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河豚毒素对斑马鱼的急性毒性研究

药学实践与服务 2022年第6期40卷 536-539页

作者：王浩能张吉芊竹李劲锋贾睿朱玉平朱江波陈基快严朗中国人民解放军海军军医大学卫生毒理学教研室上海200433 中国人民解放军海军军医大学舰船辐射医学防护教研室上海200433 上海海洋大学海洋生态与环境学院上海201306 中国人民解放军海军军医大学基础医学院实验教学中心上海200433

目的研究河豚毒素对斑马鱼的急性毒性。方法在斑马鱼中用最大非致死浓度(MNLC)和10%致死浓度(LC10)测定和评估河豚毒素的急性毒性。结果经Origin 8.0软件模拟,得出河豚毒素对斑马鱼急性毒性MNLC为8.62μmol/L,LC10为15.2μmol/L。在本... 详细信息

目的研究河豚毒素对斑马鱼的急性毒性。方法在斑马鱼中用最大非致死浓度(MNLC)和10%致死浓度(LC10)测定和评估河豚毒素的急性毒性。结果经Origin 8.0软件模拟,得出河豚毒素对斑马鱼急性毒性MNLC为8.62μmol/L,LC10为15.2μmol/L。在本实验条件下,16.0μmol/L及以上浓度河豚毒素可诱发斑马鱼心包水肿和心律异常,终点时出现部分或全部死亡。河豚毒素的急性毒性靶器官是心脏和肝脏,主要表现为心包水肿、心律异常和卵黄囊吸收延迟,毒性出现浓度为0.958μmol/L。结论河豚毒素对斑马鱼具有一定的心脏和肝脏毒性,且其毒性与河豚毒素的浓度相关。

关键词：河豚毒素斑马鱼急性毒性

河豚毒素停搏液对缺血/再灌注心肌细胞钠超载的影响

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中国应用生理学杂志 2009年第1期25卷 23-26页

作者：杨朝坤杨双强潭松涛宜宾市第二人民医院胸心外科四川宜宾644000 重庆医科大学附属第一医院胸心外科重庆416000

目的:观察Na^+通道阻滞剂河豚毒素(TTX)极化心脏停搏液对离体大鼠心肌细胞内游离Na^+浓度([Na^+]_i)的影响。方法:成年Wistar大鼠心脏,用酶解法分离成具有搏动性的单个心室肌细胞悬液,随机分成基础组、STH2组(缺血/再灌注损伤对照组)和... 详细信息

目的:观察Na^+通道阻滞剂河豚毒素(TTX)极化心脏停搏液对离体大鼠心肌细胞内游离Na^+浓度([Na^+]_i)的影响。方法:成年Wistar大鼠心脏,用酶解法分离成具有搏动性的单个心室肌细胞悬液,随机分成基础组、STH2组(缺血/再灌注损伤对照组)和TTX组(实验组),STH2组和TTX组分别应用St.ThomasⅡ号停搏液和TTX停搏液处理,建立模拟缺血/再灌注损伤的停搏/复搏细胞模型,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定各组细胞不同时期的[Na^+]。倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果:TTX组和STH2组细胞复搏后[Na^+];均明显高于基础组(P河豚毒素心脏停搏液较去极化心脏停搏液能减轻心肌细胞Na^+超载和缺血/再灌注损伤。

关键词：心脏停搏液极化停搏河豚毒素钠通道心肌细胞 Na^+

直接稀释/超高效液相色谱-串联质谱法测定河豚鱼与织纹螺中2种河豚毒素

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分析测试学报 2020年第5期39卷 640-645页

作者：王兴龙蔡强诸寅保聪桂文锋任一平浙江清华长三角研究院分析测试中心浙江嘉兴314000 瓦赫宁根大学海洋动物生态组海尔德兰瓦赫宁根6708 WD荷兰上海师范大学环境与地理科学学院上海200233

建立了直接稀释/超高效液相色谱-串联质谱测定河豚鱼与织纹螺中2种河豚毒素TTX和4,9-anh TTX的方法。样品经乙酸-甲醇(1∶99)溶液提取,高速离心,上清液用80%(体积分数)甲醇水溶液稀释和过滤后直接进样分析。以0.5 mmol/L甲酸铵的0.1%甲... 详细信息

建立了直接稀释/超高效液相色谱-串联质谱测定河豚鱼与织纹螺中2种河豚毒素TTX和4,9-anh TTX的方法。样品经乙酸-甲醇(1∶99)溶液提取,高速离心,上清液用80%(体积分数)甲醇水溶液稀释和过滤后直接进样分析。以0.5 mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液为流动相,采用梯度洗脱方式在ACQUITY BEH Amide色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)上分离,以电喷雾离子源正离子模式(ESI+)扫描,多反应监测(MRM)模式采集,外标法定量。TTX和4,9-anhTTX分别在0.5~100μg/L、0.5~50μg/L质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数(r^2)均大于0.99,检出限(LOD,S/N≥3)为100~150μg/kg,定量下限(LOQ,S/N≥10)为300~450μg/kg。在河豚鱼、织纹螺基质中,3个浓度水平下的加标回收率为75.4%~96.8%,日内相对标准偏差(RSD)为2.3%~9.5%,日间RSD为5.3%~9.2%。该方法简便、高效、节约成本,适用于河豚鱼、织纹螺中2种河豚毒素的快速准确检测。

关键词：直接稀释河豚毒素超高效液相色谱-串联质谱河豚鱼织纹螺

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河鲀鱼基质中河豚毒素标准样品的研制

食品安全质量检测学报 2022年第5期13卷 1588-1596页

作者：王伟尹新颖西日尼阿衣·阿里甫徐敦明肖晶曹际娟国家食品安全风险评估中心北京100023 大连民族大学生物技术与资源利用教育部重点实验室大连116600 厦门海关技术中心厦门361013

目的研制基于河鲀鱼基质的河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)定量分析标准样品。方法以野生河鲀鱼肝脏、卵巢、精巢和肌肉组织为基料,利用正己烷脱脂分离处理后,经两次冷冻干燥制备河鲀鱼基质的TTX标准样品,采用液相色谱-串联质谱法进行定性... 详细信息

目的研制基于河鲀鱼基质的河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)定量分析标准样品。方法以野生河鲀鱼肝脏、卵巢、精巢和肌肉组织为基料,利用正己烷脱脂分离处理后,经两次冷冻干燥制备河鲀鱼基质的TTX标准样品,采用液相色谱-串联质谱法进行定性确证。样品分装成500瓶后,进行均匀性、稳定性检验和定值分析。结果经确证该基体标准样品中含有TTX;从基体标准样品中随机抽取15瓶进行均匀性检验,经F检验表明在95%的置信区间范围内样品均匀性良好;长期稳定性考察在0~4℃低温条件下历经了长时间保存,短期稳定性在-80~55℃范围内进行运输条件下的考察,结果表明在考察期间内样品稳定性良好;经国内8家实验室进行协同定值,评定了定值结果的不确定度,该基体标准样品中TTX特性值及不确定度为(5.20±0.03)mg/kg(k=2)。结论该基体标准样品达到国家标准样品的技术要求,可用于对水产品中河豚毒素检测过程的方法验证与质量控制等活动。

关键词：河鲀鱼基质河豚毒素基体标准样品制备

基于AuPtRh纳米酶的比色适体传感器快速检测河豚毒素

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食品安全质量检测学报 2022年第22期13卷 7183-7190页

作者：张金艳姜雯鹏谭欣吴洁杨庆利侯秀丹青岛农业大学食品科学与工程学院青岛266109

目的构建一种基于AuPtRh纳米酶和核酸适配体的比色传感器,用于河豚毒素的可视化、快速、灵敏检测。方法制备基于氧化石墨烯(graphene oxide,GO)修饰的金属网(stainless steel mesh,SSM)作为捕获探针,以及AuPtRh三金属纳米酶连接核酸适配... 详细信息

目的构建一种基于AuPtRh纳米酶和核酸适配体的比色传感器,用于河豚毒素的可视化、快速、灵敏检测。方法制备基于氧化石墨烯(graphene oxide,GO)修饰的金属网(stainless steel mesh,SSM)作为捕获探针,以及AuPtRh三金属纳米酶连接核酸适配体(aptamer)作为信号探针,通过透射电镜、原子力显微镜、X射线衍射仪、分光光度计对制备的AuPtRh纳米酶材料进行表征,考察纳米酶的催化动力学模型,用制备的SSM-GO/AuPtRh-aptamer传感器捕获河豚毒素。结果最大反应速度(V_(max))为4.66×10^(-8) mol/(L·s),米氏常数(K_(m))为0.62 mmol/L,AuPtRh作为纳米酶与H_(2)O_(2)的亲和力要高于单一金属和双金属与H_(2)O_(2)的亲和力。加入河豚毒素后,溶液中的AuPtRh催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)生成氧化TMB(oxTMB),溶液由透明变为蓝色。在优化条件下,河豚毒素在5~500 ng/L范围内与652 nm处的吸光度呈良好的线性关系,线性方程A=0.0011C+0.1523(r^(2)=0.9901),检出限为3 ng/L。以蛤蜊为实际样品,测定加标样品中河豚毒素的含量,加标样品的回收率范围为85.61%~122.66%。结论SSM-GO/AuPtRh-aptamer比色传感器具有操作简单、快速、灵敏度高、成本低的特点,在现场检测领域有较大的潜力。

关键词：核酸适配体纳米酶 AuPtRh 比色法河豚毒素

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河豚毒素利多卡因抗心律失常复方制剂的研究

河豚毒素利多卡因抗心律失常复方制剂的研究

作者：陈永强国家海洋局第三海洋研究所

学位级别：硕士

近二十年来,抗心律失常药物的疗效并不十分理想,一直未能降低严重心律失常引起的死亡率。复方制剂具有增效、使用方便、患者依从性好等优点。河豚毒素为高选择性钠(Na+)通道阻滞剂,具有镇痛、抗心律失常等作用,但其活性高、毒性大、治... 详细信息

近二十年来,抗心律失常药物的疗效并不十分理想,一直未能降低严重心律失常引起的死亡率。复方制剂具有增效、使用方便、患者依从性好等优点。河豚毒素为高选择性钠(Na+)通道阻滞剂,具有镇痛、抗心律失常等作用,但其活性高、毒性大、治疗指数低,严重影响了在临床上的研究应用。利多卡因是临床室性心律失常治疗的首选药物,但单独应用效果欠佳,且会加重心功能不全。因此,研究微量河豚毒素与常用抗心律失常药利多卡因组合物的抗心律失常效果,研制河豚毒素利多卡因复方制剂,以增强抗心律失常疗效,并使河豚毒素毒性限制到最小具有重大应用价值。本文以河豚毒素和利多卡因作为模型药物,采用大鼠乌头碱心律失常模型,研究了河豚毒素利多卡因复方制剂的抗心律失常疗效,结果表明河豚毒素和利多卡因具有较好的抗心律失常协同作用。筛选获得的优选配方(由1μg河豚毒素与5 mg利多卡因组成)与单方相比,具有显著延迟模型鼠心律失常起始时间,缩短心律失常持续时间,完全扭转室性心律失常引起的死亡率等作用,该复方制剂尤其适于致死性室性心律失常的治疗。研究建立了高效液相色谱法测定复方制剂中河豚毒素和利多卡因的含量及有关物质,试验结果表明河豚毒素和利多卡因的线性范围分别为0.10240.24μg?mL-1和0.50105.0324 mg?mL-1,平均回收率分别为100.48%和99.78%,RSD分别为1.13%和0.65%(n=9),表明建立的测定方法简便易行,可以有效控制复方制剂的质量。以河豚毒素和利多卡因的含量、有关物质和制剂的外观作为关键指标,考察不同辅料对复方制剂稳定性的影响,最终选取枸橼酸为助溶剂,右旋糖酐40为稳定剂,甘露醇为赋形剂,制备了河豚毒素利多卡因冻干粉针复方制剂,并进行了影响因素试验和加速稳定性试验,结果表明所制备的复方制剂稳定性良好。

关键词：河豚毒素利多卡因复方制剂抗心律失常

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河豚毒素中毒死亡法医学鉴定1例

中国法医学杂志 2018年第1期33卷 106-107,I0001页

作者：李学闻张翔宇成都市公安局天府新区分局四川成都610000

1案件资料1.1简要案情及现场勘查聂某,男,29岁。2016年9月,被两男性控制并注射药物,后聂某自行拨打120,急救中心电话录音显示：聂某告知自己被人注射麻醉药物,并在说清住址后,呼吸频率加快加深,声音逐渐减弱,进而再无应答。医生到达现场... 详细信息

1案件资料1.1简要案情及现场勘查聂某,男,29岁。2016年9月,被两男性控制并注射药物,后聂某自行拨打120,急救中心电话录音显示：聂某告知自己被人注射麻醉药物,并在说清住址后,呼吸频率加快加深,声音逐渐减弱,进而再无应答。医生到达现场后,确定聂某已死亡。尸体头北脚东左侧卧位蜷缩状位于地面。

关键词：法医病理学河豚毒素中毒

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河豚毒素DNA适配子的筛选与结构分析

中国食品学报 2012年第2期12卷 137-143页

作者：邵碧英高兴杨方陈文炳缪婷玉彭娟福建出入境检验检疫局福州350001 福州大学化学化工学院福州350002

人工合成113个碱基的随机ssDNA文库,以河豚毒素为靶物质,采用SELEX技术进行12轮筛选,测定各轮富集文库与河豚毒素的亲和力,其中第10轮富集文库与河豚毒素的亲和力最高。将第10轮富集文库进行克隆、测序,用DNAMAN软件分析克隆子的一级和... 详细信息

人工合成113个碱基的随机ssDNA文库,以河豚毒素为靶物质,采用SELEX技术进行12轮筛选,测定各轮富集文库与河豚毒素的亲和力,其中第10轮富集文库与河豚毒素的亲和力最高。将第10轮富集文库进行克隆、测序,用DNAMAN软件分析克隆子的一级和二级结构,并测定克隆子与河豚毒素的亲和力。结果表明:与河豚毒素结合力高的DNA适配子经过10轮筛选后得到富集,成功筛选到最高亲和力的DNA适配子G10。

关键词：河豚毒素适配子 SELEX 诱变PCR

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离子色谱法定量检测酒曲发酵液中的河豚毒素

色谱 2011年第2期29卷 187-190页

作者：舒静李柏林欧杰上海海洋大学食品学院上海201306

建立了一种离子色谱定量检测酒曲发酵液中河豚毒素的分析方法。样品经乙腈(含0.1%磷酸)溶液提取和阳离子交换柱净化后,采用离子交换色谱柱分离和紫外检测。在优化的条件下,酒曲样品中的河豚毒素在10～100mg/L内呈良好的线性关系(r2=0.99... 详细信息

建立了一种离子色谱定量检测酒曲发酵液中河豚毒素的分析方法。样品经乙腈(含0.1%磷酸)溶液提取和阳离子交换柱净化后,采用离子交换色谱柱分离和紫外检测。在优化的条件下,酒曲样品中的河豚毒素在10～100mg/L内呈良好的线性关系(r2=0.997),加标回收率为90%～103%,相对标准偏差小于4.9%,检出限(信噪比为3)为1.0 mg/L。结果表明,该方法能达到定量检测的目的。将该方法应用于实际样品的检测,验证了方法的可靠性。河豚毒素初步降解实验发现,随着时间的推移,酒曲中河豚毒素的含量逐渐减少,表明酒曲发酵液对河豚毒素的降解效果显著。

关键词：离子色谱河豚毒素酒曲