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超高压辅助提取甜叶菊中瑞鲍迪苷a工艺及其机理分析的研究

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中国食品添加剂 2016年第2期27卷 62-67页

作者：俞坚杭州职业技术学院杭州市绿色精细化工研究与技术转化重点实验室杭州310018

通过超高压辅助提取甜叶菊中瑞鲍迪苷a工艺的寻优试验,以瑞鲍迪苷a得率为响应值,考查液料比、提取压力和保压时间三个因素对瑞鲍迪苷a得率的影响。试验结果表明,在16.8∶1mL/g液料比、429.5MPa提取压力和7.7min的保压时间下,瑞鲍迪苷a... 详细信息

通过超高压辅助提取甜叶菊中瑞鲍迪苷a工艺的寻优试验,以瑞鲍迪苷a得率为响应值,考查液料比、提取压力和保压时间三个因素对瑞鲍迪苷a得率的影响。试验结果表明,在16.8∶1mL/g液料比、429.5MPa提取压力和7.7min的保压时间下,瑞鲍迪苷a的得率达到35.2mg/g。超高压辅助提取改变了甜叶菊粉内部的微组织结构,表面的孔隙变得更大更多,组织结构变得更加疏松,从而强化了瑞鲍迪苷a的润湿、溶解和扩散的传质过程。

关键词：超高压辅助甜叶菊瑞鲍迪苷a 响应曲面分析

以瑞鲍迪苷a为绿色载体构建的纳米胶束滴眼液的实验研究

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以瑞鲍迪苷A为绿色载体构建的纳米胶束滴眼液的实验研究

作者：宋开超青岛科技大学

学位级别：硕士

眼部药物的递送因其传递效率低一直备受人们的关注,眼睛内的多重屏障机制促使人们探索更合理更有效的给药系统,同时也限制了很多药剂学手段的应用,使剂型的设计存在极大的困难。特别的,对于难溶性药物,这一问题就更加明显,针对这一难题... 详细信息

眼部药物的递送因其传递效率低一直备受人们的关注,眼睛内的多重屏障机制促使人们探索更合理更有效的给药系统,同时也限制了很多药剂学手段的应用,使剂型的设计存在极大的困难。特别的,对于难溶性药物,这一问题就更加明显,针对这一难题,研究者开发了多种新型给药系统,例如固体分散体、脂质体、微囊等,其中胶束体系,特别是纳米胶束给药体系,可以极大地改善难溶性药物的溶解度,使药物分散性更高,进而促进药物在角膜的渗透吸收。更有文献指出,胶束的粒度越小,对于药物吸收的促进作用就越强。瑞鲍迪苷a(RA)是甜菊糖苷混合物中的一种糖苷,近年来在食品和医学中得到广泛应用,但尚未发现其在眼科中的应用,本课题组利用其结构中含有疏水性二萜环和亲水性糖基的性质,将瑞鲍迪苷a作为胶束载体辅料构建胶束体系,研究其对于药物的增溶作用,促进吸收的作用及机制。香豆素6(Cou6)作为难溶性药物经典荧光探针,与瑞鲍迪苷a构建胶束体系并优化处方,对其体内外特性进行了进一步评价;而后,选取紫檀芪(Pt)作为活性药物,构建瑞鲍迪苷a与紫檀芪的活性药物胶束体系,考察了瑞鲍迪苷a-香豆素6纳米胶束滴眼液与瑞鲍迪苷a与活性药物构建得到的纳米给药系统的差异,并且进行了紫檀芪纳米胶束滴眼液与紫檀芪混悬液在体内的药物代谢动力学考察和药效学评价。结果显示瑞鲍迪苷a与香豆素6及紫檀芪均能自组装形成超微小型(小于4nm)、分布均匀的胶束。在一定的浓度范围内(小于15mg/mL),瑞鲍迪苷a及胶束均具有良好的细胞耐受性,不会引起细胞凋亡,也不会引起在体角膜刺激性。在此基础上,采用多种方法比较了香豆素6混悬液与处方香豆素6在角膜组织和细胞的吸收情况,二者结果均显示处方的吸收有着更快更高的优势。观察香豆素6在溶酶体、内质网、线粒体等细胞器内的分布,揭示了胶束被摄取后在细胞内的分布情况及过程;通过进行胶束在角膜上皮细胞及离体眼球中吸收通路的研究,说明了香豆素6的细胞摄取明显参与了一种不依赖能量的、活跃的细胞内吞活动,离体眼球实验结果表明,其内吞作用通路明显比在细胞实验上复杂的多。紫檀芪作为活性药物,在与瑞鲍迪苷a构建的胶束体系与瑞鲍迪苷a-香豆素6纳米胶束滴眼液具有相似的表面特征,与紫檀芪混悬液相比,紫檀芪纳米胶束滴眼液的体外抗氧化活性明显提高,在在体角膜吸收实验中,瑞鲍迪苷a构建的给药系统的组织渗透能力更强,而在体内药效学实验,抗炎实验及氧化应激实验中,瑞鲍迪苷a-紫檀芪纳米胶束滴眼液与紫檀芪混悬液相比,同样表现出了更加明显的疗效。以上结果表明,瑞鲍迪苷a胶束制剂可以作为眼部给药系统的纳米载体,并构建一种新颖的眼内给药系统,其在提高疏水药物的生物利用度方面具有巨大的优势,在眼部给药系统的应用中具有良好的前景。

关键词：瑞鲍迪苷a 香豆素6 紫檀芪胶束眼部药物递送

高效液相色谱法同时测定奶昔粉中的安赛蜜和瑞鲍迪苷a

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食品安全质量检测学报 2020年第23期11卷 8647-8652页

作者：高芝炀梁嘉敏汤臣倍健股份有限公司珠海519040

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)同时快速检测奶昔粉中安赛蜜和瑞鲍迪苷a含量的分析方法。方法样品用水溶解稀释,加入沉淀剂,离心过滤得样品供试液。采用C18色谱柱,以硫酸铵溶液:乙腈:甲醇=65:30:... 详细信息

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)同时快速检测奶昔粉中安赛蜜和瑞鲍迪苷a含量的分析方法。方法样品用水溶解稀释,加入沉淀剂,离心过滤得样品供试液。采用C18色谱柱,以硫酸铵溶液:乙腈:甲醇=65:30:5(V:V:V)作为流动相,检测波长为210nm,流速0.6mL/min,进行检测,外标法定量。结果本方法在20min内完成2种目标化合物的分离分析。试样中安赛蜜浓度在0.0040~0.0403 mg/mL的范围内与峰面积的线性关系良好,相关系数r>0.999,在3水平不同浓度安赛蜜标准溶液添加下,安赛蜜的回收率为98.58%。试样中瑞鲍迪苷a浓度在0.0028~0.0283mg/mL的范围内与峰面积的线性关系良好,相关系数r>0.999。在3水平不同浓度瑞鲍迪苷a标准溶液添加下,瑞鲍迪苷a的回收率为99.04%。均符合标准GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》中的要求,且目标峰分离效果更好,效率提升49.5%。结论该方法快速、准确、灵敏,适合同时测定奶昔粉中安赛蜜和瑞鲍迪苷a含量。

关键词：奶昔粉安赛蜜瑞鲍迪苷a 高效液相色谱法

甜叶菊中甜菊苷与瑞鲍迪苷a含量测定方法研究

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现代农业科技 2017年第19期 250-250,253页

作者：程玉柱夏运喜秦玉华马晶晶刘翠玲符俊峰安徽永生堂药业有限责任公司安徽临泉236400

采用反相高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷a含量,研究测定方法的精密度、线性关系、重复性、稳定性、准确度。研究结果显示,甜菊苷和瑞鲍迪苷a在0.25~2.50 mg/m L范围内与峰面积呈较好的线性相关关系;甜菊苷和瑞鲍迪苷a的加... 详细信息

采用反相高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷a含量,研究测定方法的精密度、线性关系、重复性、稳定性、准确度。研究结果显示,甜菊苷和瑞鲍迪苷a在0.25~2.50 mg/m L范围内与峰面积呈较好的线性相关关系;甜菊苷和瑞鲍迪苷a的加样回收率分别为97.3%和98.6%,RSD分别为2.4%和2.6%。本测定方法快速灵敏、准确可靠,可用于甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷a的质量控制。

关键词：甜叶菊甜菊苷瑞鲍迪苷a 高效液相色谱法

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HPLC法快速测定甜叶菊中瑞鲍迪苷a

食品工程 2014年第4期 60-62页

作者：张友财俞坚董雪瑞朱军林娄泽楠杭州职业技术学院浙江杭州310018

建立以甜叶菊叶片为原料,采用超声萃取法用体积浓度70%的乙醇对瑞鲍迪苷a进行提取,使用高效液相色谱仪检测甜叶菊样品液中瑞鲍迪苷a含量的方法。采用-NH2基柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈与水体积比80∶20,流速1.2 m L/min,紫外... 详细信息

建立以甜叶菊叶片为原料,采用超声萃取法用体积浓度70%的乙醇对瑞鲍迪苷a进行提取,使用高效液相色谱仪检测甜叶菊样品液中瑞鲍迪苷a含量的方法。采用-NH2基柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈与水体积比80∶20,流速1.2 m L/min,紫外检测波长210 nm,进样量15μL。甜叶菊中瑞鲍迪苷a分别在纯水、体积浓度70%乙醇、80%乙腈中提取得率为10.25 mg/g、11.52 mg/g、13.49 mg/g,范围内线性关系良好相关系数R2=0.999 9。采用体积浓度70%乙醇对瑞鲍迪苷a进行提取,此方法安全有效、操作简单、定量准确。

关键词：甜叶菊瑞鲍迪苷a 超声萃取高效液相色谱

杨梅素纳米药物对药源性肾损伤的保护作用及机制研究

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杨梅素纳米药物对药源性肾损伤的保护作用及机制研究

作者：齐学菊青岛科技大学

学位级别：硕士

目的顺铂(Cisplatin)是一种效果显著的含铂类抗癌药物,是临床上使用最普遍的金属基化疗药物之一,常用于肺癌、卵巢癌等实体瘤的治疗。顺铂治疗的常见副作用之一是急性肾损伤(AKI),发病机制尚未阐明且缺乏有效干预措施。最新的研究发现,... 详细信息

目的顺铂(Cisplatin)是一种效果显著的含铂类抗癌药物,是临床上使用最普遍的金属基化疗药物之一,常用于肺癌、卵巢癌等实体瘤的治疗。顺铂治疗的常见副作用之一是急性肾损伤(AKI),发病机制尚未阐明且缺乏有效干预措施。最新的研究发现,c GAS-STING信号通路在调控炎症性疾病中发挥关键作用,可能是调控AKI的潜在靶点。杨梅素(Myricetin,Myr)具有优异的生物活性,如抗炎,抗氧化等,提示其在防治AKI中的潜力。然而,杨梅素在水溶液中的溶解度低,口服生物利用度差,限制了其进一步研究,通过药物递送系统有望改善杨梅素的口服应用。据此,本课题通过构建负载杨梅素的纳米药物,研究其在治疗顺铂诱导的AKI中的作用,并探索其通过调控c GAS-STING信号通路治疗AKI的作用机制。本课题的开展,有望为改善AKI提供新的治疗方案,具有重要研究价值和潜在临床意义。方法1、采用薄膜水化法构建HS15-杨梅素纳米胶束(HS15-Myr),进行表征分析并筛选最优处方比;考察其储存稳定性,测定其体外抗氧化活性和药物释放,并研究其在细胞内的摄取和定位。采用顺铂构建人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)急性肾损伤体外细胞模型,检测HS15-Myr的体外肾保护作用;检测HS15-Myr对活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)的影响;免疫荧光及Western Blot法检测HS15-Myr对顺铂诱导DNA损伤和c GAS-STING信号通路的影响。构建顺铂诱导的小鼠AKI模型,口服给予HS15-Myr,通过小鼠体重、肾组织H&E染色、血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)等评价HS15-Myr的体内肾保护作用;检测HS15-Myr对肾组织相关抗氧化酶如SOD、GSH等的影响;ELISA法检测HS15-Myr对肾组织炎症因子IL-1β、TNF-α的影响;免疫组化法检测HS15-Myr在小鼠体内对DNA损伤-c GAS-STING信号通路的影响。2、以瑞鲍迪苷a(RA)为载体构建负载杨梅素的纳米胶束(RA-Myr),进行表征分析并确定最优处方比;考察其储存稳定性,测定其体外抗氧化活性和药物释放,并研究其在细胞内的摄取和定位。采用顺铂构建HK-2细胞急性肾损伤体外细胞模型,检测RA-Myr体外肾保护作用;检测RA-Myr对活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)的影响;免疫荧光法检测RA-Myr对顺铂诱导DNA损伤和c GAS-STING信号通路的影响。通过添加c GAS抑制剂RU.521,评价RA-Myr联合RU.521对HK-2细胞增殖、ROS积累和MMP的影响,并检测RA-Myr联合RU.521治疗对DNA损伤-c GAS-STING信号通路的影响,明确RA-Myr体外通过调控c GAS-STING信号通路发挥肾保护作用的机制。构建顺铂诱导的小鼠AKI模型,口服给予RA-Myr,通过小鼠体重、肾组织H&E染色、血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)等评价RA-Myr体内肾保护作用;采用RT-PCR检测RA-Myr对肾组织相关抗氧化酶SOD、NQO1、HO-1以及相关炎症因子如TNF-α、IL-1β、IL-6的影响;RT-PCR及免疫组化法检测RA-Myr在小鼠体内对DNA损伤-c GAS-STING信号通路的影响。结果1、本课题所制备的HS15-Myr包封率高,其胶束粒径为12.76±5.8 nm,多分散性指数(PDI)为0.062±0.005,Zeta电位为-7.31±9.0 m V;并具有优异的储存稳定性;体外抗氧化结果显示HS15-Myr提高了Myr的体外抗氧化活性;HS15-Myr显著提高了Myr的溶解度和细胞摄取。体外肾保护作用结果显示,HS15-Myr可减轻顺铂诱导的HK-2细胞死亡、ROS积累和MMP下降;体外作用机制结果显示HS15-Myr抑制了顺铂诱导的DNA损伤和c GAS-STING信号通路的活化。体内结果显示,HS15-Myr缓解了顺铂诱导的小鼠AKI症状,如体重减轻,肾组织病理学损伤,BUN和SCr水平升高等,体现出肾保护潜力(P<0.05);进一步作用机制研究证明HS15-Myr抑制顺铂诱导的相关抗氧化酶和炎症因子水平变化,并抑制顺铂诱导的DNA损伤-c GAS-STING信号通路的活化(P<0.05)。2、本课题所制备的RA-Myr包封率高,其胶束粒径为112.55±0.25 nm,多分散性指数(PDI)为0.290±0.004,Zeta电位为13.92±1.06 m V;并具有良好的储存稳定性;体外抗氧化结果显示RA-Myr提高了Myr的体外抗氧化活性;RA-Myr显著提高了Myr的细胞摄取。体外肾保护作用结果显示,RA-Myr可减轻顺铂诱导的HK-2细胞死亡、ROS积累和MMP下降;体外作用机制结果显示RA-Myr

关键词：顺铂急性肾损伤 cGAS-STING 杨梅素 HS15 瑞鲍迪苷a

新型卡维地洛前体胶束及其对小鼠肝损伤的预防与治疗作用

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新型卡维地洛前体胶束及其对小鼠肝损伤的预防与治疗作用

作者：滕含章青岛科技大学

学位级别：硕士

对乙酰氨基酚过量引起的药物性肝损伤是临床常见急症。目前只有N-乙酰半胱氨酸被批准临床用于肝损伤的急救。但该药生物利用度低,治疗窗窄,只在肝损伤发生的初期有效,限制其临床应用,研究新型肝损伤预防/治疗药物具有重要临床意义。已... 详细信息

对乙酰氨基酚过量引起的药物性肝损伤是临床常见急症。目前只有N-乙酰半胱氨酸被批准临床用于肝损伤的急救。但该药生物利用度低,治疗窗窄,只在肝损伤发生的初期有效,限制其临床应用,研究新型肝损伤预防/治疗药物具有重要临床意义。已上市药物卡维地洛是潜在的肝损伤预防/治疗药物,但其溶解度差,口服生物利用度低,影响其预防/治疗肝损伤的效果。本项目拟以具有保肝活性的中药甘草酸为主要纳米载体,辅以小分子植物提取物瑞鲍迪苷a为混合纳米载体,增溶增效主药卡维地洛,制备一种新型的卡维地洛前体纳米胶束制剂,评价其对对乙酰氨基酚诱导的小鼠肝损伤的预防和治疗的有效性,并揭示其作用机制。采用溶剂蒸发法成功构建卡维地洛前体胶束,以包封率为筛选指标,借助实验设计软件Design-Expert对卡维地洛前体胶束的处方进行优化,得到卡维地洛与纳米载体(即甘草酸二钾&瑞鲍迪苷a混合物)的最优比为1:16,甘草酸二钾与瑞鲍迪苷a的最优比为8.13:1,该比例下甘草酸二钾&瑞鲍迪苷a的临界胶束浓度较小,加入至水或PBS后,能够立即自组装成胶束。该处方下卡维地洛前体胶束的包封率为99.67±0.02%。成功建立卡维地洛分光光度计和高效液相分析方法,用于卡维地洛体外定性和定量分析。制备得到的卡维地洛前体胶束是一种均匀的白色粉末,微观下呈簇状纳米球状结构。由于被成功包封于甘草酸二钾&瑞鲍迪苷a中,卡维地洛以无定形形式存在于前体胶束中,在水中的表观溶解度提高了502倍。卡维地洛前体胶束溶于水性介质中,形成清澈透亮的卡维地洛纳米胶束溶液,平均粒径为15.62±0.27 nm,其多分散系数为0.126±0.010,Zeta电位为-11.77±0.93 m V。卡维地洛前体胶束在25℃环境中具有良好的储存稳定性,在人工肠液中体外释放迅速且不受介质p H影响。卡维地洛前体胶束表现出了较强的体外抗氧化活性。卡维地洛前体胶束具有良好的生物相容性,可以用于口服药物递送系统。急性肝损伤预防/治疗效果评价表明,对乙酰氨基酚过量可诱导小鼠重度肝损伤。卡维地洛前体胶束对对乙酰氨基酚过量表现出了显著的预防/治疗作用,能够有效改善肝损伤小鼠的肝脏组织状态,降低血清AST和ALT水平。这种预防/治疗机制与抑制肝脏氧化应激和HMGB1信号通路相关促炎因子有关。卡维地洛前体胶束制备工艺简单,所用成分均是已获批药物和辅料,有利于临床转化。该前体胶束在体内外实验中均展现出了优异的特性,对肝损伤展现出了较强的预防/治疗效果,而通过调控肝脏中HMGB1信号通路而发挥药效是其作用机制之一。卡维地洛前体胶束这一新剂型可有效提高卡维地洛治疗对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤的药效,为卡维地洛提供了一种较为新颖且具有前景的老药新用思路。

关键词：卡维地洛急性肝损伤对乙酰氨基酚前体胶束甘草酸二钾瑞鲍迪苷a

β-环糊精葡萄糖基转移酶的固定化及其酶学性质

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广州化工 2023年第5期51卷 39-42页

作者：张悦许庭娇李雪妮田长城蚌埠学院食品与生物工程学院安徽蚌埠233030

采用吸附-交联法对β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-cyclodextrin glycosyltranserase,β-CGTase)进行固定化,对吸附载体进行了比较和筛选,优化了交联条件,并对固定化后酶的催化特性进行了初步分析。研究表明阴离子交换树脂D380对β-CGTase... 详细信息

采用吸附-交联法对β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-cyclodextrin glycosyltranserase,β-CGTase)进行固定化,对吸附载体进行了比较和筛选,优化了交联条件,并对固定化后酶的催化特性进行了初步分析。研究表明阴离子交换树脂D380对β-CGTase的吸附性较好;固定化的最佳条件为:戊二醛浓度0.02%、pH 8.0、4℃和固定化8 h,固定化后β-CGTase的酶活可达842 U/g。固定化β-CGTase的热稳定性显著提高,具有良好的操作稳定性;与游离态相比,固定化β-CGTase催化瑞鲍迪苷a形成的产物较少,显现出更佳的催化特异性。

关键词： β-环糊精葡萄糖基转移酶固定化 D380 瑞鲍迪苷a