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抑胶素对大鼠C6胶质瘤细胞血管内皮生长因子的抑制作用

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吉林大学学报（医学版） 2007年第6期33卷 989-991,F0002页

作者：崔俐林卫红杨弋徐丹王绍张淑琴吉林大学第一医院神经内科吉林长春130021 长春大学医院内科吉林长春130022 吉林大学基础医学院生理学教研室吉林长春130021

目的:探讨抑胶素对大鼠C6胶质瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)的抑制作用。方法:采用单层贴壁培养法对大鼠C6脑胶质瘤细胞株进行培养,并用2、4、8和16 ng.L-1抑胶素作用72 h,免疫组化法观察抑胶素对C6胶质瘤细胞VEGF的抑制作用。结果:VEG... 详细信息

目的:探讨抑胶素对大鼠C6胶质瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)的抑制作用。方法:采用单层贴壁培养法对大鼠C6脑胶质瘤细胞株进行培养,并用2、4、8和16 ng.L-1抑胶素作用72 h,免疫组化法观察抑胶素对C6胶质瘤细胞VEGF的抑制作用。结果:VEGF表达阳性的细胞绝大部分表现为细胞浆和(或)细胞核染成黄褐色。PBS对照组的C6胶质瘤细胞VEGF在细胞浆中表达明显,经不同浓度的抑胶素处理72 h后,肿瘤内VEGF阳性细胞密度较PBS对照组下降(P抑胶素作用后C6细胞中VEGF灰度值不同:2 ng.L-1抑胶素组(182.3±5.7)与PBS对照组(185.6±6.5)比较差异有显著性(P抑胶素组及顺铂处理组细胞VEGF灰度值(分别为176.8±5.4、169.8±4.1、162.6±2.9和167.3±3.5)与PBS对照组比较差异有显著性(P抑胶素对大鼠C6胶质瘤细胞VEGF有抑制作用。

关键词：抑胶素神经胶质瘤内皮生长因子

抑胶素对大鼠脑胶质瘤增殖细胞核抗原表达的影响

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中国老年学杂志 2009年第20期29卷 2631-2632页

作者：姜慧轶林卫红马涤辉刘仕成崔俐吉林大学第一医院儿科吉林长春130021 吉林大学第一医院神经内科吉林长春130021

目的研究抑胶素对大鼠脑胶质瘤增殖细胞核抗原的影响。方法采用鼠脑立体定向的方法建立大鼠脑胶质瘤动物模型并进行分组:抑胶素不同浓度实验组(Ⅰ:8μg/kg;Ⅱ:16μg/kg;Ⅲ:32μg/kg;Ⅳ:64μg/kg)、对照组,于治疗14d后计算瘤体变化,应用... 详细信息

目的研究抑胶素对大鼠脑胶质瘤增殖细胞核抗原的影响。方法采用鼠脑立体定向的方法建立大鼠脑胶质瘤动物模型并进行分组:抑胶素不同浓度实验组(Ⅰ:8μg/kg;Ⅱ:16μg/kg;Ⅲ:32μg/kg;Ⅳ:64μg/kg)、对照组,于治疗14d后计算瘤体变化,应用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,观察瘤细胞增殖变化情况。结果抑胶素Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组对C6脑胶质瘤细胞有显著抑制作用,其瘤体积及抑瘤率与对照组比较有统计学差异(P抑胶素能够使胶质瘤PCNA指数下降,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组PCNA指数(%)与对照组相比较有统计学差异(P抑胶素能够抑制大鼠脑胶质瘤体内生长。其机制之一可能与胶质瘤内PCNA表达,使肿瘤细胞增殖水平下降有关。

关键词：抑胶素脑胶质瘤增殖细胞核抗原

抑胶素对C6脑胶质瘤细胞缝隙连接蛋白作用的体外实验研究

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中风与神经疾病杂志 2005年第4期22卷 309-311页

作者：林卫红崔俐马涤辉谢晓娜姜慧轶王绍吉林大学第一医院神经内科吉林长春130021 吉林大学第一医院内分泌科吉林长春130021 吉林大学第一医院心理科吉林长春130021 吉林大学基础医学院生理教研室吉林长春130021

目的探讨抑胶素对C6脑胶质瘤细胞缝隙连接蛋白的影响。方法体外培养C6脑胶质瘤细胞,通过GFAP鉴定,应用免疫组化方法检测应用抑胶素前后C6脑胶质瘤细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达变化,并与临床上常用的抗肿瘤药物顺铂进行比较分析。结... 详细信息

目的探讨抑胶素对C6脑胶质瘤细胞缝隙连接蛋白的影响。方法体外培养C6脑胶质瘤细胞,通过GFAP鉴定,应用免疫组化方法检测应用抑胶素前后C6脑胶质瘤细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达变化,并与临床上常用的抗肿瘤药物顺铂进行比较分析。结果抑胶素能够增加体外培养的C6脑胶质瘤细胞Cx43的表达,并呈剂量依赖性。结论抑胶素抑制脑胶质瘤细胞生长的作用机制之一可能与影响肿瘤细胞间的缝隙连接蛋白功能有关。

关键词：抑胶素胶质瘤细胞缝隙连接蛋白

抑胶素对大鼠脑胶质瘤细胞血管内皮生长因子作用的体内试验

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中风与神经疾病杂志 2006年第4期23卷 413-415页

作者：崔俐林卫红孙艳梅徐丹吉林大学第一医院神经内科吉林长春130021 沈阳军区81疗养院辽宁沈阳125105 长春大学医院吉林长春130000

目的研究抑胶素对大鼠脑胶质瘤血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法采用脑立体定向术,在Wistar大鼠脑尾状核接种C6细胞,应用免疫组织化学方法检测应用抑胶素前后对鼠脑胶质瘤血管内皮生长因子的影响。结果经抑胶素治疗后可见肿瘤内血管... 详细信息

目的研究抑胶素对大鼠脑胶质瘤血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法采用脑立体定向术,在Wistar大鼠脑尾状核接种C6细胞,应用免疫组织化学方法检测应用抑胶素前后对鼠脑胶质瘤血管内皮生长因子的影响。结果经抑胶素治疗后可见肿瘤内血管内皮生长因子阳性细胞密度下降,随浓度增加阳性率呈下降趋势。实验组(抑胶素浓度32μg/kg)较对照组表达降低(P抑胶素浓度64μg/kg)与对照组比较有显著性差异(P抑胶素浓度分别为8μg/kg及16μg/kg)与对照组相比较,无统计学意义;而顺铂组瘤体内VEGF与实验组比较无显著性差异(P>0.05)。结论抑胶素对肿瘤细胞的抑制作用可能通过血管内皮生长因子而起作用,但这种抑制作用与抑胶素本身的浓度有关,高浓度抑胶素抑制作用强。

关键词：抑胶素脑胶质瘤血管内皮生长因子

抑胶素对C6胶质瘤细胞p16蛋白表达的影响

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中风与神经疾病杂志 2005年第6期22卷 515-516页

作者：谢晓娜马涤辉林卫红崔俐王绍吉林大学第一医院内分泌科吉林长春130021 吉林大学第一医院神经内科吉林长春130021 吉林大学白求恩医学部基础医学院生理教研室吉林长春130021

目的探讨不同浓度的抑胶素对C6胶质瘤细胞p16蛋白表达的影响。方法体外培养C6胶质瘤细胞,应用顺铂作为对照,通过免疫细胞化学染色法检测不同浓度的抑胶素作用后细胞周期负性调控基因p16在不同时问点的蛋白表达。结果 C6胶质瘤细胞经过... 详细信息

目的探讨不同浓度的抑胶素对C6胶质瘤细胞p16蛋白表达的影响。方法体外培养C6胶质瘤细胞,应用顺铂作为对照,通过免疫细胞化学染色法检测不同浓度的抑胶素作用后细胞周期负性调控基因p16在不同时问点的蛋白表达。结果 C6胶质瘤细胞经过抑胶素处理后,随着抑胶素浓度的增加,p16蛋白的表达也明显增强。结论抑胶素能够抑制C6胶质瘤细胞的增殖,并且具有改变肿瘤细胞增殖周期的作用。

关键词：抑胶素 C6胶质瘤细胞 p16蛋白

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抑胶素对C6脑胶质瘤细胞形态学影响的研究

中国实验诊断学 2010年第7期14卷 1056-1058页

作者：林卫红谢晓娜崔俐张伯民王绍吉林大学第一医院神经内科吉林长春130021 吉林大学中日联谊医院心外科吉林大学基础医学院生理学教研室

目的探讨不同浓度的抑胶素对C6脑胶质瘤细胞形态学的影响。方法体外培养C6脑胶质瘤细胞,通过光镜及电镜技术观察不同浓度的抑胶素对C6脑胶质瘤细胞形态的影响。结果倒置显微镜及图像分析议下观察各组细胞形态变化:不同浓度抑胶素处理组... 详细信息

目的探讨不同浓度的抑胶素对C6脑胶质瘤细胞形态学的影响。方法体外培养C6脑胶质瘤细胞,通过光镜及电镜技术观察不同浓度的抑胶素对C6脑胶质瘤细胞形态的影响。结果倒置显微镜及图像分析议下观察各组细胞形态变化:不同浓度抑胶素处理组可见细胞大小、形态趋向一致,有的接近正常胶质细胞,并且细胞数逐渐减少,随着抑胶素浓度的增大此种改变越明显。HE染色后可见抑胶素处理组细胞肿胀,坏死,胞核为很深的蓝色或消失,细胞膜的连续性破坏。电镜结果显示应用抑胶素后肿瘤细胞出现凋亡及坏死改变,并且随着抑胶素浓度的升高而此种改变越明显。结论抑胶素能够促使C6脑胶质瘤细胞发生凋亡及坏死,同时可使肿瘤细胞的形态向正常细胞转化,提示抑胶素具有抑制脑胶质瘤细胞生长的作用。

关键词：抑胶素脑胶质瘤细胞形态学

抑胶素对大鼠C6胶质瘤细胞抑制作用的体内实验研究

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抑胶素对大鼠C6胶质瘤细胞抑制作用的体内实验研究

作者：姜慧轶吉林大学

学位级别：硕士

神经胶质瘤是发生于神经外胚层的肿瘤，是颅内肿瘤中最常见的一种。因其侵袭性生长的特性，手术难以完全切除，术后复发率高，至今术后化疗仍是很重要的方法。目前，胶质瘤的常规化疗药物，易导致中枢神经系统甚至全身的毒副作用，且不... 详细信息

神经胶质瘤是发生于神经外胚层的肿瘤，是颅内肿瘤中最常见的一种。因其侵袭性生长的特性，手术难以完全切除，术后复发率高，至今术后化疗仍是很重要的方法。目前，胶质瘤的常规化疗药物，易导致中枢神经系统甚至全身的毒副作用，且不能有效通过血脑屏障，使它们的应用受到限制，故寻求一种高效低毒、特异性高、不易发生耐药的抗胶质瘤药物有重要意义。抑胶素作为一种特异性氯离子通道阻滞剂，是一种蝎毒素多肽，其有效成分是氯毒素（Chlorotoxin）。它能特异性与胶质瘤细胞表面的氯离子通道结合，进而杀死瘤细胞，所以氯毒素作为人体神经胶质瘤选择性靶向新药有着巨大的应用前景。目的：研究氯通道阻滞剂抑胶素对大鼠脑胶质瘤模型的抑瘤效应及肿瘤细胞增殖活性变化。方法： 1、对C6胶质瘤细胞株进行了复苏、培养后，用GFAP免疫组化染色鉴定细胞的来源，于接种前采用MTT法测定细胞存活率达90%以上。 2、采用脑立体定向术，在Wistar大鼠脑尾状核接种C6细胞，饲养7天后，观察大鼠的生存状态，并采用病理学检查等方法证实成功地建立了动物模型。 3、在动物模型的基础上，于接种后一周随机将大鼠分为实验组（分为抑胶素不同药物浓度组和顺铂组）及空白对照组，给药7天后观察肿瘤体积变化，计算抑瘤率;并采用HE染色、光镜、电镜等方法，对比观察分析抑胶素及顺铂对鼠脑胶质瘤作用的形态学变化。 4、应用免疫组织化学方法检测应用抑胶素前后鼠脑胶质瘤PCNA蛋白表达，探讨其对肿瘤细胞增殖活性的影响。结果： 1、实验组大鼠有较好的生存状态,而对照组状态不佳，死亡较多，死亡率达20％。 2、抑胶素对C6鼠脑胶质瘤的生长具有明显的抑制作用。浓度为16～64ug/kg均有一定地抑瘤作用，以后两者的抑瘤作用较强，肿瘤体积较对照组明显缩小，抑瘤率分别达38.3%和54.61%，这与体外实验结果基本一致。 3、光镜下观察，对照组的瘤细胞生长活跃密集成群，向脑组织浸润生长。瘤细胞异型性明显，体积大，胞质红染，细胞核大深染，核分裂像多见，少数细胞可见核固缩、浓染。实验组Ⅰ给药后，镜下表现与对照组无明显差别;实验组Ⅱ镜下瘤细胞丰富密集，多形性明显，可见核分裂象，凋亡细胞易见，常见坏死区和出血灶，血管增生丰富;实验组Ⅲ可见瘤细胞较为稀疏，可见大量的凋亡细胞，核分裂象较少见，亦可见坏死的细胞，膜不完整，胞核很淡甚或消失，周边可见出血灶;实验组Ⅳ在光镜下可见到瘤细胞数量明显减少，肿瘤细胞坏死，胞浆溶解，仅剩核碎片堆集在一起，坏死或凋亡后的肿瘤细胞被增生的胶原纤维细胞所替代; 顺铂组显示瘤细胞呈典型的凋亡改变。 4、透射电子显微镜观察给药前后瘤细胞的超微结构变化：对照组细胞形态不规则，突触发达，细胞表面可见微绒毛结构，细胞核亦不规整，核内异染质较多，细胞质内可见到线粒体、粗面内质网及游离核糖体等结构。抑胶素实验组及顺铂组细胞突触减少，微绒毛消失，细胞核极不规则，核固缩明显，可见细胞核有切迹，细胞质内多数线粒体肿胀、空化，线粒体嵴断裂，内质网扩张，同时有一些髓样小体出现，顺铂组瘤细胞呈典型的凋亡形态特征。 5、PCNA免疫组化结果分析：PCNA阳性细胞的胞核呈黄色或棕黄色，对照组肿瘤细胞明显表达PCNA，表现为阳性细胞密度高，胞核呈强阳性;经抑胶素治疗后即可见肿瘤内PCNA阳性细胞密度下降，核PCNA阳性强度减弱，随浓度增高阳性率呈下降趋势。结论：本实验采用光镜、电子显微镜方法观察了在一定时间内应用不同浓度抑胶素前后胶质瘤细胞的变化，结果显示，在正常情况下，胶质瘤细胞即有轻度的凋亡及坏死，而给予抑胶素治疗后，显示典型的凋亡细胞形态学特征，细胞固缩，染色质浓缩、边集等;同时证实抑胶素使肿瘤体积缩小，抑瘤率增加;应用免疫组化法检测PCNA表达，显示经抑胶素治疗后即可见肿瘤内PCNA阳性细胞密度下降，核PCNA阳性强度减弱，且随浓度增高阳性率呈下降趋势。以上研究结果证实了抑胶素能够抑制体内C6胶质瘤细胞的生长，其作用机制可能与诱导脑胶质瘤细胞发生凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。

关键词：胶质瘤 C6细胞抑胶素氯毒素 PCNA

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抑胶素对胶质瘤细胞抑制作用的体外实验研究

抑胶素对胶质瘤细胞抑制作用的体外实验研究

作者：谢晓娜吉林大学

学位级别：硕士

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，多呈侵袭性生长，与脑组织无明显的界限，手术难于彻底切除，而且术后极容易复发，因此，化疗在临床是一种很重要的治疗方法，但是，临床上所用的化疗药物由于毒副作用较大，而且容易产生耐药性，... 详细信息

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，多呈侵袭性生长，与脑组织无明显的界限，手术难于彻底切除，而且术后极容易复发，因此，化疗在临床是一种很重要的治疗方法，但是，临床上所用的化疗药物由于毒副作用较大，而且容易产生耐药性，因此，寻找对其敏感的药物具有极重要的意义。抑胶素是一种正在研制的新的抗胶质瘤药物。本论文的目的是：1、通过体外实验观察抑胶素对C6胶质瘤细胞生长增殖的抑制作用，对比观察用药前后肿瘤细胞在光镜以及电镜下的形态学变化。2、用免疫组化的方法检测用药前后细胞周期调控蛋白p16表达的变化。3、根据以上实验结果初步探讨抑胶素抗胶质瘤作用的可能机制，为其应用于临床提供理论依据。首先，我们利用GFAP对培养的胶质瘤细胞进行鉴定。通过免疫组化方法，检测肿瘤细胞GFAP的表达，结果，肿瘤细胞的胞浆中可见棕黄色的颗粒，GFAP表达明显阳性。从而明确实验所用的细胞是胶质瘤细胞。抑胶素对C6胶质瘤细胞生长增殖的抑制作用在这部分实验中，我们在传代培养C6胶质瘤细胞的基础上，将细胞分为对照组、抑胶素处理组和顺铂处理组同时进行研究。细胞贴壁后，抑胶素处理组的药物浓度分别为2、4、8、16ng/L，顺铂处理组的药物浓度为3μg/mL，而对照组不加入药物。于用药后1d、3d、5d分别留取标本，观察光镜以及电镜下肿瘤细胞形态学的变化，并且用MTT法测定肿瘤抑制率。实验结果显示：用抑胶素处理后肿瘤细胞的形态发生了明显的改变。倒置显微镜下可见，对照组细胞贴壁状况良好，铺满瓶底。细胞均质而透明，呈扁平不规则的多边形，单层密集排列，细胞大小、形态表现出多样性，以梭形细胞及有相对较大的细胞核的小圆细胞较为多见，胞质丰富，细胞间粘连完好，相互接壤成片。而实验组细胞数目减少，排列稀疏，细胞贴壁状况不好，细胞膜完整，细胞体积变小，收缩变圆，轮廓更加清楚，同时可有皱缩变形。电镜下可见，对照组细胞形态不规则，突触发达，细胞表面可见微绒毛结构，细胞核亦不规整，核内异染质较多，细胞质内可见到许多细胞器，如线粒体，粗面内质网及游离核糖体等结构。实验组细胞突触减少，微绒毛消失，细胞核极不规则，核固缩明显，可见细胞核有切迹，核内异染色质凝集增多，细胞质内多数线粒体肿胀、空化，线粒体嵴断裂，内质网扩张，同时有一些髓样小体出现。 MTT法的实验结果显示：抑胶素能明显抑制C6胶质瘤细胞的生长，而且随着抑胶素浓度的增大，其对肿瘤细胞的抑制率也增加。一般当药物对肿瘤生长抑制率为30％以上时，认为其对肿瘤的增殖有明显的抑制作用，本实验中，抑胶素在32ng/L剂量时即能明显的抑制肿瘤细胞的生长，随着药物浓度的提高，其抑制率可达54.83%，充分说明了抑胶素对C6胶质瘤细胞的增殖具有抑制作用。抑胶素对细胞周期调控基因p16基因蛋白表达的影响 p16基因又称为多瘤抑制基因（multiple suppressor gene, MST），定位于染色体9P21，是直接作用于细胞周期的重要的抑癌基因，编码负性调控细胞周期的p16蛋白，作为CDK4的抑制因子，能够抑制细胞的分裂。在多种肿瘤细胞以及临床肿瘤标本中，p16基因都有着高频率的缺失及突变，尤其以脑胶质瘤细胞系为最高，达到82％，显示了它在脑胶质瘤恶性转化中的重要作用。有研究表明，p16蛋白与多种恶性肿瘤的发生密切相关，而且可能与肿瘤的某些生物学行为及预后有关。本实验研究了不同浓度的抑胶素处理后1d，3d，C6胶质瘤细胞p16基因蛋白的表达。结果显示：对照组肿瘤细胞的p16蛋白表达明显缺失，而实验组细胞p16蛋白表达明显增多，细胞浆或细胞核内可见棕黄色颗粒，二者对比有明显的统计学差异。本实验结论：抑胶素对C6胶质瘤细胞的生长增值有明显的抑制作用，其作用的可能机制是诱导肿瘤细胞调亡及改变肿瘤细胞增殖周期，为该药的临床开发提供了理论依据。

关键词：抑胶素 C6胶质瘤细胞光镜电镜免疫组化 p16蛋白

抑胶素对大鼠脑胶质瘤神经细胞黏附分子作用的体外试验研究

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中国实验诊断学 2006年第8期10卷 830-831页

作者：崔俐林卫红徐丹扬弋王绍张淑琴吉林大学第一医院吉林长春130021

神经胶质瘤是颅内肿瘤中最常见的一种,占颅内肿瘤50%以上,具有侵袭性生长,手术难以完全切除,术后复发率高的特点。临床常规化疗药物不能有效通过血脑屏障,且易导致中枢神经系统甚至全身的毒副作用,使它们的应用受到限制。抑胶素作为一... 详细信息

神经胶质瘤是颅内肿瘤中最常见的一种,占颅内肿瘤50%以上,具有侵袭性生长,手术难以完全切除,术后复发率高的特点。临床常规化疗药物不能有效通过血脑屏障,且易导致中枢神经系统甚至全身的毒副作用,使它们的应用受到限制。抑胶素作为一种特异性氯离子通道阻滞剂,它能特异性与胶质瘤细胞表面的氯离子通道结合,进而杀死瘤细胞,是高效低毒、不易发生耐药的抗胶质瘤药物。[第一段]

关键词：神经胶质瘤脑胶质瘤抑胶素试验研究分子作用细胞黏附氯离子通道阻滞剂体外