检索结果-南通市图书馆

作者：王凤青山东大学

学位级别：硕士

海参养殖是海洋经济中的一大产业,海参养殖环境中耐药菌的分布是人们比较关心的问题。抗生素进入海水养殖环境筛选出耐药细菌,增加环境中耐药基因的水平转移和重组,造成耐药基因在环境、动物和人体细菌抗性染色体中的流通,从而导致耐药... 详细信息

海参养殖是海洋经济中的一大产业,海参养殖环境中耐药菌的分布是人们比较关心的问题。抗生素进入海水养殖环境筛选出耐药细菌,增加环境中耐药基因的水平转移和重组,造成耐药基因在环境、动物和人体细菌抗性染色体中的流通,从而导致耐药基因转移至人体致病菌的抗性染色体中,危害人类健康。因此耐药菌的分布分析有着非常重要的意义。本实验以在荣成两处海参养殖池(122°14′34″E 36°54′36″N)和双岛湾(121°57′52″E 37°28′16″N)中采集的五组样品(SS1、WS1、SS2、WS2、WS3)为实验对象,利用稀释涂布法估算SSl、WS1、SS2、WS2、WS3每克或者每毫升样品中可培养细菌的数量,分别约为54.4x104、3.6x104、40×104、20.5×104、4.2×104,通过不同的抗生素筛选培养基培养发现,所有样品中,四环素和克林霉素耐性菌的比例都相对较高。药敏纸片扩散法测定分离菌株的表型耐药性,计算MAR指数,比较分析五组样品间耐药菌分布的异同。我们发现沉积物样品中耐药菌的分布显著大于水样品中耐药菌的分布;分离菌株对氨基糖苷类、四环素类、林可酰胺类抗生素的耐药频率显著高于分离菌株对β-内酰胺类、利福平、氯霉素类、大环内酯类、喹诺酮类抗生素的耐药频率;耐药菌在海参养殖环境和远离人类活动的非养殖环境中都有分布;在分离到的多重耐药菌中,变形菌门细菌占43.28%,厚壁菌门细菌占28.36%,拟杆菌门细菌占25.37%,放线菌门细菌占2.99%。基于16S rDNA序列,分析了105株分离菌株的分类地位并将其保藏入-80°C超低温冰箱,其中变型菌门细菌53株,厚壁菌门细菌26株,拟杆菌门细菌24株,放线菌门细菌2株,其中相似度小于98%的潜在新细菌32株。除了分析海参养殖环境耐药菌的分布之外,本实验还从不同的样品中分离到五株海洋新细菌,利用多相分类的手段鉴定其分类地位。从北极某海域(8°21′629″E 72°8′827″N)沉积物中分离到一株海洋新细菌,编号为435。过氧化氢酶和氧化酶都是阳性,菌落呈现似大米透明色,兼性厌氧,革兰氏阴性。菌株435T的细胞形态为短杆或弯曲杆状,耐受温度范围是4-25℃、pH 6.0-9.0、耐受盐度范围是0.5-6.0%(w/v)NaCl.呼吸醌为Q-8,主要极性脂是磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油,主要脂肪酸是15:1ω8c sum in feature 3 (comprising C16.1ω7c/15 iso2-OH)、 C17:1ω8c、 C15:0。 16S rDNA序列系统发育分析显示,菌株435T与科尔韦尔氏菌属相似度在92.1%-95.6%之间,基因组DNAG+C含量是38.7 mo1%。综合不同的表型特征以及系统发育学和遗传学分析,建议菌株435T (= CICC 10860T= ATCC BAA-2609T)代表科尔韦尔氏菌属的一个新物种,命名为北极科尔韦尔氏菌(Colwellia arctica sp. nov.) 。菌株SY21T是分离自威海近海海岸带(122°0′37″E 37°31′33″N)沉积物的一株海洋新细菌。最适生长温度在33-37°C之间,最适生长pH为pH 7.0-7.5,最适盐度2-3%(w/v)NaCl.呼吸醌类型是MK-7,主要脂肪酸包括iso-C15:0、iso-C17:03-OH和anteiso-C15:0’主要极性脂是磷脂酰乙醇胺、氨脂质和一个未知成分的脂质,基因组DNA G+C含量是37.9 mo1%。根据16S rDNA序列系统发育分析显示,菌株SY21T与厌氧海洋吞噬菌JCM 18693T的相似度最高(94.7%)。依据与其他菌株系统发育关系和不同的表型特征,菌株SY21T可以和其他菌株区分开。实验数据可以说明菌株SY21T是海洋吞噬菌属的一个新物种,建议命名为沉积物海洋吞噬菌(Mariniphaga sediminis sp. nov.),模式菌株是SY21T (=KCTC 42260T= MCCC 1H00107T) 。菌株FB218T是通过富集分离的方法得到的来自于山东威海荣成某海参养殖池的底泥(122°14′25.9″E 36°57′26.2″N)的细菌。菌落呈黄色,革兰氏阴性、兼性厌氧。16S rRNA基因序列系统发育分析显示菌株FB218T应该归属于海洋滑动菌科,和嗜中温羧酸利用杆菌JCM 18290T和大安县羧酸利用杆菌JCM 19490T亲缘关系最相近。菌株FB218T的主要脂肪酸包括iso-C15:0、 iso-C17:03-OH、 iso-C15:03-OH和anteiso-C15:0’主要极性脂是两个未知成分的脂质和磷脂,呼吸醌是MK-7。基因组DNA G+C含量是40.0 mol%。实验数据证明菌株FB218

关键词：海参养殖池抗生素耐药菌多相分类

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海参养殖池微生物多样性及其动态研究

海参养殖池微生物多样性及其动态研究

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作者：缪栋扬州大学

学位级别：硕士

海参养殖业是我国特色海水养殖产业之一,主要分布在辽宁和山东沿海。海参养殖业发展迅速,2010年全国海参养殖面积已达到万公顷,产量达万吨,产值接近亿元。然而,相对于其迅速发展的规模,与海参养殖技术相关的基础研究还比较滞后。因此,... 详细信息

海参养殖业是我国特色海水养殖产业之一,主要分布在辽宁和山东沿海。海参养殖业发展迅速,2010年全国海参养殖面积已达到万公顷,产量达万吨,产值接近亿元。然而,相对于其迅速发展的规模,与海参养殖技术相关的基础研究还比较滞后。因此,相关基础研究越来越受到人们的重视。海参养殖环境中微生物有着十分重要的地位,大部分微生物以生产者或分解者作用参与水生生态系统,部分寄生或共生型病原微生物会造成海参疾病爆发,与海参的健康生长有着十分紧密的联系。而在人工养殖过程中,不规范的投放饵料、药物滥用等造成池底物质堆积,往往会导致水体微生态平衡受到严重破坏,水质恶化、缺氧等,造成海参免疫力下降或死亡;另外,水体富营养化也会造成水体优势青苔与养殖生物饵料藻类竞争,造成底质腐败等,进而给海参养殖造成直接或间接的负面影响。因此,海参养殖环境的健康状况与微生物群落的丰度、群落结构有着紧密的联系,探究养殖环境中微生物群落的组成与动态变化对于海参养殖业具有重要的理论和实践意义。基于以上背景,本工作对海参养殖池塘中的微生物多样性和年度动态变化进行了研究,采用流式细胞术检测水体中浮游微生物丰度;通过高通量测序检测真菌、古菌、细菌等不同类型的微生物多样性及其丰度变化;利用连续流动分析仪对海参养殖水体的环境因子进行测定;综合群落结构和环境因子寻找影响微生物群落变化的制约性因素。另外,针对青苔爆发频繁的实际性问题,利用特异性引物设计和定量PCR技术相结合,探讨检测海参养殖池中青苔孢子的分子检测方法,以期达到对青苔爆发的早期预警。本研究旨在为海参养殖池塘环境微生物生态调控模式的建立提供一定的基础资料。主要研究结果如下:1海参养殖池浮游微生物的分布利用流式细胞仪技术研究了海参养殖池塘水体环境浮游微生物丰度变化及其与环境因子的关系。结果表明:(1)浮游微生物检测出聚球藻、皮微级浮游植物、纳微级浮游植物、隐藻、高低核酸异养细菌几大类型,其中细菌数量级非常大,几乎达到106/mL,而浮游植物的数量级较小,只有102/mL～103/mL。(2)浮游微生物一般都是3月开始生长,到6月份处于爆发顶峰期,9月份的时候已经处于衰退期。(3)浮游微生物数量与环境中的溶解氧,盐度、pH、可溶性总氮具有一定的相关关系,其中,溶解氧和pH对于浮游微生物的影响是最大的。2海参养殖池微生物多样性分析水样过滤膜提取DNA,并进行高通量测序,再结合环境因子对比,研究海参养殖池微生物多样性。结果表明:(1)细菌中变形菌门是重要组成部分,其中α-变形菌(Alphaproteobacteria)是主要类群。CCA分析结果显示,原核生物类群受pH、亚硝态氮、硅、氨态氮、温度控制。(2)古菌生物中,大部分样品优势类群是DHVEG-6。而且大部分古菌如DHVEG6、MHVG、GroupC3、MBGB等都与各种形态可溶性氮元素有着显着甚至是极显著相关性。CCA分析的结果显示出微生物群落受盐度和硅控制。(3)真核微生物中泛植物界占据主要组成部分,而在泛植物界中绿藻门是最主要的。CCA结果显示生物类群受盐度、温度、pH、溶解氧、亚硝态氮、氮磷比控制影响。3海参养殖池三种藻类孢子/配子qPCR检测对海参养殖池三种爆发性青苔进行了 18S和ITS区间测序,设计了以核糖体转录间隔区(ITS)为靶区域的种类特异性PCR引物,通过藻类和环境水样DNA对照实验检验其特异性和适用性。结果如下:(1)所得三种藻类ITS引物均具有一定种类或类群特异性。(2)三对引物在qPCR方法中呈现一定的灵敏度,三株藻类最低检出限度:缘管石莼约1.66×10-4 ng/μL,200个ITS基因拷贝数;未能鉴定到种约6.6×10-6ng/μL,200个ITS基因拷贝数;萱藻1.66×104ng/μL,400个ITS基因拷贝数。(3)使用qPCR方法对烟台海参养殖水体6个季度环境水样中的萱藻孢子/配子进行定量检测,发现样品中萱藻孢子/配子ITS拷贝数的季节变化与青苔爆发规律呈现较高的吻合度,萱藻爆发前期伴随水体中孢子/配子量的增高,初步显示藻类爆发可被qPCR方法预测。

关键词：海参养殖池流式细胞仪细菌古菌真核微生物高通量测序 CCA qPCR ITS rDNA

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海洋细菌新属种的分类鉴定及解磷菌解磷特性的分析

海洋细菌新属种的分类鉴定及解磷菌解磷特性的分析

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作者：朱凤玲国家海洋局第一海洋研究所

学位级别：硕士

海洋细菌分布于海洋的不同位置,如海水、海洋底泥、海洋动植物体表及内部等。海洋环境条件的特异性、多样性赋予海洋细菌以物种、生理、代谢和生态功能上的多样性。海洋细菌多样性可为人类提供种类繁多、结构新颖、化学组成复杂和生理... 详细信息

海洋细菌分布于海洋的不同位置,如海水、海洋底泥、海洋动植物体表及内部等。海洋环境条件的特异性、多样性赋予海洋细菌以物种、生理、代谢和生态功能上的多样性。海洋细菌多样性可为人类提供种类繁多、结构新颖、化学组成复杂和生理活性特异的海洋天然产品,是药物、保健食品和生物材料的巨大宝库。因此,对不同环境中的海洋细菌进行研究,可以进一步认识、开发和利用这些环境中的细节资源,具有理论和实践双重意义。本研究采用微生物生理生化技术和分子生物学技术,对从海洋环境中获得的细菌进行分离并采用16S rDNA测序技术对疑似新属、种的菌株进行深入的生理生化和分子生物学鉴定,共发现3株新菌种和1个新属。对其中1株解磷菌进行了解磷特性研究,具体结果如下:1.海洋新属新菌Sunxiuqinia elliptica gen. nov., sp. nov. DQHS4T的分类鉴定:菌株DQHS4T分离自即墨海参养殖池的底泥样本中,16S rDNA序列分析表明其与亲缘关系最近的Prolixibacter bellariivorans F2T序列相似性为89.6%,且DQHS4T与已知菌株均存在较大差异,不能归类到任何已知的属种,结合各种形态及生理生化特征可知,该菌株为拟杆菌门（Phylum Bacteroidetes）新属新种,DQHS4T指定为模式菌株,建议命名为Sunxiuqinia elliptica gen. nov., sp. nov.。菌株在三个不同国家的菌种保藏中心的保藏号分别为NCCB 100301T、CGMCC 1.9156T及LMG 25367T。2.海洋新菌Cohaesibacter marisflavi sp. nov. DQHS21T的分类鉴定:菌株DQHS21T分离自即墨海参养殖池的底泥样本中, 16S rDNA序列分析结果显示,菌株DQHS21T亲缘关系最近的黏着杆菌属（Cohaesibacter）菌株*** CL-GR15序列相似性为96.1%,形态及生理生化特征分析表明菌株DQHS21T符合黏着杆菌属（Cohaesibacter）的基本特征,而该菌株与*** CL-GR15在形态、生理生化特征上的明显差异及BOX-PCR指纹图谱分析的结果表明菌株为一新种,DQHS21T指定为模式菌株,建议命名为Cohaesibacter marisflavi sp. nov. ,已保藏在荷兰细菌保藏中心及中国普通微生物保藏管理中心,保藏号分别为NCCB 100300T及CGMCC 1.9157T。3. 1株中度嗜盐海洋新菌的分类鉴定及解磷能力分析菌株YCWA18分离自即墨市大桥盐场的底泥样本中,为革兰氏阴性好氧菌,与亲缘关系最近的模式菌株Kushneria sinocarnis Z35的16S rDNA序列相似性为98.57 %,并结合菌株的形态及生理生化特征初步鉴定为Kushneria属的菌株。YCWA18具有较强的解磷能力,在最适生长条件下培养时,菌株的Ca3（PO4）2分解能力最高可达283.16μg/ml,卵磷脂分解能力最高为47.52μg/ml。

关键词：海参养殖池盐场海洋细菌新种新属分类鉴定 16S rDNA DNA-DNA杂交解磷能力

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海参池中养殖铜藻的初步试验

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南方农业 2021年第26期15卷 18-19,30页

作者：赵楠赛珊史良王玉本李霞国家海藻与海参工程技术研究中心/山东省海藻与海参技术创新中心/山东省海藻遗传育种与栽培技术重点实验室山东烟台264003 山东东方海洋科技股份有限公司山东烟台264000

在海参养殖池中培养铜藻,探索铜藻在海参池中的适宜生长条件。试验发现,铜藻移栽15 d后基本适应海参池的生存环境,在4月中旬至6月上旬,水温在14~20℃,铜藻的生长状态良好,增重也较快;到6月中下旬,水温超过22℃,海参池中出现大量污损生物... 详细信息

在海参养殖池中培养铜藻,探索铜藻在海参池中的适宜生长条件。试验发现,铜藻移栽15 d后基本适应海参池的生存环境,在4月中旬至6月上旬,水温在14~20℃,铜藻的生长状态良好,增重也较快;到6月中下旬,水温超过22℃,海参池中出现大量污损生物,如海鞘、紫贻贝等,严重影响铜藻的生长,此时铜藻不适宜在海参养殖池中生长。

关键词：海参养殖池铜藻养殖

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