检索结果-南通市图书馆

广东农业科学 1993年第5期20卷 6-7,15页

作者：孙玲广东省农科院生物所分子育种室

水稻选育种是一项繁重的工作。近年新兴的基因转化方法能定向改良作物性状,为水稻快速高效育种提供了良好的途径。基因转化即将外源有用基因导入植物细胞中并使其表达。基因转化的方法有多种。

关键词：水稻基因转移土壤根瘤农杆菌

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耐盐芦苇高频遗传转化体系的建立

烟台大学学报（自然科学与工程版） 2024年第1期37卷 69-73页

作者：王美玲韩建玮陈方军尹海波张侠烟台大学生命科学学院山东烟台264005

以耐盐芦苇(Phragmites australis)种子愈伤组织为材料,以根瘤农杆菌EHA105为媒介建立高效的芦苇遗传转化体系。结果表明:在潮霉素浓度为50 mg/L、6-BA浓度为0.8 mg/L时不定芽分化率达到最高。将沉默载体pFGC1008-GRPi通过根瘤农杆菌EHA... 详细信息

以耐盐芦苇(Phragmites australis)种子愈伤组织为材料,以根瘤农杆菌EHA105为媒介建立高效的芦苇遗传转化体系。结果表明:在潮霉素浓度为50 mg/L、6-BA浓度为0.8 mg/L时不定芽分化率达到最高。将沉默载体pFGC1008-GRPi通过根瘤农杆菌EHA105在芦苇愈伤组织中进行遗传转化,共获得8个抗性株系,转化率为3.9%。实时荧光定量PCR检测显示6个株系实现了基因沉默,表明该转化体系高效可用。

关键词：芦苇根瘤农杆菌遗传转化

毛白杨GM107再生体系和遗传转化体系的建立

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分子植物育种 2022年

作者：黄赛高凯苗得雨安新民北京林业大学生物科学与技术学院林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室林木花卉育种生物工程国家林业和草原局重点实验室中国林业科学研究院亚热带林业研究所

本研究以毛白杨优良无性系GM107为试验材料，通过带芽茎段外植体消毒、接种生根获得无菌组培苗，利用无菌苗叶片建立了高频率的再生体系，筛选出最佳叶片分化生芽培养基为MS + TDZ 0.1 mg/L+ NAA 0.1 mg/L + BA 0.5 mg/L，分化生芽率约... 详细信息

本研究以毛白杨优良无性系GM107为试验材料，通过带芽茎段外植体消毒、接种生根获得无菌组培苗，利用无菌苗叶片建立了高频率的再生体系，筛选出最佳叶片分化生芽培养基为MS + TDZ 0.1 mg/L+ NAA 0.1 mg/L + BA 0.5 mg/L，分化生芽率约为90%，每小圆片生芽数可达20个。利用农杆菌介导的叶盘转化法，建立了高效的遗传转化体系，并确定了毛白杨叶片不定芽诱导卡那霉素筛选浓度为100 mg/L，不定芽生根筛选浓度为50 mg/L。Cef 250 mg/L+Tim 250 mg/L +Car 250 mg/L组合可作为筛选培养基的最佳抑菌抗生素组合。在农杆菌侵染前，对GM107小圆片外植体进行7 d预培养为宜。利用已经构建的pCAMBIA2300-VvMYBA1载体，以最佳组合进行遗传转化，获得102个转化株系，通过PCR检测，获得33个阳性株系，阳性植株达到32.35%。本研究为毛白杨基因功能研究提供了高效的遗传转化平台。

关键词：毛白杨再生体系遗传转化根瘤农杆菌

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金属硫蛋白2基因在红花中表达的初步研究

中草药 2016年第12期47卷 2152-2156页

作者：官丽莉陈昱武云云滕孝花杨晶郭咏昕胡人阁李海燕李校堃姜潮吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心吉林长春130118 通化市第一中学吉林通化134001

目的获得转金属硫蛋白2(metallothionein 2,MT2)红花植株,为MT药用蛋白的生产奠定基础。方法采用Nco I/HindⅢ酶切pEASY-oleosin-MT获得oleosin-MT融合基因,将其插入到植物油体高效表达载体pOP上,构建重组质粒pOP-oleosin-MT,进行PCR和... 详细信息

目的获得转金属硫蛋白2(metallothionein 2,MT2)红花植株,为MT药用蛋白的生产奠定基础。方法采用Nco I/HindⅢ酶切pEASY-oleosin-MT获得oleosin-MT融合基因,将其插入到植物油体高效表达载体pOP上,构建重组质粒pOP-oleosin-MT,进行PCR和双酶切鉴定。采用冻融法将重组质粒pOP-oleosin-MT转入根瘤农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化红花,对转MT基因红花植株进行PCR检测及Southern blotting检测。结果成功构建了MT基因的植物油体表达载体pOP-oleosin-MT,获得了3株PCR检测呈阳性的转MT基因红花植株。结论建立了完善的红花再生体系,获得了转MT基因的红花植株。

关键词：红花金属硫蛋白油体 Southern blotting检测根瘤农杆菌重组质粒

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一种快速、高效的大豆农杆菌转化技术

中国农业科学 2008年第3期41卷 661-668页

作者：马丽萍胡正张保缺张辉中国农业科学院作物科学研究所/国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程中国农业科学院作物科学研究所/国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程北京100081

【目的】拟通过改进大豆外植体的组织培养、农杆菌侵染以及植株再生等关键性环节,构建快速、高效的大豆转基因技术体系,解决外源基因难以导入大豆的难题。【方法】成熟大豆种子在环境温度25～28℃、含有1mg·L-16-苄氨基嘌呤的MSB5培养... 详细信息

【目的】拟通过改进大豆外植体的组织培养、农杆菌侵染以及植株再生等关键性环节,构建快速、高效的大豆转基因技术体系,解决外源基因难以导入大豆的难题。【方法】成熟大豆种子在环境温度25～28℃、含有1mg·L-16-苄氨基嘌呤的MSB5培养基上催芽24h。保留大豆下胚轴、胚尖及1片子叶作为外植体,并在相同条件下预培养24h。将外植体转入2/3MSB5液体培养基(1mg·L-16-苄氨基嘌呤+100μmol·L-1乙酰丁香酮+携带有Ti质粒pBI121的根瘤农杆菌GV3101)中,在28℃黑暗环境下侵染21h。侵染后的外植体在28℃黑暗条件下共培养3d。外植体经无菌水处理后移栽到灭菌土中,并在适宜条件下培养。【结果】分子检测结果表明,本研究涉及的新型外植体的再生率高达90%以上(中品661为95%,垦农18为93%,绿75为90%),转化效率明显提高;而利用子叶节和胚尖进行培养获得的外植体的再生率仅50%和70%。此外,本研究涉及的大豆转化体系省去了外植体后期繁琐、耗时的组织培养步骤,再生周期明显缩短。【结论】与前人报道的大豆遗传转化体系技术相比,本研究所使用的方法更加快速、高效,可为农杆菌介导的大豆转基因、突变体构建等基因组学研究提供强有力的技术平台。

关键词：大豆根瘤农杆菌外植体转化

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LT-B转基因烟草植株的建立

西安交通大学学报（医学版） 2004年第5期25卷 425-429页

作者：刘红莉雷霆张铮郑瑾来宝长孔令洪王喆之王一理司履生西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所陕西西安710061 陕西师范大学生命科学院陕西西安710062

目的　构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LT B)基因的植物表达载体 ,并建立LT B转基因烟草植株。方法　用PCR从pMMB6 8扩增LT B编码基因 ,将其克隆于 pUCmT和 pBI12 1载体 ,进而构建植物表达双元载体pBI LTB ,LT B基因由CaMV 35S启... 详细信息

目的　构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LT B)基因的植物表达载体 ,并建立LT B转基因烟草植株。方法　用PCR从pMMB6 8扩增LT B编码基因 ,将其克隆于 pUCmT和 pBI12 1载体 ,进而构建植物表达双元载体pBI LTB ,LT B基因由CaMV 35S启动子控制表达 ;将pBI LTB用电穿孔法导入根瘤农杆菌LBA4 4 0 4 ;采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 ,获得转基因烟草植株 ;用PCR、Southern、Westernblot和ELISA检测转基因植株。结果　经PCR及Southern杂交分析 ,共发现 12株烟草的基因组中有LT B基因整合 ;Westernblot和ELISA分析表明有 9株转基因烟草能有效表达LT B蛋白 ,其表达量为烟草叶片总可溶蛋白的 3.36～ 10 .5 6 μg·g-1TSP。结论　建立的LT B转基因烟草植株可成功表达LT B ,并具有五聚体结构 ,为进一步生产预防婴幼儿大肠杆菌腹泻可食用疫苗及黏膜免疫佐剂奠定了基础。

关键词：大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位转基因烟草植物疫苗根瘤农杆菌

拟南芥DREB2A基因的克隆及植物荧光表达载体的构建

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华北农学报 2008年第3期23卷 20-22页

作者：段红英丁笑生河南师范大学生命科学学院河南新乡453007

以拟南芥幼苗总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增到DREB2A基因,并将其克隆到植物表达载体pCAM-BIA1304中CaMV 35 S启动子与poly(A)终止子之间。酶切鉴定及测序列结果都表明,成功构建了植物表达载体pCAMBIA1304-DREB2A。另外,获得了携带DRE... 详细信息

以拟南芥幼苗总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增到DREB2A基因,并将其克隆到植物表达载体pCAM-BIA1304中CaMV 35 S启动子与poly(A)终止子之间。酶切鉴定及测序列结果都表明,成功构建了植物表达载体pCAMBIA1304-DREB2A。另外,获得了携带DREB2A基因的根瘤农杆菌菌株,为以后转基因植物工作奠定了基础。

关键词：拟南芥 DREB2A RT-PCR 植物表达载体根瘤农杆菌

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A281菌系对大豆属致瘤效果的初步研究

大豆科学 1989年第4期 383-387页

作者：雷勃钧王连铮尹光初卢翠华钱华王树林周思君张开旺王岚邵启全李安生蒋兴邨中国科学院遗传研究所黑龙江省农业科学院大豆研究所

近两年我们采用一个经过改造,致瘤能力增强的农杆菌新菌系A281,对原来连续几年实验的易结瘤和不易结瘤的大豆基因型进行了致瘤能力和效果的实验。用A281,C58,T37三个菌系对易结瘤的20份大豆基因型进行了致瘤能力的比较;用A281菌系对不... 详细信息

近两年我们采用一个经过改造,致瘤能力增强的农杆菌新菌系A281,对原来连续几年实验的易结瘤和不易结瘤的大豆基因型进行了致瘤能力和效果的实验。用A281,C58,T37三个菌系对易结瘤的20份大豆基因型进行了致瘤能力的比较;用A281菌系对不易结瘤的88份大豆基因型进行了致瘤效果的观察,使67份不易结瘤的基因型也可结瘤。而对照组只有3份基因型可结瘤。实验证明:农杆菌新菌系A281对易结瘤大豆基因型不但和C58,T37具有相同的致瘤率,并且比其具有更强的致瘤能力。对不易结瘤的大豆基因型,产生了致瘤效果。这使一些不能结瘤的优良大豆类型,通过Ti质粒进行遗传改良成为可能。

关键词：根瘤农杆菌质粒大豆载体受体

HPV-16L1植物表达载体的构建及HPV-16L1在转基因烟草中表达的鉴定

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生物工程学报 2004年第6期20卷 827-831页

作者：刘红莉陈宏伟李文生雷霆王喆之王一理司履生西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所陕西师范大学生命科学院西安710062

利用PCR技术克隆人乳头瘤病毒HPV 16L1蛋白编码基因 ,将其重组于pUCmT和pBI12 1中 ,构建含HPV 16L1基因的植物双元表达载体pBI L1,L1基因由CaMV 35S启动子控制表达。采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 (NicotianatobacumL .) ,... 详细信息

利用PCR技术克隆人乳头瘤病毒HPV 16L1蛋白编码基因 ,将其重组于pUCmT和pBI12 1中 ,构建含HPV 16L1基因的植物双元表达载体pBI L1,L1基因由CaMV 35S启动子控制表达。采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 (NicotianatobacumL .) ,获得HPV 16L1转基因烟草植株。经PCR及Southern杂交分析 ,HPV 16L1基因整合到烟草基因组中 ;Westernblot和ELISA分析检测显示转基因烟草叶片蛋白可与HPV 16L1单克隆抗体特异性反应 ,且定位于 5 5kD处 ,其最高表达量占烟草叶片总可溶蛋白的 0 0 76 %。小鼠红细胞凝集试验 (HA)及小鼠红细胞凝集抑制试验 (HAI)显示转基因烟草叶片蛋白可引起小鼠红细胞凝集。结果表明已成功地构建了HPV 16L1的植物双元表达载体 ,并证实了利用转基因烟草植物能够表达出HPV 16L1蛋白。

关键词：人乳头瘤病毒病毒样颗粒转基因烟草植物疫苗根瘤农杆菌

人干扰素基因植物表达载体的构建及其在人参愈伤组织细胞中的表达

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中国免疫学杂志 2006年第9期22卷 852-855页

作者：任琦盛军任志霞吉林大学生命科学学院生物药学系长春130023 长春生物制品研究所长春130062

目的:利用组织培养人参愈伤组织细胞表达人干扰素,探讨用植物细胞表达人类基因的可行性。方法:用PCR从pBV889扩增人干扰素α2b(hIFN-α2b)编码基因,将其克隆于pMD18-T载体和pBI121,进而构建植物细胞表达载体pBIFN。用冻融法将pBIFN导入... 详细信息

目的:利用组织培养人参愈伤组织细胞表达人干扰素,探讨用植物细胞表达人类基因的可行性。方法:用PCR从pBV889扩增人干扰素α2b(hIFN-α2b)编码基因,将其克隆于pMD18-T载体和pBI121,进而构建植物细胞表达载体pBIFN。用冻融法将pBIFN导入根瘤农杆菌LBA4404,经卡那霉素和利福霉素筛选后利用农杆菌介导的转化法将hIFN-α2基因导入人参愈伤组织细胞。经G418筛选,形成阳性细胞。用PCR、RT-PCR、Western blot和WISH/VSV系统检测转基因组织。结果:经PCR检测表明hIFN-α2b基因已成功整合到人参愈伤组织细胞基因组中。RT-PCR证明存在hIFN-α2b基因的转录产物。Western blot分析表明转基因人参愈伤组织细胞能有效表达hIFN-α2b蛋白。WISH/VSV系统检测分析表明表达的hIFN-α2b具有生物学活性。结论:本研究利用转基因人参愈伤组织细胞成功地表达了人干扰素,为进一步提高口服干扰素的疗效打下基础。

关键词：人干扰素α2b 人参愈伤组织细胞转基因根瘤农杆菌