LT-B转基因烟草植株的建立

作     者：刘红莉 雷霆 张铮 郑瑾 来宝长 孔令洪 王喆之 王一理 司履生 

作者机构：西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所陕西西安710061 陕西师范大学生命科学院陕西西安710062 

出 版 物：《西安交通大学学报（医学版）》 (Journal of Xi’an Jiaotong University（Medical Sciences）)

年 卷 期：2004年第25卷第5期

页      面：425-429页

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100103[医学-病原生物学] 071007[理学-遗传学] 0703[理学-化学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助 (No .30 0 70 848) 

主　　题：大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 转基因烟草 植物疫苗 根瘤农杆菌 

摘      要：目的 构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LT B)基因的植物表达载体 ,并建立LT B转基因烟草植株。方法 用PCR从pMMB6 8扩增LT B编码基因 ,将其克隆于 pUCmT和 pBI12 1载体 ,进而构建植物表达双元载体pBI LTB ,LT B基因由CaMV 35S启动子控制表达 ;将pBI LTB用电穿孔法导入根瘤农杆菌LBA4 4 0 4 ;采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 ,获得转基因烟草植株 ;用PCR、Southern、Westernblot和ELISA检测转基因植株。结果 经PCR及Southern杂交分析 ,共发现 12株烟草的基因组中有LT B基因整合 ;Westernblot和ELISA分析表明有 9株转基因烟草能有效表达LT B蛋白 ,其表达量为烟草叶片总可溶蛋白的 3.36～ 10 .5 6 μg·g-1TSP。结论 建立的LT B转基因烟草植株可成功表达LT B ,并具有五聚体结构 ,为进一步生产预防婴幼儿大肠杆菌腹泻可食用疫苗及黏膜免疫佐剂奠定了基础。