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磁共振DWI对慢性乙型肝炎肝纤维化程度和活动度的评价

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重庆医学 2015年第14期44卷 1876-1878页

作者：周应媛张继明浙江省长兴县中医院放射科浙江湖州313100 复旦大学附属华山医院感染科上海200040

目的探讨磁共振弥散加权成像(DWI)评价慢性乙型肝炎肝纤维化程度和肝炎活动度的价值。方法设置不同的弥散敏感系数b值对102例慢性乙型肝炎患者(肝炎组)和26例健康志愿者(对照组)进行磁共振DWI检查,测定并比较两组肝脏感兴趣区的表观弥... 详细信息

目的探讨磁共振弥散加权成像(DWI)评价慢性乙型肝炎肝纤维化程度和肝炎活动度的价值。方法设置不同的弥散敏感系数b值对102例慢性乙型肝炎患者(肝炎组)和26例健康志愿者(对照组)进行磁共振DWI检查,测定并比较两组肝脏感兴趣区的表观弥散系数(ADC)值。肝炎组进一步分为纤维化组(n=74)和无纤维化组(n=28)。结果设置b值为100和200s/mm2时,两组ADC值比较差异无统计学意义(P>0.05);b值为400、600和800s/mm2时,肝炎组ADC值低于对照组,肝纤维化组ADC值低于无纤维化组,差异有统计学意义(P纤维化组S3及S4期ADC值低于S0及S1期,差异有统计学意义(P纤维化程度分期ADC值间的差异无统计学意义(P>0.05);b值为800s/mm2时,不同炎症活动度组G1与G4级的ADC值的差异有统计学意义(P0.05)。结论磁共振DWI技术在评价不同分期慢性乙型肝炎肝纤维化程度和活动度方面具有较好的应用价值,设置b值为800s/mm2时,效果最佳。

关键词：磁共振弥散加权成像乙型肝炎肝脏纤维化表观弥散系数

剪切波速对比磁共振弥散成像评价慢性乙型肝炎肝纤维化程度

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首都医科大学学报 2016年第4期37卷 465-471页

作者：董常峰曾政刘映霞李汉英陈昕骆永芳单灵波黄华陆普选深圳市第三人民医院超声科广东深圳518112 深圳市第三人民医院放射科广东深圳518112 深圳市第三人民医院感染科广东深圳518112 深圳大学生物医学工程学院广东深圳518112

目的对比研究剪切波速与磁共振体素内不连贯运动弥散成像技术对慢性乙型肝炎(以下简称慢乙肝)肝纤维化程度进行无创性分期的价值。方法入选223例经病理证实肝纤维化程度的慢乙肝患者,将其分为轻微肝纤维化(F1)组、肝纤维化(F2)组、严重... 详细信息

目的对比研究剪切波速与磁共振体素内不连贯运动弥散成像技术对慢性乙型肝炎(以下简称慢乙肝)肝纤维化程度进行无创性分期的价值。方法入选223例经病理证实肝纤维化程度的慢乙肝患者,将其分为轻微肝纤维化(F1)组、肝纤维化(F2)组、严重肝纤维化(F3)组、肝硬化(F4)组。80例健康体检者组成对照(F0)组,测量所有入选者肝右叶各段剪切波速及其均值。应用磁共振弥散成像技术获得其中不同病理分期的39例肝纤维化患者及19例健康体检者的弥散值(D)、弥漫分数(f)及灌注相关弥散值(D*)。结果 5组间剪切波速结果两两比较,除对照组与F1组间s5肝段剪切波速差异无统计学意义(P>0.05),其余肝段剪切波速及其均值差异均有统计学意义(P纤维化程度的加重,剪切波速逐级递增。剪切波速诊断≥F1、≥F2、≥F3及F4的临界值分别为1.22 m/s、1.30 m/s、1.45 m/s及1.60 m/s,在非严重型肝纤维化(F1、F2)诊断方面,剪切波速有较高的敏感度,分别达到92.82%、90.12%,而对于严重的肝纤维化及肝硬化(F3、F4),剪切波速则具有极佳的特异度,分别达到92.27%、95.93%,其诊断各期(≥F1、≥F2、≥F3、F4)肝纤维化的受试者工作特征曲线下面积(area under the receiver operating characteristic curve,AUROC)分别达到0.887、0.920、0.952、0.954。磁共振弥散成像方面,与对照组比较,肝纤维化患者的D、f、D*均显著减低(P纤维化程度的加重,f值和D*值持续减低,差异有统计学意义(P纤维化F2期与F1期的能力,最佳诊断分界点分别是0.135、9.928×10-3mm2/s。结论对比剪切波速可细分F2以上级慢乙肝肝纤维化程度,磁共振体素内不连贯运动弥散成像则能将F1期与其他期肝纤维化精确区分,二者联合应用值得临床推广。

关键词：剪切波速磁共振体素内不连贯运动弥散成像肝脏纤维化无创性诊断

新生儿先天性胆道闭锁的病理改变与预后的综合评价

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新生儿先天性胆道闭锁的病理改变与预后的综合评价

作者：王早宇上海交通大学

学位级别：硕士

目的研究新生儿先天性胆道闭锁患者的病理特征与患者的不良预后的相关性分析。方法本研究采取回顾性病例资料研究,收集2017年1月至2018年6月本院诊断为新生儿先天性胆道闭锁的病例120例作为研究对象,根据患者肝移植术后的肝组织病理组... 详细信息

目的研究新生儿先天性胆道闭锁患者的病理特征与患者的不良预后的相关性分析。方法本研究采取回顾性病例资料研究,收集2017年1月至2018年6月本院诊断为新生儿先天性胆道闭锁的病例120例作为研究对象,根据患者肝移植术后的肝组织病理组织学结果,统计肝硬化患者54例,非肝硬化患者66例。分析肝硬化组患者和非肝硬化组患者的一般资料、病理学形态、免疫组化结果、肝功能结果、免疫功能、炎性因子水平之间的差异,同时针对患者的肝纤维化程度进行分析,分析患者的不良预后的相关性和危险因素。结果肝硬化组患者与非肝硬化组患者的性别(Χ=0.251,P=0.620)、疾病类型(Χ=2.481,P=0.290)以及体重指数(t=0.296,P=0.680)之间的差异不存在统计学意义,肝硬化组患者的黄疸严重程度(Χ=6.851,P=0.033)、年龄(t=4.264,P=0.000)、总胆红素(t=10.276,P=0.000)、直接胆红素(t=15.657,P=0.000)、间接胆红素(t=38.064,P=0.000)、碱性磷酸酶(t=3.728,P=0.000)以及总胆汁酸(t=40.871,P=0.000)均高于非肝硬化组患者;通过对两组患者的汇管区增生情况分析,肝硬化组患者的汇管区B1患者12例,B2患者12例,B3患者30例,非肝硬化组患者汇管区B1患者39例,B2患者11例,B3患者16例,两组患者的汇管区增生情况之间的差异存在统计学意义(Χ=17.251,P=0.000);肝硬化组患者肝细胞的MMP-2蛋白表达水平均明显高于非肝硬化组(P纤维化程度的加重而增强,且呈显著正相关性(r=0.512,P=0.04)。肝硬化组患者的CD3+(t=8.819,P=0.000)、CD4+(t=13.156,P=0.000)、CD8+(t=9.001,P=0.000)、Ig A(t=2.651,P=0.009)、Ig M(t=2.162,P=0.033)、Ig G(t=3.721,P=0.000)、CD4+/CD8+比值(t=4.198,P=0.000)均显著低于非肝硬化组;肝硬化组患者的TNF-α(t=22.753,P=0.000)、IL-6(t=2.479,P=0.015)、IL-8(t=4.685,P=0.000)含量显著高于非肝硬化组患者;肝硬化组患者的未治愈率显著高于非肝硬化组患者(Χ=25.521,P=0.000);肝硬化组患者的总胆红素(t=17.747,P=0.000)、谷丙转氨酶(t=10.824,P=0.000)、谷草转氨酶(t=12.527,P=0.000)以及经皮胆红素(t=6.884,P=0.000)显著高于非肝硬化组患者;患者的年龄(r=1.221,P=0.000)、总胆红素(r=1.612,P=0.000)、直接胆红素(r=1.331,P=0.000)、间接胆红素(r=1.181,P=0.000)、谷丙转氨酶(r=1.228,P=0.000)、谷草转氨酶(r=1.871,P=0.000)、经皮胆红素(r=1.254,P=0.000)、肝纤维化程度(r=1.614,P=0.000)、汇管区增生情况(r=1.284,P=0.000)均与患者的不良预后呈正相关性;患者的年龄(OR=1.075,P=0.043)、总胆红素(OR=1.019,P=0.001)、直接胆红素(OR=1.232,P=0.001)、间接胆红素(OR=1.521,P=0.000)、谷丙转氨酶(OR=1.218,P=0.000)、谷草转氨酶(OR=1.062,P=0.000)、经皮胆红素(OR=1.577,P=0.000)、肝纤维化程度(OR=1.621,P=0.000)、汇管区增生情况(OR=1.522,P=0.000)均为新生儿胆道闭锁患者的独立危险因素。结论新生儿胆道闭锁合并肝硬化患者,患者的肝细胞损伤情况较为严重,患者的免疫功能显著下降,随着患者的疾病进展,患者的不良预后显著升高,患者的肝脏纤维化以及汇管区增生情况与患者的不良预后呈正相关。

关键词：新生儿胆道闭锁肝硬化汇管区增生肝脏纤维化不良预后

MMP-1和TIMP-1在丰宫并殖吸虫感染大鼠致肝纤维化中的表达及意义

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MMP-1和TIMP-1在丰宫并殖吸虫感染大鼠致肝纤维化中的表达及意义

作者：周蜀昆明医科大学

学位级别：硕士

目的：观察丰宫并殖吸虫所致的大鼠肝脏损伤时MMP-1及其抑制剂TIMP-1在肝纤维形成过程中的动态表达,从而反映其在肝纤维化中的作用机理. 方法SD大鼠25只,随机分为2组.即正常对照组5只和感染组20只.感染组每只大鼠腹腔注射8条丰宫并殖吸... 详细信息

目的：观察丰宫并殖吸虫所致的大鼠肝脏损伤时MMP-1及其抑制剂TIMP-1在肝纤维形成过程中的动态表达,从而反映其在肝纤维化中的作用机理. 方法SD大鼠25只,随机分为2组.即正常对照组5只和感染组20只.感染组每只大鼠腹腔注射8条丰宫并殖吸虫后尾蚴建立动物模型,对照组每只大鼠腹腔注射等量的生理盐水.感染组按感染时间长短分为4组,每组5只(感染3周组、感染5周组、感染7周组、感染9周组).按感染时间处死各组大鼠.通过ELISA法检测大鼠血清中MMP-1, TIMP-1浓度.同时取肝组织行HE染色判断肝组织炎症程度及肝纤维化程度,行免疫组化染色测MMP-1, TIMP-1在肝组织的表达水平. 结果HE染色肝组织病理形态学结果显示：随着感染时间的延长,肝脏炎症逐渐加重,以感染后5周较为严重,之后肝细胞变性坏死逐渐增多.免疫组织化学显示：随病情进展,MMP-1、TIMP-1表达均是持续上升.ELISA法所检测的血清中的MMP-1呈现上升趋势,TIMP-1浓度也是持续上升,呈现上升趋势。结论：丰宫并殖吸虫感染大鼠可引起肝脏纤维化病变,MMP-1和TIMP-1在此病变过程中的表达有所差异.肝脏病变严重程度与感染时间、MMP-1和TIMP-1的表达有关。提示MMP-l和TIMP-1在丰宫并殖吸虫感染大鼠致肝纤维化的形成机制中起作用。

关键词： MMP-1 TIMP-1 丰宫并殖吸虫肝脏纤维化

咔唑氨基醇衍生物联合抗纤维化药PFD治疗多房棘球蚴病研究

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咔唑氨基醇衍生物联合抗纤维化药PFD治疗多房棘球蚴病研究

作者：武娟新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:(1)通过体外杀伤棘球绦虫原头蚴、细粒棘球蚴微囊和鼠源包囊,确定咔唑氨基醇H1402及其18种衍生物的杀包囊效果。(2)确定咔唑氨基醇药物联合抗纤维化药物PFD干预是否加强治疗效果。方法:(1)采集棘球绦虫原头蚴,观察药物体外杀伤棘... 详细信息

目的:(1)通过体外杀伤棘球绦虫原头蚴、细粒棘球蚴微囊和鼠源包囊,确定咔唑氨基醇H1402及其18种衍生物的杀包囊效果。(2)确定咔唑氨基醇药物联合抗纤维化药物PFD干预是否加强治疗效果。方法:(1)采集棘球绦虫原头蚴,观察药物体外杀伤棘球绦虫原头蚴、细粒棘球蚴培养微囊和鼠源细粒棘球蚴效果,初步筛选效果显著的6种衍生物。(2)测定药物对细粒棘球蚴培养微囊杀伤的半数致死浓度(LC)。(3)建立多房棘球绦虫原头蚴肝门静脉感染BABL/c小鼠模型,通过ELISA检测小鼠血清效价,CT影像学检查和剖腹探查确保造模成功。(4)建模60天后,药物干预30天,灌胃结束30天后,观察小鼠血常规、血液生化指标和脏器变化,留存肝组织观察病理变化以及m RNA水平(?)-SMA表达情况。结果:(1)H1402及其18种衍生物通过体外杀伤实验和测定细粒棘球蚴培养微囊的半数致死浓度(LC),其中DLP1932在12h和24h的LC50值均最小,分别为13.72μM和12.96μM。(2)多房棘球绦虫原头蚴肝门静脉感染小鼠模型建模成功率为100%;干预后对小鼠体重、各脏器重量、血常规和肝、肾功能相关生化指标几乎无影响(P>0.05),药物安全性较高。(3)干预后H1402高剂量组小鼠肝脏病灶面积降低(P纤维化程度,联用也有这样的效果(P化和q RT-PCR结果表明单独给药组以及联合组纤维化程度降低(P<0.05)。结论:(1)H1402及其18种衍生物体外杀伤效果最好的是DLP1932。(2)H1402和DLP1932干预多房棘球绦虫原头蚴感染小鼠安全有效,PFD单独干预可改善病灶周围的炎症反应,联合用药可增强H1402和DLP1932治疗效果。

关键词：多房棘球绦虫原头蚴咔唑氨基醇化合物吡非尼酮肝脏纤维化小鼠

APRI、FIB-4对慢性HBV携带者肝纤维化诊断价值

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APRI、FIB-4对慢性HBV携带者肝纤维化诊断价值

作者：林志敏福建医科大学

学位级别：硕士

目的:评估APRI、FIB-4对慢性HBV携带者肝纤维化诊断价值。方法:采用回顾性研究方法,收集2010年06月至2018年06月之间就诊福建医科大学附属第一医院肝病中心、福建医科大学孟超肝胆医院、泉州市第一医院感染科和莆田学院附属医院,209例... 详细信息

目的:评估APRI、FIB-4对慢性HBV携带者肝纤维化诊断价值。方法:采用回顾性研究方法,收集2010年06月至2018年06月之间就诊福建医科大学附属第一医院肝病中心、福建医科大学孟超肝胆医院、泉州市第一医院感染科和莆田学院附属医院,209例诊断为慢性HBV携带者,154例诊断为慢性HBV携带者Ι。收集患者的基本信息（年龄、性别）及临床资料,包括:乙肝两对半、HBV DNA、血常规、凝血四项、生化、肝脏活组织检查纤维化分期。用Spearman分析法判断APRI、FIB-4与慢性HBV携带者及慢性HBV携带者Ι肝纤维化分期之间的相关性。Logistic回归分析法构建肝脏纤维化分期的诊断预测模型。ROC曲线评价模型的诊断价值,模型间的AUC值比较,采用Z检验,P＜0.05表示差异有统计学意义。所有统计均使用SPSS22.0软件及MedCalc15.0软件进行统计分析。结果:1、APRI及FIB-4与慢性HBV携带者肝纤维化呈正相关（r=0.288,P＜0.001;r=0.238,P＜0.01）;APRI及FIB-4与慢性HBV携带者Ι肝纤维化呈正相关（r=0.337,P＜0.001;r=0.282,P＜0.001）。2、诊断慢性HBV携带者显著肝纤维化（F≥2）时,APRI及FIB-4模型AUC分别为（0.685vs0.643;P=0.137）;诊断慢性HBV携带者肝硬化（F4）时,APRI及FIB-4模型AUC分别为（0.749vs0.691;P=0.252）。3、根据WHO慢乙肝防治指南提出界值,当APRI＞2.0用于诊断慢性HBV携带者肝硬化时（F4）,没有病人被正确预测,APRI＞1.5用于诊断慢性HBV携带者显著肝纤维化时（F≥2）,同样也没有一个病人被正确预测。FIB-4＞3.25用于诊断显著肝纤维化时（F2-F4）,同样也没有一个病人被正确预测。在排除显著肝纤维化方面（F＜2）,当APRI＜0.5时,仅仅能发现54%无明显肝纤维化患者,和当FIB-4＜1.45时,也仅仅能发现56%无明显肝纤维化患者。4、在本研究中,基于ROC分析,APRI模型AUC为0.685和0.749,分别用于诊断慢性HBV携带者显着纤维化和肝硬化,其最优界值分别为0.31和0.39;FIB-4模型AUC为0.643和0.691,分别用于诊断慢性HBV携带者显著的纤维化和肝硬化,其最优界值分别为0.89和1.08。5、APRI诊断慢性HBV携带者Ι显著肝纤维化及肝硬化AUC分别为0.642和0.706;FIB-4诊断慢性HBV携带者Ι显著纤维及肝硬化AUC分别为0.618和0.645。6、总样本中,诊断慢性HBV携带者显著肝纤维化,YGP模型与APRI模型AUC比较分别为（0.730vs0.685;Z=1.513,P=0.130）,YGP模型与FIB-4模型AUC比较分别为（0.730vs0.643;Z=2.263,P=0.024）;诊断慢性HBV携带者严重肝纤维化,YGP模型与APRI模型AUC比较分别为（0.824vs0.806;Z=0.44,P=0.66）,YGP模型与FIB-4模型AUC比较分别为（0.824vs0.742;Z=1.64,P=0.10）。7、对于诊断慢性HBV携带者Ι显著肝纤维化,YGP模型与YGP2模型AUC分别为（0.749 vs 0.760;Z=0.70,P=0.48）;对于诊断慢性HBV携带者严重肝纤维化,YGP模型及YGP2模型AUC分别为（0.856 vs 0.880;Z=1.18,P=0.24）。结论:1、WHO慢乙肝指南推荐APRI及FIB-4界值不适合评估慢性HBV携带者肝纤维化。2、诊断慢性HBV携带者显着肝纤维化和肝硬化,APRI最优界值分别为0.31和0.39;FIB-4最优界值分别为0.89和1.08。3、YGP模型更适合评估慢性HBV携带者显著肝纤维化。4、YGP模型同样也可用于诊断慢性HBV携带者Ι肝纤维化。需探索更准确指标来预测慢性HBV携带者显著肝纤维化和肝硬化。

关键词： APRI FIB-4 慢性HBV携带者慢性HBV携带者Ι 肝脏纤维化模型

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TGFBI在小鼠胰腺癌肝转移中的功能

TGFBI在小鼠胰腺癌肝转移中的功能

作者：洪子茜厦门大学

学位级别：硕士

胰腺癌患者确诊时大多面临着癌症发生到晚期并且伴随着远端转移的问题,其中肝脏是胰腺癌转移的主要靶器官。作为一种细胞外基质蛋白,TGFBI的表达与许多疾病密切相关,在不同的肿瘤微环境中TGFBI可能有不一样的生物学功能,但目前TGBFI蛋... 详细信息

胰腺癌患者确诊时大多面临着癌症发生到晚期并且伴随着远端转移的问题,其中肝脏是胰腺癌转移的主要靶器官。作为一种细胞外基质蛋白,TGFBI的表达与许多疾病密切相关,在不同的肿瘤微环境中TGFBI可能有不一样的生物学功能,但目前TGBFI蛋白在胰腺癌肝转移中的功能尚不清楚。在本研究中,我们发现在人胰腺癌临床样本、KPC小鼠胰腺癌组织、胰腺癌细胞脾脏注射肝转移小鼠模型的肝脏转移灶中,TGFBI的表达均明显增高,并且主要分布在肿瘤间质区域。我们进一步应用全身性敲除TGFBI小鼠来构建胰腺癌肝转移模型,研究敲除TGFBI对在小鼠胰腺癌肝转移中的功能的影响。研究发现,相比较于野生型小鼠,全身性敲除TGFBI的小鼠形成胰腺癌肝转移灶的能力更强,且在肝脏转移灶中纤维化程度更加严重,胶原纤维沉积显著增加,肝转移灶中肿瘤血管明显增多。此外,我们利用小鼠TGFBI重组蛋白处理胰腺癌细胞,发现TGFBI蛋白抑制胰腺癌细胞Panc02的迁移和侵袭。以上研究的结果表明,敲除TGFBI可能通过增强肝转移灶纤维化微环境的形成和肿瘤血管生成来促进胰腺癌的肝转移,提示TGFBI可能具有抑制胰腺癌肝转移的功能。该研究初步阐明了 TGFBI在胰腺癌肝转移中的功能,有助于进一步阐明TGFBI在胰腺癌肝转移中如何发挥抑制肿瘤转移的作用。

关键词： TGFBI蛋白胰腺癌肝转移肝脏纤维化血管生成

肝纤维化中靶向表观遗传重编程血管失调的治疗研究及机制探索

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肝纤维化中靶向表观遗传重编程血管失调的治疗研究及机制探索

作者：马永源四川大学

学位级别：硕士

组织纤维化是许多疾病致残、致死的主要原因;有关资料显示,各种疾病而致死的病人中,超过40%可以归于组织纤维增生疾病。肝脏疾病,特别是肝纤维化的病发状况在全世界范围内愈发严重,而目前肝脏纤维化尚缺乏有效的治疗手段。肝脏固然在损... 详细信息

组织纤维化是许多疾病致残、致死的主要原因;有关资料显示,各种疾病而致死的病人中,超过40%可以归于组织纤维增生疾病。肝脏疾病,特别是肝纤维化的病发状况在全世界范围内愈发严重,而目前肝脏纤维化尚缺乏有效的治疗手段。肝脏固然在损伤后有再生自我修复能力,然而在非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH)中,肝的再生受到抑制,肝脏在长期病变和修复过程中其分子和细胞信号网络出现不同程度地畸变,致使一系列并发症的产生。例如,NASH可导致肝纤维化、肝硬化,在晚期造成及其严重的肝衰竭。NASH同糖尿病及代谢综合征等慢性病类似,全球发病率呈上升趋势,特别是在西方国家,已成为全球范围的主要健康负担。临床上发展NASH治疗的一个主要障碍是缺少系统模拟NASH发病机制的细胞和分子网络的临床及临床前研究。血管内皮细胞(Endothelial cell,EC)可形成“引导性血管微环境”(Vascularniche),通过分泌血管分泌(Angiocrine)因子作用于血管周围的各种类型细胞以调节肝脏组织的损伤修复过程。然而,目前对血管微环境调控肝脏纤维化的机理研究仍有待深入。单细胞测序(Singlecell RNA sequencing,scRNA-seq)作为一项方兴未艾技术手段,能够在单细胞水平上揭示生理病理变化背后的分子和细胞网络特性,已经在全世界范围内得到广泛的应用。本研究通过单细胞测序结合蛋白水平以及生理病理水平的多种手段,试图揭示血管微环境调控肝脏纤维化的机理,找到纤维化进程中关键致病因素。我们发现,血管内皮分泌因子1型血小板反应蛋白解整合素金属肽酶(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin 1,ADAMTS1)可能是优于肝功指标的诊断肝脏纤维化的生物学标志物。然而ADAMTS1调控肝脏纤维化的具体作用机制尚不明确。本研究聚焦于肝脏纤维化发病进程中的关键分子靶点,通过血管内皮细胞与血管周细胞互作及其具体的分子机制来探究内皮分泌因子ADAMTS1调控肝脏纤维化的功能及作用机制。单细胞测序显示,人类肝硬化患者中表观遗传失调的窦血管内皮细胞(sinusoidal endothelial cells,SECs)发生旁分泌/血管分泌因子重编程,内皮来源ADAMTS1可以通过TGF-β信号调控促纤维化的Th17细胞应答,进而促进肝脏纤维化。同时,本研究构建肝脏纤维化体内及体外实验平台,通过单细胞测序、细胞外囊泡(EVs)移植等多种手段研究,探明了肝脏纤维化损伤修复过程中ADAMTS1与Th17细胞相互作用,促进纤维化的发生,并利用EVs小鼠移植实验验证了AD AMTS 1的促纤维化作用。本研究也基本确定了 AD AMTS 1的关键下游靶点,完善了纤维化病理进程对应的分子机制,这将有利于扩展肝脏纤维化的诊疗手段。

关键词：肝脏纤维化血管内皮细胞单细胞测序表观遗传

NP30单特异性双链抗体的制备及对血吸虫病的治疗作用

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NP30单特异性双链抗体的制备及对血吸虫病的治疗作用

作者：朱晓娟南京医科大学

学位级别：硕士

血吸虫病是一种严重危害人体健康的人兽共患寄生虫病。目前虽然吡喹酮的治疗可以取得可靠疗效,但长期使用可能出现耐药性[1,2],同时急性血吸虫感染的死亡时有发生,慢性血吸虫病肝脏纤维化尚无有效的治疗方法。血吸虫慢性感染动物血清中... 详细信息

血吸虫病是一种严重危害人体健康的人兽共患寄生虫病。目前虽然吡喹酮的治疗可以取得可靠疗效,但长期使用可能出现耐药性[1,2],同时急性血吸虫感染的死亡时有发生,慢性血吸虫病肝脏纤维化尚无有效的治疗方法。血吸虫慢性感染动物血清中存在着天然产生的抗独特型抗体(AId),Olds[3]根据AId的免疫调节作用,将日本血吸虫慢性感染小鼠血清用于急性感染小鼠的治疗,研究结果表明AId可降低急性虫卵肉芽肿反应和急性血吸虫感染的死亡率,提示抗独特型抗体有可能用于急性血吸虫感染的治疗。管晓虹等[4]建立了一株日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30,为肠相关抗原(GAA)的内影像抗独特型抗体,可替代虫源抗原用于血吸虫病免疫诊断[5]和疫苗的研究[6],并对虫卵肉芽肿和肝纤维化具有负调节作用[7],可明显减轻血吸虫病造成的宿主免疫病理损害,证明NP30具有抗感染免疫和抗病免疫的双重功效。许静等[8]将NP30用于急性血吸虫感染的治疗,实验结果表明NP30可延长血吸虫感染小鼠的生存时间,降低虫卵肉芽肿反应。但NP30为鼠源性单抗,作为异种蛋白用于人体可产生人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody,HAMA)[9],从而限制了它在人体内的应用。近年来随着基因工程抗体技术的发展,可将鼠源性抗体进行改造,以减轻其对人体的免疫病理损害。双链抗体(Diabody)是一种小分子抗体,去除了抗体的恒定区,很大程度上降低了抗体的鼠源成分。本研究在NP30的基础上,构建、表达NP30的基因工程抗体—单特异性双链抗体,并建立小鼠血吸虫自然感染模型,观察NP30双链抗体对血吸虫病的治疗作用。材料与方法1.从鼠源性抗独特型抗体NP30杂交瘤细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA。以cDNA为模板,设计引物,扩增NP30重链可变区(VH),轻链可变区(VL),用overlap PCR法扩增双链抗体基因VH-GGGGS-VL,送公司测序验证其正确性。2.将双链抗体基因VH-GGGGS-VL重组入原核表达载体pBAD/gIII,表达质粒转化*** TOP10F',左旋阿拉伯糖诱导表达。对表达的Diabody进行分离纯化,ELISA检测纯化的Diabody与血吸虫病人血清抗体的结合活性。3.建立小鼠血吸虫自然感染模型,随机分为3组:○1 Diabody治疗组;○2 NP30治疗组;○3 PBS对照组。感染后第1天、第2周、第4周,Diabody、NP30治疗组分别注射抗体1次,PBS阴性对照组每次注射灭菌PBS。感染后10周将各组存活的小鼠断颈处死,计算各组死亡率、减虫率、减卵率。取小鼠肝脏做石蜡切片, HE染色测量虫卵肉芽肿直径及面积,Masson染色分析肝脏纤维化程度。研究结果1.测序结果表明双链抗体的VH、VL与鼠源性NP30可变区基因序列完全相同,VH大小为351 bp, VL大小为318 bp,证明双链抗体基因构建成功。2.构建了Diabody的原核表达系统,Diabody在细菌超声上清和沉淀内均有表达,分子量大小在34KD左右。对Diabody进行了纯化,ELISA检测纯化的Diabody能够与血吸虫病人血清抗体特异性结合。3.动物实验结果表明,Diabody治疗组、NP30治疗组、PBS对照组的死亡率分别为50%、27.8%、66.7%,Diabody治疗组、NP30治疗组的减虫率分别为19.25%、29.07%,其中NP30治疗组死亡率、成虫数显著低于PBS组(P肝脏石蜡切片HE染色,Diabody、NP30治疗组含单个虫卵的肉芽肿平均直径和面积均显著小于PBS对照组(P肝脏石蜡切片Masson染色,纤维化半定量分析,Diabody、NP30治疗组肝脏纤维化程度均显著小于PBS组(P肝脏纤维化程度,提示本实验制备的NP30双链抗体虽不能降低血吸虫感染的死亡率,但可明显减轻血吸虫感染造成的宿主免疫病理损害。

关键词：日本血吸虫抗独特型抗体双链抗体虫卵肉芽肿肝脏纤维化血吸虫病