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基于“传舍”理论治疗结直肠癌转移“四则”

中华中医药杂志 2024年第6期39卷 2890-2894页

作者：梁众擎尹刚万林鹭殷启航王旭唐德才南京中医药大学针药结合实验室南京210023 南京中医药大学针灸推拿学院·养生康复学院南京210023 南京中医药大学中医学院南京210023

结直肠癌恶性度高,生存率低,中医药在转移后期及术后的辅助治疗中多起主导作用,不仅有效延长患者生存时间,还可提高患者生活质量。唐德才教授基于《黄帝内经》“传舍”理论及临床经验,提出治疗结直肠癌转移四法,即重调脾胃、补气为先,... 详细信息

结直肠癌恶性度高,生存率低,中医药在转移后期及术后的辅助治疗中多起主导作用,不仅有效延长患者生存时间,还可提高患者生活质量。唐德才教授基于《黄帝内经》“传舍”理论及临床经验,提出治疗结直肠癌转移四法,即重调脾胃、补气为先,调节情志、活血为纲,引药归经、解毒为使,清下焦湿热、肠胃兼顾,合以“补泻兼施、收散相宜、气血共调、正邪兼顾”之“四则”,以直捣病位,破除瘀血癌毒,恢复大肠传导功能,在联合放化疗药物治疗时达到抗敏、增效、减毒、预防转移、改善症状之效。在多年临证治疗结直肠癌转移屡获奇验。

关键词：肿瘤传舍结直肠癌转移四法四则

非编码基因MALAT1调控结直肠癌转移的机制研究

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非编码基因MALAT1调控结直肠癌转移的机制研究

作者：杨敏慧南方医科大学

学位级别：硕士

随着基因组计划的完成,以及蛋白质组学和转录组学的蓬勃开展,促使RNA组学研究日趋成熟,人类基因组的非编码组分非编码RNA (noncoding RNA, ncRNA)在生命过程中所发挥的不可忽视的重要作用已经逐步的到了广泛的重视和认可。通常,基因组... 详细信息

随着基因组计划的完成,以及蛋白质组学和转录组学的蓬勃开展,促使RNA组学研究日趋成熟,人类基因组的非编码组分非编码RNA (noncoding RNA, ncRNA)在生命过程中所发挥的不可忽视的重要作用已经逐步的到了广泛的重视和认可。通常,基因组研究集中在对基因组序列中开放读码框的注释和功能划定,然而在真核细胞中,仅有一小部分组分是基因组编码蛋白质的氨基酸序列信息,未知功能的非编码序列占人类基因组的98%,在调节基因表达中起着极为重要的作用。ncRNA被认为,在所有真核细胞调节中起着关键作用,可能具有参与转录调控、DNA复制、染色体配对和染色体凝集等作用。目前研究新获得的数据显示,有一大类功能性RNA分子或隐藏在蛋白质编码区之间或位于编码蛋白质区内,其功能有待进一步阐明。我们在结直肠癌特异性转移相关基因分析研究中,通过对来源同一亲本具有不同转移潜能结直肠癌细胞系进行表达谱芯片分析,发现在上调表达的298个基因,其中一个基因就是命名为MALAT 1 (metastasis associated lung adenocarcinoma transcript1, MALAT 1)为非编码RNA基因,属于长非编码RNA类(long noncoding RNA, lncRNA),定位于染色体11q13.1,全长8.7kb,缺乏明确的开放式阅读框,不编码蛋白质。MALAT 1在不同转移能力的结直肠癌细胞系中差异表达,我们推测MALAT 1可能具有对结直肠癌转移相关基因的调控作用,与结直肠癌的转移相关。为证实我们的假说,本次研究采用原位杂交技术和realtime-PCR检测结直肠癌恶性肿瘤组织、肿瘤转移组织和正常组织,以及9种人结直肠癌细胞株的MALAT 1表达情况,分析MALAT 1与结直肠癌中的表达及其与肿瘤转移性之间的关系;利用RNA沉默技术(RNA interference, RNAi)和RNA激活技术(RNA activation, RNAa)研究MALAT 1基因在结直肠癌增殖、侵袭、转移中的作用,探讨MALAT 1基因表达对结直肠癌细胞生物学特性的影响;最后,利用生物信息学计算方法和蛋白质组学技术,筛查不同转移潜能结直肠癌细胞株的差异表达蛋白,分析鉴定非编码RNA基因MALAT 1调控结直肠癌转移相关基因靶点。第一部分MALAT 1在结直肠癌组织和细胞中的表达通过原位杂交技术,RT-PCR和realtime-PCR技术分别检测结直肠癌组织、转移癌组织和正常组织以及9种人结直肠癌细胞株MALAT 1的表达情况。在细胞水平：RT-PCR产物电泳图灰度分析显示：低转移潜能大肠癌细胞组MALAT1平均灰度值低于高转移潜能大肠癌细胞组,差异显著(t=-8.514,P结直肠癌高转移潜能细胞株MALAT 1表达量高于低转移潜能细胞株,差异显著(t=-7.189,P结直肠癌细胞间MALAT 1基因表达差异显著(F=1045.526P肠癌低转移潜能细胞株LS174 T相比,MALAT 1在COLO 205、LOVO、SW620和SW480／M5表达量较高(P转移潜能细胞株的阳性评分高于低转移潜能细胞组,差异显著(χ2=8.586,P结直肠癌细胞核,各细胞组间统计分析差异显著(χ2=11.913,P=0.036),与LS174 T细胞相比,高转移潜能细胞株SW620和LoVo中MALAT 1表达量较高,差异显著(P转移潜能细胞株中,MALAT 1表达量明显高于低转移潜能细胞株,其中以COLO 205和LoVo细胞MALAT 1表达量最高,而SW480和LS174 T表达量最低。在组织水平：RT-PCR产物电泳图灰度分析结果显示：结直肠癌组织中MALAT 1基因表达间差异显著(F=99.784,P转移癌和结直肠癌组织中MALAT 1表达量高于正常大肠黏膜组织,有显著差异(P结直肠癌组织中MALAT 1基因表达组间差

关键词： MALAT1 结直肠癌转移靶基因 RNA interference RNA activation 实时荧光定量PCR 蛋白质组学生物信息学预测 APAK-9

具核梭杆菌调控miR-122-5p表达与外泌体分泌在结直肠癌转移中的作用及机制研究

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具核梭杆菌调控miR-122-5p表达与外泌体分泌在结直肠癌转移中的作...

作者：张梦姣山东大学

学位级别：硕士

背景:结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是最为常见的消化道恶性肿瘤之一,已成为全球发病率第三,死亡率第二的癌症,严重威胁着人类健康。微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一种小的非编码RNA,已被证明可以在转录后水平调节靶基因的表达。越... 详细信息

背景:结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是最为常见的消化道恶性肿瘤之一,已成为全球发病率第三,死亡率第二的癌症,严重威胁着人类健康。微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一种小的非编码RNA,已被证明可以在转录后水平调节靶基因的表达。越来越多的证据表明,miRNAs的异常表达和功能异常参与了包括CRC在内的许多癌症的病理生理过程。目前,肠道菌群已被证明与结直肠癌的发生具有相关性。其中,已有研究表明具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)可诱导结肠中的促炎状态,从而导致癌症的发生。据报道,Fn可以通过调节多种致癌miRNAs的表达影响结直肠癌的发生发展,但对抑癌miRNAs的影响了解较少。因此深入探讨Fn对miRNAs的调控作用有助于揭示CRC的发病机制。目的:探究Fn对结直肠癌细胞miRNAs的表达调控作用,解析Fn促进结直肠癌转移的作用机制,为CRC预防及治疗提供新思路和治疗手段。方法:***分别与SW480及HCT116细胞共培养,建立Fn感染结直肠癌细胞模型。超速离心法提取Fn感染结直肠癌细胞来源的外泌体。高通量测序分析具有不同Fn丰度的结直肠癌患者血清外泌体,以及感染与未感染Fn细胞培养液上清外泌体中miRNAs表达谱,并对上述两个测序结果取交集,筛选出差异表达最明显的miRNA。2.利用逆转录实时荧光定量技术(Reverse Transcription Quantitative PCR,RT-qPCR)进一步验证感染细胞模型中感染组与未感染对照组中外泌体miR-122-5p的表达。***-qPCR检测miR-122-5p在CRC临床样本中的表达。4.体外分别使用transwell实验及细胞划痕实验来评估不同处理组对结直肠癌细胞侵袭、迁移的影响。体内通过脾注射构建结直肠癌肝转移模型,以评估上述不同处理组对结直肠癌转移的影响。5.通过对Fn感染阳性的结直肠癌组织中升高的mRNAs及联合miR-122-5p靶基因的生物信息学预测,筛选出Fn感染的结直肠癌细胞中发挥作用的下游靶点。6.双荧光素酶实验验证miR-122-5p对FUT8的调控关系。7.检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中的FUT8表达及Fn感染与未感染对照组结直肠癌中FUT8的表达。8.分别过表达或抑制miR-122-5p和FUT8的表达,通过Western blot和RT-qPCR检测EMT相关指标的变化。结果:1.两组高通量测序分析结果显示miR-122-5p在具有高、低Fn丰度的结直肠癌患者血清外泌体及感染、未感染Fn的细胞来源的外泌体中差异表达,且均上调表达。2.在Fn感染阳性的结直肠癌患者中,miR-122-5p的表达在血清与组织中呈显著的负相关。血清外泌体miR-122-5p高表达与CRC患者淋巴结转移及远处转移存在相关性。3.体外实验表明,过表达miR-122-5p显著减低了结直肠癌细胞迁移和侵袭的潜能。体内实验表明,miR-122-5p过表达处理使小鼠肝转移肿瘤结节数目显著下调,抑制miR-122-5p表达会导致相反的结果。***-qPCR结果证实,Fn感染导致结直肠癌细胞外泌体中miR-122-5p升高,但细胞内水平呈现下调。表明Fn感染促进癌细胞内肿瘤抑制性的miR-122-5p以外泌体包裹的形式排出。*** 结合蛋白(RNA-binding proteins,RBP)hnRNPA2B1 介导外泌体包裹的miR-122-5p的胞外转运过程。6.双荧光素酶实验证实FUT8是miR-122-5p发挥作用的靶基因。RT-qPCR和Western blot验证了结直肠癌细胞中FUT8表达与miR-122-5p表达之间的负相关关系。FUT8可以部分逆转miR-122-5p对结直肠癌细胞的抑制作用。7.机制上,miR-122-5p的下调导致了FUT8水平的升高,上调Smad2/3蛋白水平及EMT相关标志物水平。结论:***感染促进结直肠癌细胞内肿瘤抑制性的miR-122-5p以外泌体包裹的形式排出胞外,导致胞内miR-122-5p水平降低。***感染导致的癌细胞内降低的miR-122-5p解除对下游靶基因FUT8的抑制,激活了 TGF-β1/Smads信号通路,诱导EMT,从而促进CRC转移。

关键词：具核梭杆菌 miR-122-5p 外泌体上皮间质转化结直肠癌转移

肿瘤细胞来源外泌体circ4234通过增强巨噬细胞M2型极化促进结直肠癌转移

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肿瘤细胞来源外泌体circ4234通过增强巨噬细胞M2型极化促进结直肠...

作者：邵博郑州大学

学位级别：硕士

研究背景与目的结直肠癌是消化道肿瘤最常见的类型之一,也是世界上第三常见的癌症死亡原因,其转移严重威胁人类的生命质量。肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)在肿瘤转移的发生过程中发挥着关键的作用。巨噬细胞属于常见的免疫细... 详细信息

研究背景与目的结直肠癌是消化道肿瘤最常见的类型之一,也是世界上第三常见的癌症死亡原因,其转移严重威胁人类的生命质量。肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)在肿瘤转移的发生过程中发挥着关键的作用。巨噬细胞属于常见的免疫细胞之一,理论上能够阻止肿瘤的发生发展。然而,肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophage,TAMs)丰度的增加通常与较差的预后相关。目前已有相当的研究报道,circRNA在外泌体的含量非常丰富并且十分稳定。细胞有可能通过将circRNA分泌到外泌体中进行输送。因为外泌体可以被多种细胞接收,其中还包括巨噬细胞,因此目前认为外泌体可以作为细胞间通讯的信使。然而,关于肿瘤细胞来源外泌体circRNA是如何调控巨噬细胞M2型极化进而影响结直肠癌进展,尚需更深入的探索。本研究为此探讨了结直肠癌细胞来源外泌体circRNA对结直肠癌微环境中的巨噬细胞M2极化状态的影响,并探讨了外泌体circRNA对巨噬细胞M2极化影响的具体机制以及其通过肿瘤微环境的改变从而影响结直肠癌转移的作用。为结直肠癌外泌体circRNA作为肿瘤细胞早期诊断标记物以及未来治疗靶点提供了研究基础和数据支持。研究方法:1.通过对6对结直肠癌组织及对应的癌旁组织行高通量测序,筛选出本研究目标circRNA,设计circ4234的反向引物及正向引物,通过进行核酸胶电泳以验证circ4234的环状结构;利用放线菌素D实验,通过qRT-PCR验证circ4234的环状结构。2.提取多种结直肠癌细胞系(HCT116和SW620,SW480,CACO2,LOVO)与一种正常的结直肠细胞系(FHC)的培养上清的外泌体,利用western blot及粒径分析鉴定所提取的外泌体,采用qRT-PCR技术检测结直肠肿瘤细胞系和正常细胞系外泌体中circ4234的表达情况。3.通过培养THP-1细胞,利用佛波酯(PMA)将其诱导成M0巨噬细胞,经过结直肠癌细胞外泌体HCT116、SW620进行诱导,建立M2型巨噬细胞模型,通过qRT-PCR及western blot实验检测其标志物的表达水平以证实M2型巨噬细胞模型的成功构建。4.在结直肠肿瘤细胞系HCT116和SW620的培养上清中提取外泌体,与经佛波酯(PMA)诱导的THP-1细胞进行共培养,在不同时间点(0h,4h,8h,12h,16h,20h,24h)提取巨噬细胞的RNA,采用qRT-PCR技术检测经不同时间诱导的巨噬细胞内circ4234表达的变化。利用外泌体分泌抑制剂GW4869清除肿瘤培育上清中的外泌体,利用已被清除外泌体的肿瘤上清培养巨噬细胞,通过qRT-PCR的方式检测巨噬细胞内circ4234的表达情况。5.结直肠细胞系HCT116与SW620中敲低circ4234后,提取肿瘤细胞上清外泌体,与经PMA诱导的THP-1细胞共孵育24-48h,通过qRT-PCR,western blot等方式检测巨噬细胞M2标志物CD206,IL10,CD301的表达情况。6.构建细胞体外共培养模型,采用Transwell实验检测空白组,共培养对照组和共培养敲低组细胞迁移和侵袭能力的变化。明确外泌体circ4234通过影响巨噬细胞极化从而影响结直肠癌的迁移和侵袭能力。采用western blot实验检测空白组,共培养对照组和共培养敲低组细胞EMT相关分子ZEB1的表达情况。7.通过生物信息学,双荧光素酶报告实验,qRT-PCR验证circ4234的靶基因以及miR-379-3p的靶基因。Western blot检测STAT3信号通路关键分子p-STAT3的蛋白表达水平。研究结果:1.根据高通量测序结果并与免疫相关基因行相关性分析,筛选出顶级候选circRNA-circ4234;核酸电泳结果显示:circ4234的反向引物于cDNA的产物中可见明显条带,而正向引物于cDNA及gDNA的产物中均可见明显条带。放线菌素D结果显示,circ4234的衰减速度明显慢于其亲本基因POLQ的衰减速度,进而证明circ4234的环状结构。2.通过Western blot方法鉴定结直肠癌细胞外泌体,发现外泌体特异性蛋白CD9及TSG101呈现出明显的高表达,粒径分析结果显示:所提取外泌体直径处于30-150nm之间,qRT-PCR结果显示:结直肠癌细胞系(HCT116、SW620、SW480、LOVO、CACO2)外泌体与结直肠正常粘膜细胞系(FHC)外泌体相比,circ4234的表达显著升高(p<0.01)***-PCR结果显示:随着时间的推移,巨噬细胞内circ4234的表达情况不断升高。经外泌体分泌抑制剂GW4869处理的上清孵育的巨噬细胞内circ4234的表达量与对照组相比明显

关键词：外泌体环状RNA 巨噬细胞结直肠癌转移肿瘤免疫

SMARCA5、TGFBRI在结直肠癌转移中的作用及临床意义

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临床和实验医学杂志 2023年第4期22卷 379-382页

作者：黄光好胡晓立张琳潜江市中心医院胃肠外科湖北潜江433199 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化肿瘤外科湖北武汉430022

目的探讨SMARCA5、转化生长因子-β1受体(TGFBRI)在结直肠癌转移患者中的作用及临床意义。方法回顾性选取2019年1月到2022年5月在潜江市中心医院及华中科技大学同济医学院附属协和医院进行手术治疗的190例结直肠癌患者为研究对象,并在... 详细信息

目的探讨SMARCA5、转化生长因子-β1受体(TGFBRI)在结直肠癌转移患者中的作用及临床意义。方法回顾性选取2019年1月到2022年5月在潜江市中心医院及华中科技大学同济医学院附属协和医院进行手术治疗的190例结直肠癌患者为研究对象,并在术中收集患者的癌组织标本及癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法观察结直肠癌转移组织中SMARCA5、TGFBRI表达情况;采用多因素Logistic回归风险模型分析结直肠癌转移的影响因素;利用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。结果结直肠癌转移组织中的SMARCA5阳性表达率为22.47%,低于未转移组织(36.63%)和正常上皮组织(82.18%),TGFBRI在结直肠癌转移组织中的阳性表达率为78.65%,高于未转移组织(65.35%)和正常上皮组织(14.85%),差异均有统计学意义(P结直肠癌转移的发生相关(P结直肠癌转移的危险因素(P结直肠癌转移患者癌组织中表达降低,TGFBRI表达升高,二者表达与结直肠癌转移的发生及预后关系密切。

关键词：结直肠癌转移 SMARCA5 转化生长因子-β1受体预后

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结直肠癌转移后,用温和化疗更有益

抗癌 2019年第4期32卷 48-48页

美国梅奥诊所的研究人员对5,540名转移性结直肠癌患者进行的研究发现,对于病情得到控制的患者而言,在初始治疗后进行维持化疗比激进治疗更有益。

关键词：梅奥诊所转移性结直肠癌维持化疗初始治疗结直肠癌转移

精细肝脏外科理念在结直肠癌肝转移治疗中的应用

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精细肝脏外科理念在结直肠癌肝转移治疗中的应用

作者：陈天拓安徽医科大学

学位级别：硕士

肿瘤转移是恶性肿瘤的重要特征之一，一直为研究重点。大量的研究证实肿瘤转移具有器官特异性。而肝脏有着丰富的双重血供，许多脏器的恶性肿瘤可经血行或淋巴途径转移至肝脏,其中又以结直肠癌多见。结直肠癌患者中约20-25%的患者在确... 详细信息

肿瘤转移是恶性肿瘤的重要特征之一，一直为研究重点。大量的研究证实肿瘤转移具有器官特异性。而肝脏有着丰富的双重血供，许多脏器的恶性肿瘤可经血行或淋巴途径转移至肝脏,其中又以结直肠癌多见。结直肠癌患者中约20-25%的患者在确诊时同时合并肝脏转移;而另有25-50%的患者会最终发展为肝转移癌。转移性肝癌的治疗方式很多，包括手术切除、肝脏移植、射频消融、肝动脉化疗栓塞、免疫调节及生物治疗等。目前世界范围内已经达成共识：手术切除是一种有效并可能使结直肠癌肝转移患者长期生存的治疗方法。传统的肝切除方法在结直肠癌肝转移患者的手术安全性和效果方面取得了不俗的成绩，然而如何使肝切除手术更加安全和有效仍然是一个有待完善且具有挑战性的问题。肝脏外科是外科手术与肝脏解剖的结合，肝脏解剖学的研究促进了肝脏外科的发展。早期通过肝脏解剖学的研究来提升肝脏切除技术，中期通过大量肝脏外科的临床研究来提升手术安全性，近期则是通过微创技术的研究来提升患者术后康复的质量。安徽省立医院许戈良教授在国内较早提出精细肝脏外科这一理念并应用于临床。精细肝脏外科具体手段包括术前精细的评估规划，术中精确解剖、精细止血、精心维护肝脏组织，术后快速康复治疗。术前精细的评估规划，可以确保手术的精确性、安全性，同时有效的防止术后肝功能衰竭的发生;术中精细地操作，可以尽可能的达到肿瘤R0切除标准，同时减少术中血管及胆道损伤的发生，更好地保护剩余肝脏组织及其功能;术后精细的快速康复治疗，可以促进病人心理以及生理上的早日康复。本研究根据收集的36例结直肠癌肝转移患者资料，初步探讨精细肝脏外科理念在肝脏手术领域应用的可靠性，安全性。目的：探讨精细肝脏外科理念在结直肠癌肝转移患者治疗中的应用价值。方法：分析2007年1月至2011年1月安徽省立医院收治的36例结直肠癌肝转移患者的临床资料。根据手术方式分为传统肝切除组19例和精细肝切除组17例。 1.比较两组患者的年龄、性别、术前肝功能水平、术前吲哚青绿15分钟滞留率（ICGR15）、肝脏转移灶的数目;2.比较两组患者术中出血量、输血例数;3.比较两组患者术后肝功能水平、并发症发生率、住院时间、住院费用以及术后无瘤生存率和总体生存率。结果： 1.精细肝切除组与传统肝切除组两组患者基本情况、术前肝功能水平、ICGR15水平无统计学差异（P>0.05），具有可比性;2.精细肝切除组与传统肝切除组相比，术中出血量和输血例数、住院费用无统计学差异，术后总体生存率及无瘤生存率有上升趋势但无统计学差异（P>0.05）;3.精细肝切除组与传统肝切除组相比，术后丙氨酸氨基转移酶水平低，术后并发症发生率低、平均住院时间及术后住院时间短（allP结直肠癌肝转移安全、有效、恢复快。

关键词：精细肝脏外科结直肠癌转移肝脏储备功能评估术中超声引导

高强度聚焦超声治疗结直肠癌肝转移的荟萃分析

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高强度聚焦超声治疗结直肠癌肝转移的荟萃分析

作者：郑惟青安徽医科大学

学位级别：硕士

目的用Meta分析的方法,探讨高强度聚焦超声(HIFU)治疗结直肠癌肝转移的有效性及安全性。方法将高强度聚焦超声、结直肠癌肝转移作为检索关键词,检索中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、维普中文科技期刊(VIP)、万... 详细信息

目的用Meta分析的方法,探讨高强度聚焦超声(HIFU)治疗结直肠癌肝转移的有效性及安全性。方法将高强度聚焦超声、结直肠癌肝转移作为检索关键词,检索中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、维普中文科技期刊(VIP)、万方数字化期刊及MEDLINE、OVID、PUBMED等外文数据库,收集有关高强度聚焦超声治疗结直肠癌转移的临床对照试验(CCTs)。对纳入研究的方法学质量进行评论,然后采用软件RevMan 5.1.4软件进行Meta分析。结果初检相关文献18篇,未检出灰色文献。通过阅读摘要再排除明显不符合纳入标准的文献,最终纳入6篇RCT;经过异质性检验x=15.83,自由度df=15(P>0.05),I=5%,表明纳入的研究不具有异质性。因此,采用固定效应模型,有效性综合结果显示:OR(95%CI)为2.94(2.19,3.94)(P结直肠癌肝转移能取得较高疗效;经过异质性检验x=3.41,自由度df=8(P>0.05),I2=0%,表明纳入的研究不具有异质性。因此,采用固定效应模型,安全性综合结果显示:OR(95%CI)为4.37(2.84,6.74)(P结直肠癌肝转移并发症发生率较低,安全性较高。结论从目前证据来看:HIFU在治疗不可切除的结直肠癌肝转移患者的效果理想,安全性较高,能为结直肠癌肝转移患者治疗提供临床思路。

关键词：高强度聚焦超声结直肠癌转移 Meta分析

菊粉、纤维素及两者混合物对原位种植结直肠癌小鼠肝转移的作用研究

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菊粉、纤维素及两者混合物对原位种植结直肠癌小鼠肝转移的作用研...

作者：王楚卉青岛大学

学位级别：硕士

目的:通过建立原位种植结肠癌模型,观察菊粉、纤维素及两者混合物对BLAB/c小鼠肠道菌群构成及上皮间质转化相关蛋白表达的影响,探究不同种类膳食纤维对小鼠结直肠癌肝转移的作用及机制。方法:于BALB/c雄性小鼠盲肠浆膜下层注射经慢病毒... 详细信息

目的:通过建立原位种植结肠癌模型,观察菊粉、纤维素及两者混合物对BLAB/c小鼠肠道菌群构成及上皮间质转化相关蛋白表达的影响,探究不同种类膳食纤维对小鼠结直肠癌肝转移的作用及机制。方法:于BALB/c雄性小鼠盲肠浆膜下层注射经慢病毒转染带有双荧光标记的CT-26-Luc细胞,建立小鼠原位种植结直肠癌模型。造模2周后,小动物活体成像系统监测小鼠盲肠成瘤状态,将造模成功的60只雄性小鼠随机分为模型组(MOD,AIN-93M饲料)、菊粉组(INU,AIN-93M饲料+10%w/w菊粉)、纤维素组(CEL,AIN-93M饲料+10%w/w纤维素)和混合组(MIX,AIN-93M饲料+5%w/w菊粉+5%w/w纤维素),每组15只,连续干预5周。另设正常对照组(NC)15只,持续给予AIN-93M饲料喂养。干预期间,观察并记录小鼠体重、进食量及生存情况。干预结束后处死小鼠,计算各组小鼠原位瘤重、肝重、生存率、肝转移率;苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠结肠、肝脏病理改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中LPS、CTSK的浓度;实时定量PCR法(RT-PCR)检测TNF-α、TGF-β、IL-10 m RNA的表达水平;免疫印记法(Western blot)检测E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、MMP-9、VEGF的蛋白表达水平;16S r RNA测序比较各组小鼠的肠道菌群;气相色谱-质谱法(GC-MS)检测小鼠粪便中短链脂肪酸(SCFAs)的含量。结果:与MOD组相比,菊粉、纤维素及两者混合物的摄入降低了原位肿瘤重量、肝脏重量、肝转移面积(P结直肠癌肝转移的作用,其机制可能是通过增加有益菌的相对丰度、降低有害菌的相对丰度,抑制炎症的发生,阻断癌细胞的上皮间充质转化进程来实现的。在3种干预方式中,菊粉在抑制结直肠癌转移方面效果更好。

关键词：膳食纤维结直肠癌转移肠道菌群短链脂肪酸 EMT