4-PBA对巨噬细胞来源的泡沫细胞形成的影响

作     者：王明昊 

作者单位：承德医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：王虹

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：4-PBA 泡沫细胞 内质网应激 炎症反应 

摘      要：目的:探究内质网应激抑制剂4-PBA对巨噬细胞来源的泡沫细胞脂质积累及炎症反应的影响,并探究其可能的发生机制。方法:1.油红O染色检测RAW264.7细胞脂质吞噬情况,胆固醇酶法检测细胞胆固醇含量,明确泡沫细胞是否形成;2.CCK8法检测内质网应激抑制剂4-PBA对细胞的活力的影响,摸索出使细胞活力在80%以上的最佳药物浓度;3.实时定量PCR(RT-q PCR)及蛋白质免疫印迹法(Western Blot)法检测脂质流入及流出受体CD36、SR-A、LOX-1、ABCG1的表达情况及内质网应激相关蛋白PERK、IRE1α、GRP78的表达情况;4.ELSA检测炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的浓度。结果:1.100ug/ml ox-LDL处理Raw264.7细胞24小时后,油红O染色显示细胞油红着色增多,提示泡沫细胞形成;2.不同浓度4-PBA处理RAW264.7后,CCK8结果提示使细胞活力在80%以上的最大浓度是3m M;3.100ug/ml ox-LDL处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比PERK、IRE1的m RNA及蛋白表达上调,ATF6表达无明显变化,3m M4-PBA+100ug/ml ox LDL处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比PERK、IRE1的m RNA及蛋白表达下调,ATF6表达无明显变化;4.100ug/ml ox-LDL处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比CD36、SR-A1、LOX-1的m RNA及蛋白表达上调,ABCG1的m RNA及蛋白表达下调;3m M4-PBA+100ug/ml ox-LDL共同处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比CD36、SR-A1、LOX-1m RNA及蛋白表达下调,ABCG1的m RNA及蛋白表达上调;5.100ug/ml ox-LDL处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度升高,3m M4-PBA+100ug/ml ox LDL处理Raw264.7细胞24小时后与对照组相比IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.ox-LDL可以诱导Raw264.7细胞向泡沫细胞转换,其形成过程存在内质网应激及炎症反应;2.4-PBA通过抑制CD36、SR-A1、LOX-1的表达,促进ABCG1的表达抑制泡沫细胞形成及炎症反应,其可能机制是通过抑制内质网应激相关蛋白PERK、IRE1相关通路介导的