HPV-16L1植物表达载体的构建及HPV-16L1在转基因烟草中表达的鉴定

作     者：刘红莉 陈宏伟 李文生 雷霆 王喆之 王一理 司履生 

作者机构：西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所 陕西师范大学生命科学院西安710062 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2004年第20卷第6期

页      面：827-831页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助 (No .3 0 0 70 848)~~ 

主　　题：人乳头瘤病毒 病毒样颗粒 转基因烟草 植物疫苗 根瘤农杆菌 

摘      要：利用PCR技术克隆人乳头瘤病毒HPV 16L1蛋白编码基因 ,将其重组于pUCmT和pBI12 1中 ,构建含HPV 16L1基因的植物双元表达载体pBI L1,L1基因由CaMV 35S启动子控制表达。采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 (NicotianatobacumL .) ,获得HPV 16L1转基因烟草植株。经PCR及Southern杂交分析 ,HPV 16L1基因整合到烟草基因组中 ;Westernblot和ELISA分析检测显示转基因烟草叶片蛋白可与HPV 16L1单克隆抗体特异性反应 ,且定位于 5 5kD处 ,其最高表达量占烟草叶片总可溶蛋白的 0 0 76 %。小鼠红细胞凝集试验 (HA)及小鼠红细胞凝集抑制试验 (HAI)显示转基因烟草叶片蛋白可引起小鼠红细胞凝集。结果表明已成功地构建了HPV 16L1的植物双元表达载体 ,并证实了利用转基因烟草植物能够表达出HPV 16L1蛋白 。