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人单链白细胞介素12基因在果蝇细胞中的表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第2期33卷 243-245页

作者：金莉齐旭来宝长司履生王一理上海市第一人民医院中心实验室!上海200080 西安交通大学医学院!西安710061

用PCR方法扩增不含信号肽序列的hscIL 12基因 ,并装载到果蝇表达质粒 pMT/Bip/V5中 ,将其转化黑腹果蝇细胞S2中进行分泌表达 ,以淋巴细胞增殖实验检测表达的hscIL 12的生物学活性 ,结果表明hscIL 12可促进淋巴细胞增殖 ,呈剂量依赖性 (P... 详细信息

用PCR方法扩增不含信号肽序列的hscIL 12基因 ,并装载到果蝇表达质粒 pMT/Bip/V5中 ,将其转化黑腹果蝇细胞S2中进行分泌表达 ,以淋巴细胞增殖实验检测表达的hscIL 12的生物学活性 ,结果表明hscIL 12可促进淋巴细胞增殖 ,呈剂量依赖性 (P <0 .0 5 ) ,提示在果蝇系统中表达的hscIL 12具有与天然IL 12相同的生物学活性 ,有良好的研究和临床应用前景

关键词：白细胞介素12 生物活性基因表达

型特异性、构象依赖性HPV16 L1单克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第12期25卷 1133-1135页

作者：闫小飞徐阳郑瑾来宝长王一理西安交通大学第一附属医院肿瘤研究中心陕西西安710061 西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所陕西西安710061

目的:研制具有型特异性和构象依赖性的人乳头瘤病毒16主衣壳L1蛋白(HPV16 L1)单克隆抗体(mAb)。方法:利用昆虫-杆状病毒系统表达有生物活性的HPV16 L1蛋白。非变性条件下纯化HPV16 L1蛋白,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠。末次加强免疫后取其... 详细信息

目的:研制具有型特异性和构象依赖性的人乳头瘤病毒16主衣壳L1蛋白(HPV16 L1)单克隆抗体(mAb)。方法:利用昆虫-杆状病毒系统表达有生物活性的HPV16 L1蛋白。非变性条件下纯化HPV16 L1蛋白,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠。末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,应用间接ELISA筛选阳性克隆。非变性Western blot鉴定mAb的型特异性和构象依赖性,细胞免疫组化确定抗体的型特异性。间接ELISA法测定杂交瘤分泌上清及腹水中抗体效价。mAb亚类试剂盒鉴定mAb亚类。结果:获得1株稳定分泌具有型特异性和构象依赖性的HPV16 L1抗体的杂交瘤细胞株,命名为2E3。2E3杂交瘤细胞株细胞培养上清中抗体效价为1∶800;小鼠腹水中抗体效价为1∶12800。亚类鉴定结果为IgG1κ。Western blot及细胞免疫组化分析结果显示,2E3mAb具有型特异性和构象依赖性,只与非变性的HPV16L1蛋白发生反应,不与HPV18L1、HPV58L1、HPV11L1产生交叉反应。结论:成功制备了型特异性HPV16 L1 mAb,为进一步研究HPV16 L1的抗原表位奠定了基础。

关键词： HPV16 L1 单克隆抗体

pcDNA3/HPV16 E6真核表达质粒的构建及裸DNA注射动物实验观察

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中华微生物学和免疫学杂志 1998年第5期18卷 406-409页

作者：许有元王一理司履生西安医科大学免疫病理学研究室

目的探讨ＨＰＶ１６Ｅ６基因ＤＮＡ诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法利用基因工程技术构建了ＨＰＶ１６Ｅ６真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／Ｅ６，脂质体法转染Ｃｏｓ７细胞，肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫组化技术检测抗体产生及... 详细信息

目的探讨ＨＰＶ１６Ｅ６基因ＤＮＡ诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法利用基因工程技术构建了ＨＰＶ１６Ｅ６真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／Ｅ６，脂质体法转染Ｃｏｓ７细胞，肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫组化技术检测抗体产生及抗原表达。结果被转染的Ｃｏｓ７细胞表达ＨＰＶ１６Ｅ６蛋白免疫小鼠产生抗ＨＰＶ１６Ｅ６抗体。结论这一结果为ＨＰＶ１６相关宫颈癌治疗性ＤＮＡ疫苗的研制提供了资料。

关键词： DNA疫苗乳头状瘤病毒子宫肿瘤真核细胞质粒

HPV16L1与共刺激分子B7-2裸DNA共免疫小鼠后细胞免疫反应原位观察

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西安交通大学学报（医学版） 2004年第3期25卷 310-311页

作者：蒋小英王一理司履生西安交通大学生命科学与技术学院免疫病理研究室陕西西安710061

目的　原位研究PRC/CMVL1与B7 2裸DNA经肌肉免疫小鼠后的细胞免疫反应 ,尤其是细胞毒性T细胞(CTL)反应。方法　①取雌性C5 7BL/ 6小鼠 15只 ,随机分为 3组 :PRC/CMVL1质粒免疫组、PRC/CMVL1质粒和PLXHD .mB7 2质粒共免疫组 ;同时设空质... 详细信息

目的　原位研究PRC/CMVL1与B7 2裸DNA经肌肉免疫小鼠后的细胞免疫反应 ,尤其是细胞毒性T细胞(CTL)反应。方法　①取雌性C5 7BL/ 6小鼠 15只 ,随机分为 3组 :PRC/CMVL1质粒免疫组、PRC/CMVL1质粒和PLXHD .mB7 2质粒共免疫组 ;同时设空质粒对照 ,经小鼠股四头肌肌内注射 ,共免疫 3次 ,每次间隔 3周。②免疫 9周后取脾脏 ,中性福尔马林固定、石蜡包埋 ,常规切片 ,以地高辛标记的IFN γ及Perforin寡核苷酸为探针 ,原位杂交技术检测试验小鼠脾脏的IFN γ及Perforin阳性细胞。结果　PRC/CMVL1质粒免疫组可见脾脏增大 ,淋巴小结增多 ,T细胞区及淋巴滤泡明显活化 ;与PLXHD .mB7 2质粒共免疫组变化更为明显 ;PLXHD .mB7 2质粒共免疫组IFN γ和Perforin阳性细胞较PRC/CMVL1单独免疫组为多。结论　PRC/CMVL1裸DNA疫苗免疫可诱发明显的细胞免疫反应 ,PLXHD .mB7 2质粒共免疫可提高细胞免疫水平。

关键词： cDNA免疫细胞免疫 HPV16

应用重组PCR技术构建人单链白细胞介素12融合基因

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免疫学杂志 2001年第1期17卷 22-26页

作者：张梅司履生王一理西安交通大学第一医院血液病研究室陕西西安710061 西安交通大学基础医学院免疫病理学研究室陕西西安710061

目的构建人单链白细胞介素 12 (hsc IL- 12 )融合基因并在真核细胞中进行表达 ,为进一步研究 hsc IL- 12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法应用重组 PCR技术将 h IL - 12 p40和 p35亚单位两段编码序列的 c DNA通过一疏水性多肽接头 (G... 详细信息

目的构建人单链白细胞介素 12 (hsc IL- 12 )融合基因并在真核细胞中进行表达 ,为进一步研究 hsc IL- 12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法应用重组 PCR技术将 h IL - 12 p40和 p35亚单位两段编码序列的 c DNA通过一疏水性多肽接头 (Gly4Ser) 3碱基序列进行前后拼接 (IL- 12 p40 -多肽接头 - p35 ) ,构建 hsc IL- 12融合基因 ,并进行核苷酸序列测定 ,进一步将 hsc IL - 12融合基因插入 pc DNA3.1真核表达载体中 ,转染 COS- 7细胞表达 hsc IL - 12融合蛋白 ,并行 Western blot分析。结果该融合基因经 DNA序列分析表明 :p40、p35、linker的连接顺序、方向及序列完全正确 ,融合基因可在 COS- 7细胞中表达hsc IL- 12融合蛋白。Western blot显示该融合蛋白分子量为 70 0 0 0 u,可与鼠抗人 IL- 12 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论重组 PCR技术是十分有效。

关键词：重组PCR 人白细胞介素12 人单链白细胞介素融合基因

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组蛋白乙酰化及其与肿瘤的关系

中华病理学杂志 2002年第3期31卷 263-265页

作者：刘鹏王一理司履生西安交通大学生命科学与技术学院免疫病理研究室 710061

真核细胞中染色质的基本单位核小体，由核心组蛋白（H2A、H2B、H3和H4）、HI及DNA组成。核小体组装过程中，（H3/H4）_2四聚体首先与DNA结合，随后两个H2A/H2B异二聚体，结合到（H3/H4）_2结合处的5'和3 'DNA上形成核小体。

关键词：组蛋白乙酰化肿瘤相关性组蛋白乙酰基转移酶 HATs 组蛋白去乙酰化酶 HDACs

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磷酸化、乙酰化修饰对p53功能的影响

中华病理学杂志 2002年第6期31卷 551-553页

作者：李瑶琛孔令洪王一理司履生西安交通大学生命学院免疫病理研究室 710061

在人类基因组解码之后，将是对基因所编码蛋白质的研究。收白质在成熟的过程中乃至成熟之后需要经过一毓的修饰如甲基化、磷酸化、乙酰化、糖基化等使蛋白质的构象发生一定的变化，方可执行特定的功能。如组蛋白的乙酰化、一些转录因子... 详细信息

在人类基因组解码之后，将是对基因所编码蛋白质的研究。收白质在成熟的过程中乃至成熟之后需要经过一毓的修饰如甲基化、磷酸化、乙酰化、糖基化等使蛋白质的构象发生一定的变化，方可执行特定的功能。如组蛋白的乙酰化、一些转录因子的磷酸化或乙酰化等~[1]。因此，仅仅从基因的角度来研究并预测蛋白质的功能是远远不够的p53是参与细胞周期调节、控制细胞增生、凋亡的一个中枢性调节分子，一直深受细胞生物学家和肿瘤生物学家的关注。以往的大量研究表明人类肿瘤半数以上存在p53基因突变，认为p53基因突变失活是导致这些细胞癌变的根本所在。但是实验发现，尚有众多人类肿瘤中没有p53基因突变，却有p53功能性灭活。研究还发现：转录因子p53同其他蛋白质一样，翻译后有极为丰富的加工与修饰，p53的这种修饰是调节p53活性与稳定性的重要机制~[2]。可见，翻译后修饰对p53功能至关重要，更可能与某些肿瘤的发生密切相关。因此，对p53翻译后修饰与功能的关系作一综述。

关键词：磷酸化乙酰化修饰 p53 功能结核活化

采用杆状病毒表达系统表达EGFP标记的HPV-16L1病毒样颗粒

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第3期27卷 207-212页

作者：杨军王一理司履生西安交通大学医学院第二附属医院病理科 710004 西安交通大学医学院生物医学信息工程教育部重点实验室生命科学与技术学院癌症研究所710061

目的制备增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的人乳头状瘤病毒16型（HPV-16）病毒样颗粒，为研究HPV-16L1的生物学活性提供一种方法。方法采用Xbal＋HindⅢ双酶切pGEM-T-HPV-16质粒，获得HPV-16L1基因片段，用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP... 详细信息

目的制备增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的人乳头状瘤病毒16型（HPV-16）病毒样颗粒，为研究HPV-16L1的生物学活性提供一种方法。方法采用Xbal＋HindⅢ双酶切pGEM-T-HPV-16质粒，获得HPV-16L1基因片段，用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因片段，NcoⅠ＋SalⅠ双酶切，依次克隆入杆状病毒转移载体，获得重组pFB-EGFP-HPV-16L1转移载体；在DHIOBac内通过转座子Tn7的介导，获得重组Ac-EGFP-HPV-16L1杆状病毒；感染Sf-9昆虫细胞；荧光显微镜、激光共聚焦显微镜和免疫组织化学法确定融合蛋白的荧光特性及细胞学定位；利用Western blot分析融合蛋白的表达；电子显微镜观察病毒样颗粒（VLP）的形成；利用小鼠红细胞凝集试验及凝集抑制试验分析生物学活性。结果重组pFB-EGFP-HPV-16L1辅助表达载体及重组杆状病毒中EGFP-HPV-16L1融合基因构建正确；荧光显微镜和激光共聚焦显微镜证实感染重组杆状病毒AC-EGFP-HPV-16L1的Sf-9细胞核内可见耀眼的绿色荧光，免疫组织化学证实EGFP-HPV-16L1融合蛋白主要位于Sf-9细胞核内；Western blot证实EGFP-HPV-16L1融合蛋白相对分子质量（Mr）为83×10^3，与理论值一致；透射电子显微镜观察发现感染重组Ac-EGFP-HPV-16L1杆状病毒的Sf-9细胞核内和裂解上清内均可发现大量形态均一的vIJP形成；小鼠红细胞凝集试验证实EGFP-HPV-16L1融合蛋白可引起小鼠红细胞凝集，且可被抗HPV-16L1单克隆抗体抑制。结论杆状病毒表达系统表达的EGFP标记的HPV-16L1蛋白既能自组装成病毒样颗粒、具有构象依赖性生物学活性，又能发射易于检测的绿色荧光，有可能用于HPV-16L1蛋白的生物行为研究，并实时可视化追踪其在宿主细胞内的转运过程。

关键词：人乳头状瘤病毒16型重组杆状病毒增强型绿色荧光蛋白病毒样颗粒融合蛋白

人B7-2(CD86)IgV+C段高效原核表达及活性测定

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第2期22卷 131-133页

作者：闫晓彩司履生王一理来宝长耿宜萍西安交通大学第一医院儿科西安交通大学医学院免疫病理研究室

目的　克隆、表达B7 2 (IgV +C)并进行体外功能测定。方法　用聚合酶链反应 (PCR)技术从B7 2cDNA中克隆B7 2 (IgV +C) ,在此基础上构建表达B7 2 (IgV +C)的原核表达载体pGEX 4T 3 hB7 2 (IgV +C) ;SDS PAGE检测蛋白表达 ,蛋白经变性、... 详细信息

目的　克隆、表达B7 2 (IgV +C)并进行体外功能测定。方法　用聚合酶链反应 (PCR)技术从B7 2cDNA中克隆B7 2 (IgV +C) ,在此基础上构建表达B7 2 (IgV +C)的原核表达载体pGEX 4T 3 hB7 2 (IgV +C) ;SDS PAGE检测蛋白表达 ,蛋白经变性、复性后在体外协同抗CD3单抗刺激人T细胞 ,3 H TdR掺入法检测T细胞的活化程度。结果　在原核表达载体中成功地克隆了B7 2 (IgV +C) ,SDS PAGE表明在相对分子质量 (Mr) 5 5× 10 3 处有hB7 2 (IgV +C) GST融合蛋白的高效表达 ,其表达量占菌体总蛋白的 33%。体外实验证明 ,此融合蛋白可协同抗CD3单抗刺激人T细胞活化。结论重组蛋白B7 2 (IgV +C)在第一信号存在下可活化T细胞。

关键词： B7-2分子共刺激基因表达融合蛋白聚合酶链反应原核表达 T细胞