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美白祛斑化妆品添加剂基本筛选平台研究

日用化学工业 2002年第6期32卷 26-28,33页

作者：马来记林惠芬吕洛姚慧魏少敏上海家化联合股份有限公司科研部上海200082

采用生物化学和细胞生物学方法,以熊果苷为对照,对两种植物提取物(B011和B012)的美白祛斑效果进行测定。结果发现3种物质对蘑菇酪氨酸酶活性均具有较强的抑制作用,半数抑制剂量(ID50)分别为5 358mg/mL、2 910mg/mL和105 500mg/mL,其中B... 详细信息

采用生物化学和细胞生物学方法,以熊果苷为对照,对两种植物提取物(B011和B012)的美白祛斑效果进行测定。结果发现3种物质对蘑菇酪氨酸酶活性均具有较强的抑制作用,半数抑制剂量(ID50)分别为5 358mg/mL、2 910mg/mL和105 500mg/mL,其中B011对酪氨酸酶活性半数抑制剂量最小;在细胞生物学方法中,B012对酪氨酸酶活性抑制不明显,熊果苷对酪氨酸酶活性半数抑制剂量小于B011,分别为0 0311mg/mL和0 3610mg/mL;B012对黑素细胞合成黑素的抑制表现不明显,而B011对黑素细胞合成黑素的半数抑制剂量低于熊果苷,分别为0 7021mg/mL和0 1388mg/mL。鉴于3种物质在化学方法和细胞生物学方法对酪氨酸酶活性抑制或黑素合成抑制的差异,提示建立美白祛斑化妆品添加剂筛选平台的必要性和可行性。

关键词：美白化妆品祛斑添加剂筛选平台

基于蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）和α-葡萄糖苷酶（GAA）的降糖筛选平台的建立及其应用

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基于蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）和α-葡萄糖苷酶（GAA）的降糖...

作者：刘禾培新疆大学

学位级别：硕士

[背景及目的]糖尿病是一种常见的代谢性疾病,它是由于胰岛素绝对或相对分泌不足所造成的,病理表现为身体内的糖、蛋白质、脂肪和电解质代谢紊乱。它可以涉及全身各个系统,甚至诱发许多致命性并发症,严重影响和危害人类健康。近年来,随... 详细信息

[背景及目的]糖尿病是一种常见的代谢性疾病,它是由于胰岛素绝对或相对分泌不足所造成的,病理表现为身体内的糖、蛋白质、脂肪和电解质代谢紊乱。它可以涉及全身各个系统,甚至诱发许多致命性并发症,严重影响和危害人类健康。近年来,随着世界各国社会经济的发展、居民生活水平的提高和生活模式的改变,糖尿病的发病率及患病率逐年升高。在中国已确诊的糖尿病患者达4000万,已成为一种常见病、多发病。糖尿病主要有两种类型:1型糖尿病（type 1 diabetes）,多与遗传背景相关。主要发生于青少年,其胰岛素分泌缺乏,必须注射治疗,但5年内一般没有并发症的发生。2型糖尿病（type 2 diabetes）是由于遗传与环境因素的共同作用造成的,其占糖尿病总数的90%以上。多见于中、老年人,其胰岛素的分泌量并不低甚至还偏高,病因主要是机体对胰岛素不敏感。2型糖尿病很容易引起慢性并发症如糖尿病肾病、视网膜病变、神经病变等,这些都导致了糖尿病患者的高致残率和致死率。近年来的研究发现,这些慢性并发症的发生主要是与代谢中的一系列酶类异常调控有关。因此研究这些酶类的抑制剂或许有助于减少并发症的发生,降低并发症的危害,从而达到治疗糖尿病的目的。其中研究最多的酶类有:α-葡萄糖苷酶（α-glucosidase,GAA）、醛糖还原酶（aldose reductase ,AR）、二肽基肽（dipeptidyl peptidase, DPP）,蛋白酪氨酸磷酸酶（Protein-Tyrosine Phosphatase ,PTP）等。蛋白酪氨酸磷酸酶家族通过特异性地去除蛋白质中酪氨酸残基上的磷酸基团,来改变酪氨酸的磷酸化状态,从而行使对多种细胞功能的重要调节作用。其中蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）是胰岛素信号转导途径的负调控因子,可以降低胰岛素受体自身磷酸化水平,从而降低身体对胰岛素的敏感性。在PTP1B基因敲除的小鼠骨骼肌和肝脏中,其缺失可使胰岛素受体自身磷酸化水平提高,增加细胞或组织对胰岛素的敏感性。PTP1B负调控瘦素信号通路,表达增加和异常激活可引起信号传递紊乱。它在肝脏的过量表达可使超低密度脂蛋白（very low-density lipoprotein ,VLDL）过量产生,引起脂代谢紊乱。糖、脂的代谢紊乱会进一步促进或加重了糖尿病慢性并发症的发生、发展。因此研究PTP1B的特异性抑制剂有望为治疗糖尿病的治疗提供新的帮助。然而,目前PTP1B的抑制剂种类和数量都较少,实验中常用的是对-硝基苯磷酸二钠（PNPP）。PNPP是人工化学合成的产品,在实践中发现存在价格高昂、对身体有一定毒副作用等问题,不是治疗糖尿病的最佳选择。为此需要从一些传统治疗糖尿病的药物和可食用植物中获取天然组分,从中筛选对PTP1B具有较强抑制作用的组分。这些组分纯天然,无毒副作用,对其深入研究有望为糖尿病的新药开发提供基础。维吾尔医药历史悠久,在其形成和发展过程中,采阿拉伯、中医药学之所长,是我国民族医药的独立分支,对人们的健康生活做出了重要贡献。据调查新疆全区有维药600余种,较常用的360种左右,主要有:巴旦杏、鹰嘴豆、雪莲花、沙生蜡菊等。在糖尿病的治疗过程中,传统维药中的一些药材具有很好的作用。近年来对这些药材进行深入研究,发现了多种治疗糖尿病及并发症的有效组分。所取得的成果为治疗糖尿病药物的开发,以及维吾尔医药的现代化发展提供了科学依据。 [方法]利用分离纯化技术,从对糖尿病及其并发症有治疗作用的维药药材中提取有效组分。样品经冷冻干燥后,根据其极性的不同,用二甲基亚砜（DMSO）或蒸馏水配制成溶液备用。利用PCR技术,从真核表达载体pJ3H-PTP1B中扩增出蛋白酪氨酸磷酸酶1B的功能区域（PTP1B1-321）的编码序列,构建到原核表达载体pET-30a（+）,pET-30a-PTP1B1-321通过DNA测序和双酶切鉴定。把重组质粒转入BL21（DE3）菌种中,诱导表达和纯化,得到目的蛋白,通过SDS-PAGE鉴定其大小。利用纯化的蛋白进行酶促动力学实验。从各种提取组分中,筛选对PTP1B抑制效果较好的组分,并测定其半抑制率（IC50）和抑制类型。把筛选出的组分加入正常培养的CHO细胞中,利用Western blot方法测定细胞中胰岛素信号通路下游因子AKT的磷酸化水平,应用氧化酶法测定细胞培养液中葡萄糖的含量。利用RT-PCR技术,克隆白色念珠菌的α-葡萄糖苷酶基因,构建到原核表达载体pET-30a-PTP1B1-321。通过DNA测序和双酶切鉴定。把重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）菌种中,诱导表达和纯化,得到目的蛋白,通过SDS-PAGE鉴定其大小,测定α-葡萄糖苷酶的最适pH值和作用底物。 [结果]（1）通过

关键词：糖尿病蛋白质酪氨酸磷酸1B α-葡萄糖苷酶原核表达筛选平台

建立以RAGE为药靶的抗糖尿病血管病变药物的筛选平台

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世界科学技术-中医药现代化 2004年第5期6卷 29-33页

作者：孟政杰陆茵南京中医药大学新药及海洋药物研究开发中心南京210029

晚期糖基化终产物(advanced glycation end-products,AGEs)受体(receptor for advanced glycation end-products,RAGE)在糖尿病血管病变的发生发展过程中具有相当重要的作用, 可作为防治糖尿病血管病变的药物靶点。建立以RAGE为药靶的... 详细信息

晚期糖基化终产物(advanced glycation end-products,AGEs)受体(receptor for advanced glycation end-products,RAGE)在糖尿病血管病变的发生发展过程中具有相当重要的作用, 可作为防治糖尿病血管病变的药物靶点。建立以RAGE为药靶的体内外筛药系统,用于中药提取物的筛选,将显著提高中药抗糖尿病血管病变有效成分的筛选效率及准确性,对于阐明中药治疗糖尿病血管病变的机制,加快中药现代化进程有重大意义。

关键词：药靶糖尿病血管病变抗糖尿病药物筛选平台发生发展体内防治有效成分中药提取物

一种用于高通量筛选传感器敏感材料的气敏材料筛选平台

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电子技术（上海） 2012年第12期39卷 53-56,48页

作者：王小瑾张顺平张国柱华中科技大学材料成型与模具技术国家重点实验室

设计并搭建了一个能够高通量表征材料气敏性能的测试平台。该测试平台具有高通量(36测试通道)、大的电阻测量范围(可测试500Ω-100MΩ,且测试误差小于5%)、控温准确(可精确至1℃)、界面友好等优点。以甲醛气体为样本,材料芯片由金属盐... 详细信息

设计并搭建了一个能够高通量表征材料气敏性能的测试平台。该测试平台具有高通量(36测试通道)、大的电阻测量范围(可测试500Ω-100MΩ,且测试误差小于5%)、控温准确(可精确至1℃)、界面友好等优点。以甲醛气体为样本,材料芯片由金属盐离子表面改性纳米SnO2制成,在该平台上进行测试。发现0.01mol/LCrCl3、0.02mol/LCrCl3、0.03mol/L CaCl2、0.03mol/L TiCl4掺杂的纳米SnO2材料在300℃条件下对甲醛有良好的响应。证实了该气敏材料测试平台用于高通量筛选材料的可行性。

关键词：高通量气敏材料筛选平台敏感度

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美白祛斑化妆品添加剂的基本筛选平台

美白祛斑化妆品添加剂的基本筛选平台

2002年中国化妆品学术研讨会

作者：马来记林惠芬姚慧宁岭郑跃红魏少敏上海家化联合股份有限公司科研部

目的:阐述建立美白祛斑化妆品添加剂基本筛选平台的必要性。方法:对美白祛斑化妆品添加剂筛选方法的文献进行综述,使用经典筛选方法对熊果苷和两种植物提取物(B011和B012) 的美白祛斑效果测定。结果:1)三种物质对蘑菇酪氨酸酶活性均具... 详细信息

目的:阐述建立美白祛斑化妆品添加剂基本筛选平台的必要性。方法:对美白祛斑化妆品添加剂筛选方法的文献进行综述,使用经典筛选方法对熊果苷和两种植物提取物(B011和B012) 的美白祛斑效果测定。结果:1)三种物质对蘑菇酪氨酸酶活性均具有较强的抑制作用,以B011对酪氨酸酶活性抑制率最高;2)在细胞生物学方法中,B012对酪氨酸酶活性表现不明显,熊果苷对酪氨酸酶活性抑制率高于B011;3)B012对黑素细胞合成黑素的抑制表现不明显,而B011对黑素细胞合成黑素的抑制率高于熊果苷。结论:尽管蘑菇酪氨酸酶活性抑制实验在美白祛斑化妆品添加剂筛选研究中是一种简单、经济、快速方法,但实际应用中存在着局限性和不足,应建立包括细胞生物学方法在内的美白祛斑化妆品添加剂基本筛选平台。

关键词：美白祛斑化妆品筛选平台

来源： cnki会议评论

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我校高内涵药物分析筛选平台建立

上海中医药大学学报 2007年第1期21卷 46-46页

我校肝病研究所成为继国家新药筛选中心与北京大学医学部之后，我国第三个引进高内涵筛选平台的科研单位，同时填补了高内涵技术在中医药领域的空白。

关键词：筛选平台药物分析国家新药筛选中心北京大学医学部中医药领域科研单位研究所

Construction of High Throughput Screening Platform and Its Applications

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Construction of High Throughput Screening Platform and Its A...

作者： Kien Thi Xuan Dao（坚氏春桃）华东理工大学

学位级别：硕士

The aim of this study is to establish an efficient platform for high throughput screening and apply it to the increasing the yield of cephalosporin C （CPC）, which was one of β-lactam antibiotics, through nitrogen source optimization as well as preliminary exploration on high throughput screening of high-yield isoleucine producer strains.. In this study, the following problems are to be resolved.（1） Selecting the type of microtiter plates to study. The types of mirotiter plates often used were24-well,48-well,96-well microtiter plates. Microtiter plates can be chosen based on the oxygen transfer coefficient （KLa） and liquid evaporation （%）.（2） Optimizing the filling volume of microtiter plates and testing the feasibility of microtiter plates for cultivation and for turbidimetric assay.（3） Investigating of parallelity among wells in24-well and48-well microtiter plates.（4） Optimizing cultural conditions such as inoculum age, inoculum volume and fermentation time. In addition, the effect of different concentration starch on production of CPC in24-well microtiter plates was studied.（5） Establishing the high throughput methods for optimization medium, especially nitrogen source.（6） Use of Genipin color reaction with the amino acid L-isoleucine for high throughput screening of high-yield isoleucine producer strains. Through the study, the platform for high throughput screening was successfully established. It was found that24-well microtiter plates and48-well microtiter plates were more appropriate for cultivate aerobic microorganism than widely used96-well microtiter plates. There were higher oxygen transfer coefficient and larger filling volume enough for analyzing of the broth after fermentation. In addition, the water evaporation ratio in24-well is smaller than in48-well and the water evaporation ratio in48-well is smaller than in96-well microtiter plates. Hence,24-well and48-well microtiter plates were suggested for fermentation of aerobic microorganism-Cephalosp

关键词：筛选平台头孢菌素培养基优化

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葡萄糖氧化酶分泌型基因工程菌的构建

葡萄糖氧化酶分泌型基因工程菌的构建

作者：张琛北京化工大学

学位级别：硕士

葡萄糖氧化酶以氧分子作为电子受体将β-D-葡萄糖转化成为葡萄糖酸,同时产生过氧化氢。微生物生产的葡萄糖氧化酶由于其在化工、医药、食物、饮品、临床化学、生物技术和其他工业中的广泛应用而在近些年收到了极大的关注。近几年葡萄糖... 详细信息

葡萄糖氧化酶以氧分子作为电子受体将β-D-葡萄糖转化成为葡萄糖酸,同时产生过氧化氢。微生物生产的葡萄糖氧化酶由于其在化工、医药、食物、饮品、临床化学、生物技术和其他工业中的广泛应用而在近些年收到了极大的关注。近几年葡萄糖氧化酶在生物传感器上的应用更加大了对其的需求量。在多种工业生产中和作为一种分析酶应用正对生物过程产生越来越多的影响。本论文利用毕赤酵母GS115中成功合成并分泌了黑曲霉Z-25的葡萄糖氧化酶GOD-A,经过发酵最终测定酶活达到17.35U·mL-1。单独在酵母中表达黑曲霉葡萄糖氧化酶具有局限性,单纯依靠甲醇利用快型菌株与多拷贝菌株的筛选无法进一步提高酶活,而理性基因改造中的易错PCR手段等都有研究者进行过研究,得到的结果并不能够达到工业化推进的要求,因此,提高酶活的工作需要引入新的改造手段来进行。于是在利用毕赤酵母GS115表达来自于黑曲霉Z-25葡萄糖氧化酶基因GOD-A的基础上进行酶蛋白与菌株的非理性改造,利用高效率的筛选平台对非理性构建的菌株库进行筛选,最终得到性状良好的菌株。1)利用DNA Shuffling技术对黑曲霉葡萄糖氧化酶基因进行单基因的改造,在酵母体系中进行表达,经过筛选得到***-GS115-pPIC9K-GOD(SFL-A),7d摇瓶的发酵酶活达到32 U·mL-1,3L发酵酶活达到767U?ml/’。2)引入青霉葡萄糖氧化酶基因,进行双基因的嵌合基因库的建立,在酵母体系中进行表达,经过筛选得到***-GS115-pPIC9K-GOD(SFL-A+P),7d酶活最高达到41 ***-1,3L发酵酶活达到927 U?mL-1发酵酶活达到927U?mL-1。3)改造酵母菌株,利用全局转录调控(gTME)手段,对TATA盒结合蛋白(TPB)进行突变,提高菌株的蛋白表达量,得到***-GS115-pPIC9K-GOD(SFL)-13-pPICZaA-Aa-TBP,3d酶活达到24U/ml-1,酶活与对照组18 U?ml/i相比商出33%。采用传代培养的方式进行验证转化子的遗传稳定性。第一代与第五代的发酵酶活分别为21.66 U?mL-1与23.87 U?mL-1表明传代前后菌株巧活能够稳定存在,转化子遗传稳定性良好。采用抗生素梯度鉴定菌株基因拷贝数,对比的结果显示改造之后的基因拷贝数与表达原始基因菌株中的基因拷贝数都为7-12个拷贝,因此判断酶活提髙是由于基因的改变所导致的。针对于热稳定性的改造,得到一株有提窝的菌株#2S菌株,残留酶活2.56%,与出发菌相比(1.85%)提高了38%。

关键词：黑曲霉Z-25 葡萄糖酸葡萄糖氧化酶毕赤酵母非理性改造筛选平台

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筛选新药模型

走近科学 2002年第12期 24-25页

作者：杨新刚