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4-PBA对巨噬细胞来源的泡沫细胞形成的影响

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4-PBA对巨噬细胞来源的泡沫细胞形成的影响

作者：王明昊承德医学院

学位级别：硕士

目的:探究内质网应激抑制剂4-PBA对巨噬细胞来源的泡沫细胞脂质积累及炎症反应的影响,并探究其可能的发生机制。方法:1.油红O染色检测RAW264.7细胞脂质吞噬情况,胆固醇酶法检测细胞胆固醇含量,明确泡沫细胞是否形成;2.CCK8法检测内质网... 详细信息

目的:探究内质网应激抑制剂4-PBA对巨噬细胞来源的泡沫细胞脂质积累及炎症反应的影响,并探究其可能的发生机制。方法:1.油红O染色检测RAW264.7细胞脂质吞噬情况,胆固醇酶法检测细胞胆固醇含量,明确泡沫细胞是否形成;2.CCK8法检测内质网应激抑制剂4-PBA对细胞的活力的影响,摸索出使细胞活力在80%以上的最佳药物浓度;3.实时定量PCR(RT-q PCR)及蛋白质免疫印迹法(Western Blot)法检测脂质流入及流出受体CD36、SR-A、LOX-1、ABCG1的表达情况及内质网应激相关蛋白PERK、IRE1α、GRP78的表达情况;4.ELSA检测炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的浓度。结果:1.100ug/ml ox-LDL处理Raw264.7细胞24小时后,油红O染色显示细胞油红着色增多,提示泡沫细胞形成;2.不同浓度4-PBA处理RAW264.7后,CCK8结果提示使细胞活力在80%以上的最大浓度是3m M;3.100ug/ml ox-LDL处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比PERK、IRE1的m RNA及蛋白表达上调,ATF6表达无明显变化,3m M4-PBA+100ug/ml ox LDL处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比PERK、IRE1的m RNA及蛋白表达下调,ATF6表达无明显变化;4.100ug/ml ox-LDL处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比CD36、SR-A1、LOX-1的m RNA及蛋白表达上调,ABCG1的m RNA及蛋白表达下调;3m M4-PBA+100ug/ml ox-LDL共同处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比CD36、SR-A1、LOX-1m RNA及蛋白表达下调,ABCG1的m RNA及蛋白表达上调;5.100ug/ml ox-LDL处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度升高,3m M4-PBA+100ug/ml ox LDL处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度下降,差异有统计学意义(P细胞向泡沫细胞转换,其形成过程存在内质网应激及炎症反应;2.4-PBA通过抑制CD36、SR-A1、LOX-1的表达,促进ABCG1的表达抑制泡沫细胞形成及炎症反应,其可能机制是通过抑制内质网应激相关蛋白PERK、IRE1相关通路介导的

关键词： 4-PBA 泡沫细胞内质网应激炎症反应

鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及比较

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复旦学报（医学版） 2019年第4期46卷 445-453页

作者：祁芳菲楼滨杨青复旦大学生命科学学院生物化学系上海200433 复旦大学药学院药理学与生物化学教研室上海201203

目的建立鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型并比较其生物学特征。方法体外培养鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞,经氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)刺激后,油红O染色,于荧光倒置显微镜下观察泡沫细胞形态... 详细信息

目的建立鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型并比较其生物学特征。方法体外培养鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞,经氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)刺激后,油红O染色,于荧光倒置显微镜下观察泡沫细胞形态及脂质富集情况。采用qRT-PCR技术检测ox-LDL对细胞内炎性因子表达的影响;流式细胞术检测ox-LDL对细胞凋亡的影响;酶标仪分别检测ox-LDL对细胞内脂质过氧化标志物活性氧(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平的影响;HPLC检测ox-LDL对鼠、人源巨噬细胞内催化色氨酸沿犬尿氨酸途径(kynurenine pathway,KP)分解代谢的限速酶吲哚胺2,3-双加氧化酶1(indoleamine 2,3 dioxygenase 1,IDO1)活性的影响。结果鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞经ox-LDL处理后,大量脂质在细胞内富集沉积,形成泡沫细胞。ox-LDL既可诱发巨噬细胞内炎性因子高表达,也会引起ROS和MDA水平显著升高,表明ox-LDL可以诱导鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞内炎症反应和脂质过氧化产生。ox-LDL更容易引发人源THP-1巨噬细胞的凋亡,而对鼠源RAW264.7巨噬细胞凋亡却无明显影响。ox-LDL在鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞中均可激活KP。结论鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞均可通过ox-LDL处理来建立稳定的鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型。

关键词：泡沫细胞 RAW264.7 THP-1 炎症因子活性氧(ROS) 丙二醛(MDA) 吲哚胺2,3-双加氧化酶1(IDO1)

分枝菌酸诱导巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第9期30卷 983-985页

作者：喻岚陈全李黎刘革力张路渝重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心基础医学院免疫学教研室重庆400016

目的探讨分枝菌酸(MA)包被聚苯乙烯微球诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞泡沫细胞化的条件及特性。方法将RAW264.7细胞分为空白对照组和分别包被(0、25、50、75、100)μg/mL MA的聚苯乙烯微球实验组,分别将细胞与聚苯乙烯微球混匀、共同孵育24... 详细信息

目的探讨分枝菌酸(MA)包被聚苯乙烯微球诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞泡沫细胞化的条件及特性。方法将RAW264.7细胞分为空白对照组和分别包被(0、25、50、75、100)μg/mL MA的聚苯乙烯微球实验组,分别将细胞与聚苯乙烯微球混匀、共同孵育24、48、72 h、5 d和8 d后,油红O染色后显微镜下观察细胞形态,采用总胆固醇试剂盒和游离胆固醇试剂盒测定各组泡沫细胞内胆固醇酯的含量,采用MTT法检测细胞增殖水平。结果当包被MA浓度为75μg/mL、吞噬时间为24 h时,RAW264.7能形成典型的泡沫细胞,其细胞内胆固醇酯相对含量为60.98%±1.32%;随着吞噬时间延长,形成泡沫细胞所需的MA的浓度逐渐递减;且随着细胞泡沫化程度增加,细胞增殖活力逐渐减弱。结论 MA包被聚苯乙烯微球可快速诱导巨噬细胞形成泡沫细胞,MA浓度与细胞泡沫化程度呈正相关,且有时间依赖性。

关键词：分枝菌酸聚苯乙烯微球巨噬细胞胆固醇酯泡沫细胞

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泡沫细胞胆固醇逆向转运机制及药物干预研究

中华内科杂志 2010年第8期49卷 696-699页

作者：吕湛苟连平陈玲谢彬秦俭川北医学院附属医院心内科四川南充637000 重庆医科大学附属第一医院心内科

目的人THP-1单核/巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,探讨罗格列酮、洛伐他汀对三磷酸腺苷结合盒转运蛋白（ABC）A1表达和细胞内胆固醇含量的影响.方法低密度脂蛋白（LDL）提取,Cu^2＋氧化法获得氧化型LDL（ox-LDL）.建立泡沫细胞模型.W... 详细信息

目的人THP-1单核/巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,探讨罗格列酮、洛伐他汀对三磷酸腺苷结合盒转运蛋白（ABC）A1表达和细胞内胆固醇含量的影响.方法低密度脂蛋白（LDL）提取,Cu^2＋氧化法获得氧化型LDL（ox-LDL）.建立泡沫细胞模型.Western blot检测洛伐他汀、罗格列酮对THP-1单核/巨噬细胞ABCA1蛋白表达的影响.泡沫细胞分9组,分别给予相应的干预因子,培养24 h,检测各组细胞内胆固醇含量.结果与对照组比较,洛伐他汀组、罗格列酮组、各ABCA1单克隆抗体预处理组细胞内胆固醇含量无明显变化（P〉0.05）;而载脂蛋白（Apo）A-I组、洛伐他汀＋ApoA-I组、罗格列酮＋ApoA-I组显著降低（P〈0.05）.结论胆固醇逆向转运需在ApoA-I和ABCA1蛋白共同参与下完成,并能降低细胞内胆固醇含量.罗格列酮能通过促进ABCA1蛋白表达介导胆固醇向胞外转运,使细胞内胆固醇含量进一步降低.

关键词：泡沫细胞胆固醇动脉粥样硬化

三七总皂苷通过调节TLR4/SYK信号抑制ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化泡沫细胞的形成

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天然产物研究与开发 2021年第8期33卷 1267-1273页

作者：赵培李永辉高伟马倩于悦卿王洁路永刚帖彦清河北省人民医院检验科石家庄050051 河北省疾病预防控制中心职业卫生与职业病防治所石家庄050000

三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)是从五加科人参属植物三七根部提取的有效活性成分,临床广泛应用于动脉粥样硬化疾病的治疗,但其相关机制尚不完全清楚,本课题对ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠的体内实验研究发现PNS具有明显... 详细信息

三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)是从五加科人参属植物三七根部提取的有效活性成分,临床广泛应用于动脉粥样硬化疾病的治疗,但其相关机制尚不完全清楚,本课题对ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠的体内实验研究发现PNS具有明显的改善血脂的功能,并对小鼠动脉粥样硬化斑块的形成具有抑制作用,其分子机制与TLR4/SYK信号通路相关;进一步通过体外细胞实验发现PNS能够抑制小鼠斑块内巨噬细胞的吞噬能力和CD36的表达,从而抑制泡沫细胞的形成。因此我们认为三七总皂苷可通过调节TLR4/SYK信号抑制ApoE^(-/-)小鼠泡沫细胞的形成从而抑制动脉粥样硬化的进展。

关键词：三七总皂苷 TLR4/SYK 动脉粥样硬化泡沫细胞

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漆黄素对泡沫细胞蛋白质组的影响

中草药 2017年第2期48卷 312-319页

作者：许颖龄胡潇方来祝骥王萃杨贞卢德赵浙江中医药大学生命科学学院浙江杭州310053 浙江中医药大学附属第三医院浙江杭州310053

目的应用双向电泳和质谱技术研究漆黄素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞蛋白质组的影响,分析漆黄素抑制泡沫细胞形成的分子机制。方法采用MTT法检测ox-LDL对RAW264.7细胞及漆黄素对泡沫细胞活力的影响,化学法检测细胞内胆固醇... 详细信息

目的应用双向电泳和质谱技术研究漆黄素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞蛋白质组的影响,分析漆黄素抑制泡沫细胞形成的分子机制。方法采用MTT法检测ox-LDL对RAW264.7细胞及漆黄素对泡沫细胞活力的影响,化学法检测细胞内胆固醇酯(CE)的量,筛选合适的ox-LDL和漆黄素处理浓度。油红O染色法检测漆黄素对泡沫细胞内脂质累积情况的影响,并用双向电泳法建立漆黄素处理前后细胞蛋白质组图谱,质谱法鉴定差异表达的蛋白质;Western blotting法验证细胞色素b5(Cyt b5)的表达情况。结果 20μg/m L ox-LDL可以成功诱导泡沫细胞,100μg/m L漆黄素干预后,泡沫细胞内CE明显下降,脂质累积减少。蛋白质组学结果表明,漆黄素处理泡沫细胞后,Cyt b5、谷胱甘肽S-转移酶、NADH脱氢酶(泛醌)黄素蛋白2、Prelamin A/C、葡萄糖调节蛋白78、热休克蛋白60、Supervillin、胆固醇酰基转移酶表达量增加,而钙网蛋白、转录延伸因子B、蛋白核受体表达量下降。结论漆黄素可能通过增强细胞抗氧化及抗炎能力,减弱细胞应激反应、降低细胞内胆固醇堆积、调节细胞凋亡及提高免疫能力等途径起到抗动脉粥样硬化的作用。

关键词：漆黄素泡沫细胞动脉粥样硬化蛋白质组胆固醇酯氧化应激

二甲双胍抑制脂多糖诱导的THP-1细胞源性泡沫细胞形成

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第2期32卷 168-172页

作者：谢忠林袁媛石剑宽史小飞高星赵元琳叶菁冯旭阳第四军医大学西京医院心血管内科第四军医大学病理学与病理生理学教研室西京医院病理科陕西西安710032

目的探讨二甲双胍(Met)对脂多糖(LPS)诱导的THP-1来源泡沫细胞的形成、脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达的影响。方法采用100 ng/m L佛波酯(PMA)处理THP-1细胞48 h后,诱导其分化成为巨噬细胞;再利用50μg/m L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL... 详细信息

目的探讨二甲双胍(Met)对脂多糖(LPS)诱导的THP-1来源泡沫细胞的形成、脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达的影响。方法采用100 ng/m L佛波酯(PMA)处理THP-1细胞48 h后,诱导其分化成为巨噬细胞;再利用50μg/m L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)和1μg/m L LPS促进THP-1细胞来源的巨噬细胞形成泡沫细胞,在此过程中用(0、100、200)μmol/L Met进行处理,采用油红O染色分析Met对泡沫细胞形成的影响;采用BODIPY493/503染色,荧光显微镜观察泡沫细胞内脂滴的形态和数量;抽提细胞内脂类,通过定量试剂盒测定细胞甘油三酯(TG)的含量;采用Western blot分析脂滴表面蛋白中脂肪分化相关蛋白(ADRP)、47 k Da的尾连蛋白(TIP47)的表达水平。结果与ox-LDL和LPS组相比,采用100μmol/L、200μmol/L Met处理后能够降低泡沫细胞内的脂滴大小和数量,定量分析显示细胞内TG含量明显降低,并存在剂量依赖关系,其中200μmol/L Met能够降低泡沫细胞中约25%的TG储积。Western blot结果显示,Met能够降低泡沫细胞中ADRP的表达水平,但对TIP47的表达水平无影响。结论 Met能够抑制LPS诱导的THP-1细胞源性泡沫细胞形成,并抑制脂质蓄积,同时下调细胞内ADRP的表达水平。

关键词：二甲双胍 THP-1细胞泡沫细胞脂肪分化相关蛋白(ADRP)

二十碳五烯酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响及机制

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食品科学 2016年第5期37卷 162-166页

作者：王炎炎宋志秀杨立刚夏惠孙桂菊东南大学公共卫生学院营养与食品卫生学系环境医学工程教育部重点实验室江苏南京210009 南京中医药大学第二临床医学院江苏南京210046

目的:研究二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响。方法:将THP-1单核细胞、佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)和氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)共同培养建立泡沫细胞模型,以不同浓度(200、100、50μmol/L)的EPA处理细胞48 h后,采用酶法测定细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)及胆固醇酯(cholesterol ester,CE)含量,采用酶联免疫吸附实验(euzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量,采用半定量反转录聚合酶链式反应(reverse transcript polymerase chain reaction,RT-PCR)测定三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)m RNA表达水平。结果:与模型组比较,EPA干预组细胞内TC及CE含量均降低,并存在显著差异(P细胞上清液中IL-6及TNF-α含量也显著降低(P泡沫细胞内TC的蓄积,抑制泡沫细胞的形成,降低IL-6及TNF-α炎性因子的分泌水平,能够上调ABCA1 m RNA表达水平,进而预防动脉粥样硬化的发生发展。

关键词：二十碳五烯酸泡沫细胞动脉粥样硬化

P3肽抑制RAW264.7巨噬细胞泡沫化的分子机制

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中国药理学通报 2023年第9期39卷 1711-1717页

作者：李佳慧蒋宇恒王承瑾江林邓艳张礼林许庆忠李红梅贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025

目的观察P3肽对RAW264.7巨噬细胞脂质沉积的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT法筛选P3肽及氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)的作用浓度,并用80 mg·L^(-1)的ox-LDL诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞;分别采用... 详细信息

目的观察P3肽对RAW264.7巨噬细胞脂质沉积的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT法筛选P3肽及氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)的作用浓度,并用80 mg·L^(-1)的ox-LDL诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞;分别采用油红O染色和总胆固醇含量测定试剂盒,检测细胞内脂质沉积及总胆固醇含量;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)及Western blot检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)的mRNA和蛋白表达变化;分别应用肝X受体(liver X receptor,LXR)的激动剂T0901317、GW3965,以及LXR抑制剂GSK2033进一步验证P3肽调控ABCA1、ABCG1表达的作用机制。结果P3肽明显减少RAW264.7细胞内脂质沉积,降低细胞内总胆固醇含量,上调ABCA1、ABCG1mRNA和蛋白表达;P3肽上调ABCA1、ABCG1的作用与LXR激动剂T0901317、GW3965相似;加入抑制LXR基因转录的抑制剂GSK2033后,P3肽对ABCA1、ABCG1的基因表达无上调作用。结论P3肽可减少RAW264.7巨噬细胞内脂质积聚,抑制泡沫细胞的形成,其作用机制可能与激活LXR-ABCA1/ABCG1通路有关。

关键词： P3肽 RAW264.7细胞脂质沉积泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1 三磷酸腺苷结合盒转运体G1 肝X受体