋白D1 抑癌基因p53