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心脏干细胞旁分泌肝细胞生长因子对心肌梗死大鼠电生理的影响

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岭南急诊医学杂志 2016年第2期21卷 97-99页

作者：陈颖郑韶欣龙会宝周淑娴中山大学孙逸仙纪念医院心内科 510120 中山大学孙逸仙纪念医院急诊科 510120

目的:探讨心脏干细胞(CSCs)旁分泌肝细胞生长因子(HGF)对心肌梗死大鼠电生理的影响。方法:采用结扎冠脉前降支构建大鼠心肌梗死模型,分对照组、CSCs移植组、HGF受体抑制剂组(CSCs移植+HGF受体抑制剂),每组10只,给予CSCs移植及HGF受体抑... 详细信息

目的:探讨心脏干细胞(CSCs)旁分泌肝细胞生长因子(HGF)对心肌梗死大鼠电生理的影响。方法:采用结扎冠脉前降支构建大鼠心肌梗死模型,分对照组、CSCs移植组、HGF受体抑制剂组(CSCs移植+HGF受体抑制剂),每组10只,给予CSCs移植及HGF受体抑制剂(PHA665752)干预,4周后检测检测梗死区、梗死边缘区和左室非梗死区校正激动恢复时间(ARTc)和激动恢复时间离散度(ARTcd)及非梗死区室颤阈值(VFT)。结果:与对照组及HGF受体抑制剂组相比,CSCs移植组ARTcd明显下降(P<0.05),而VFT明显提高(P<0.05)。结论 :CSCs移植可改善心肌梗死大鼠电生理,HGF受体抑制剂PHA665752可阻断CSCs移植的电生理效应。

关键词：心肌梗死心脏干细胞肝细胞生长因子 PHA665752 心脏电生理

不同浓度依达拉奉对低氧环境下c-kit^+心脏干细胞的影响

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山东医药 2017年第17期57卷 10-12,16页

作者：文德重周敏薛松黄日太上海交通大学医学院附属仁济医院上海200127

目的观察不同浓度的依达拉奉对于低氧环境下c-kit^+心脏干细胞(CSCs)的影响。方法体外灌注酶解成年小鼠心脏,磁珠分选c-kit^+CSCs,流式细胞仪和免疫荧光染色分别检测分选后干细胞纯度和表型。将ckit^+CSCs培养基中加入不同浓度依达拉奉(... 详细信息

目的观察不同浓度的依达拉奉对于低氧环境下c-kit^+心脏干细胞(CSCs)的影响。方法体外灌注酶解成年小鼠心脏,磁珠分选c-kit^+CSCs,流式细胞仪和免疫荧光染色分别检测分选后干细胞纯度和表型。将ckit^+CSCs培养基中加入不同浓度依达拉奉(0、100、300、500、700、1 000μmol/L),在1%氧条件下分别通过免疫荧光显微镜下DFCH-DA检测细胞活性氧(ROS)生产量、流式细胞仪检测凋亡率、Transwell检测细胞迁移能力、RTPCR检测成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA表达。结果依达拉奉浓度为1 000μmol/L时所产生的ROS量最少,与其他浓度比较有统计学差异(P均细胞凋亡率最低,与0、100μmol/L浓度比较有统计学差异(P均细胞的凋亡率、迁移率、ROS生成和bFGF mRNA的表达对c-kit^+CSCs发挥保护作用,且在一定浓度范围内存在剂量依赖性。

关键词：心脏干细胞依达拉奉活性氧细胞凋亡细胞迁移成纤维细胞生长因子

新生小鼠Sca-1+心脏干细胞分离、培养、鉴定及生理特性的研究

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新生小鼠Sca-1+心脏干细胞分离、培养、鉴定及生理特性的研究

作者：韦静广西医科大学

学位级别：硕士

研究背景:目前临床上治疗缺血性心脏病的常规方法包括:药物改善临床症状、内科介入或外科冠脉搭桥手术改善心肌的血液供应。近几年,人们开始探索干细胞移植修复受损心肌的可能性和治疗方法,尤其是心脏原位干细胞。已有研究证实,Sca-1心... 详细信息

研究背景:目前临床上治疗缺血性心脏病的常规方法包括:药物改善临床症状、内科介入或外科冠脉搭桥手术改善心肌的血液供应。近几年,人们开始探索干细胞移植修复受损心肌的可能性和治疗方法,尤其是心脏原位干细胞。已有研究证实,Sca-1心脏干细胞是心脏中数量最多的干细胞类型。无论是在体外还是动物体内,它都能够被诱导分化成为自主跳动的心肌细胞,而其他类型的心脏干细胞(例如c-kit心脏干细胞)经诱导后则更较偏向于分化成为血管内皮细胞。由此可见,Sca-1心脏干细胞在心脏干细胞类型中最接近于心肌源性。虽然目前已经能够从动物或人类的心脏组织中成功分离获取Sca-1心脏干细胞,通过细胞移植的动物实验可以观察到Sca-1心脏干细胞对心肌修复的促进作用和对心脏功能的改善作用。但是,Sca-1心脏干细胞的获取和培养方法目前尚未成熟,人们对于Sca-1心脏干细胞生理特性的了解也还远远不足以将其应用到临床治疗上。研究目的:1.分离获取新生小鼠Sca-1心脏干细胞,对细胞进行鉴定、体外培养和扩增。2.对小鼠Sca-1心脏干细胞表面标志物及心肌特异性标记物进行研究。研究方法:1.将出生7天以内的新生昆明小鼠的心脏剪碎成组织块,用0.25%胰蛋白酶+0.1%Ⅱ型胶原酶反复消化。经组织块法培养10-14天后,结合细胞免疫磁珠法对Sca-1心脏干细胞进行阳性分选。分选后的细胞使用CGM条件培养液进行培养。分选前及经分选纯化后通过流式细胞术的方法分别测定细胞中Sca-1心脏干细胞的含量。2.对分选后的细胞通过流式细胞术的方法测定CD31、CD34及c-kit等干细胞相关的表面抗原的表达情况。3.对分选后的细胞通过细胞免疫荧光染色的方法进行表面抗原Sca-1和心肌特异性标记物Nkx-2.5和GATA-4表达的测定。研究结果:1.分选前Sca-1心脏干细胞的含量较低,仅占全部细胞比例的5.44%,经细胞磁珠分选后传至第三代的细胞其Sca-1心脏干细胞的含量占全部细胞比例的86.73%。显微镜下可见分选后的第一代Sca-1心脏干细胞生长缓慢,大约10天左右融合可达80%,细胞形态不一,细胞形态以梭形及三角形为主,聚集生长。传代后的细胞可在CGM条件培养液中快速增殖,大约6-7天后可再次进行细胞传代。2.通过流式细胞术对细胞表面标志物CD31、CD34及c-kit进行检测,结果显示:细胞不表达CD31和CD34,低表达c-kit(表达率为4.78%)。3.通过细胞免疫荧光染色的方法对传代后的细胞进行检测,结果显示:免疫荧光显微镜下可见几乎所有细胞都表达FITC-Sca-1的绿色荧光,几乎所有细胞都同时表达PE-Nkx-2.5的红色荧光和FITC-GATA-4的绿色荧光。研究结论:1.采用组织块培养结合细胞免疫磁珠分选的方法,能够从新生昆明小鼠的心脏中获取数量可观的、高纯度的Sca-1心脏干细胞。使用CGM条件培养液对分选后的Sca-1心脏干细胞进行培养,细胞可稳定传代并保持干细胞特性。第一代细胞生长速度较慢,传代后的细胞可快速增殖。2.小鼠Sca-1心脏干细胞不表达干细胞表面抗原CD31和CD34,能够排除血管内皮干细胞和造血干/祖细胞来源的可能性。细胞低表达干细胞表面抗原c-kit,其与c-kit心脏干细胞可以通过不同的细胞表面标志物从同一个体的心脏组织中分别分选获取。3.Sca-1心脏干细胞同时表达心肌特异性标记物Nkx-2.5和GATA-4,为心肌源性的心脏干细胞,具有向心肌细胞分化的潜能。

关键词：缺血性心脏病心脏干细胞干细胞抗原1 细胞磁珠分选流式细胞术细胞免疫荧光染色

IL-6对c-kit+心脏干细胞的影响及其机制的研究

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IL-6对c-kit+心脏干细胞的影响及其机制的研究

作者：薛津华中科技大学

学位级别：硕士

一、背景心脏干细胞(Cardiac stem cells,CSCs)是心脏内具有增殖和分化能力的细胞,可分化为心脏细胞的三种谱系即心肌细胞、内皮细胞和平滑肌细胞。如何促进CSCs迁移并分化为心肌组织一直是再生医学研究领域的热点之一。目前已有研究发... 详细信息

一、背景心脏干细胞(Cardiac stem cells,CSCs)是心脏内具有增殖和分化能力的细胞,可分化为心脏细胞的三种谱系即心肌细胞、内皮细胞和平滑肌细胞。如何促进CSCs迁移并分化为心肌组织一直是再生医学研究领域的热点之一。目前已有研究发现心梗后梗死周边区大量炎症因子聚集,其中基质细胞衍生因-1(Stromal cell-derived factor 1,SDF-1)和干细胞因子(Stem cell factor,SCF)能促进CSCs迁移至梗死区域;IL-6可以促进内源性心肌再生。IL-6促心肌细胞再生的作用是否与其对心脏干细胞的影响及调控有关,目前尚无报道。因此本课题拟研究炎症因子IL-6对CSCs增殖、分化及迁移的影响。二、目的通过CCK-8细胞增殖assay、免疫组化以及transwell等方法分别研究IL-6对c-kitCSCs增殖、分化以及迁移的影响,并阐明其机制,为进一步完善c-kitCSCs在临床治疗心梗和心衰等疾病提供理论基础。二、方法1.通过免疫组化追踪Brd U细胞和CCK-8增殖assay等方法研究IL-6对c-kitCSCs增殖的影响。2.IL-6干预c-kitCSCs后,通过Western Blot方法研究IL-6影响c-kitCSCs的可能信号通路。3.通过免疫组化技术和real time RT-PCR等方法研究IL-6对c-kitCSCs分化的影响。4.加入信号转导通路特异性抑制剂,抑制AKT、ERK和STAT3的磷酸化,重复CCK-8增殖assay以及免疫组化实验,观察IL-6影响c-kitCSCs增殖及分化的可能机制。5.通过transwell研究IL-6对c-kitCSCs迁移的影响。三、结果1.IL-6对c-kitCSCs增殖的影响:IL-6(10、50、和100 ng/ml)促进c-kitCSCs增殖能力,具有统计学意义,但无明显的浓度依赖性;10 ng/ml和50 ng/ml IL-6不同程度地促进STAT3、ERK和AKT的磷酸化,100 ng/ml IL-6不改变这三种蛋白质的磷酸化水平;溶解通路抑制剂的DMSO(0.1%)对细胞增殖无明显影响,10 ng/ml IL-6的促增殖效应能被STAT3抑制剂STA21、ERK抑制剂FR180204或AKT抑制剂AZD-8835抑制(DMSO+STA21/FR180204/AZD-8835+IL-6组&DMSO+IL-6组)。2.IL-6对c-kitCSCs向心肌分化的影响:无IL-6干预,第一周时未观察到CSCs自发心肌分化,第二周与第四周仅有少量自发分化;不同浓度IL-6(10、50、和100 ng/ml)干预1、2、4周,仅IL-6 10 ng/ml组诱导c-kitCSCs分化为Troponin I阳性细胞比率明显高于同时期对照组;DMSO对心肌分化无明显影响,10 ng/ml IL-6的促c-kitCSCs向心肌分化效应能被三种通路小分子抑制剂抑制(DMSO+STA21/FR180204/AZD-8835+IL-6组&DMSO+IL-6组);10 ng/ml IL-6干预c-kitCSCs 1或2周后,反应心肌细胞成熟的离子通道亚型Cav1.2和Kir2.1的表达量与空白对照组相比均下降。3.IL-6对c-kitCSCs向平滑肌分化的影响:无IL-6干预,1周、2周和4周的CSCs能自发分化出一定比例的平滑肌细胞;加入不同浓度IL-6(10、50、和100ng/ml)干预后,c-kitCSCs两周内分化的α-SMA阳性细胞比率均高于同时期对照组;分化第四周与同时期对照组相比仅10 ng/ml IL-6继续增加α-SMA阳性细胞比率,其他浓度IL-6组不影响阳性细胞率(50ng/ml)甚至降低阳性细胞率(100ng/ml);然而DMSO基础上的IL-6并没有显示促平滑肌分化作用,c-kitCSCs向平滑肌分化效应依然能被AKT和STAT3两种通路小分子抑制剂部分抑制(DMSO+STA21/AZD-8835+IL-6组&DMSO+IL-6组/DMSO组/空白对照组)。4.IL-6对c-kitCSCs迁移的影响:加入不同浓度IL-6(10、50、和100 ng/ml)干预后,c-kitCSCs迁移能力随着IL-6浓度的增高而增强。四、结论IL-6影响c-kitCSCs的增殖、分化和迁移能力:低浓度10 ng/ml IL-6可以稳定地促进c-kitCSCs的增殖、分化和迁移能力,但同时抑制心肌细胞的成熟;高浓度长时间100 ng/ml IL-6抑制c-kitCSCs的分化。其促增殖和分化的信号通路与JAK/STAT、RAS/ERK和PI3K/AKT三种途径有关。这为提高使用c-kitCSCs治疗心衰成功率的潜在目标提供了新的理论基础。

关键词： IL-6 心脏干细胞增殖迁移分化

缺氧预处理心脏干细胞源外泌体通过自噬调控缺氧复氧诱导心肌凋亡的实验研究

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缺氧预处理心脏干细胞源外泌体通过自噬调控缺氧复氧诱导心肌凋亡...

作者：赵永超遵义医学院

学位级别：硕士

研究背景:急性心肌梗死再灌注治疗后发生心功能不全最主要的病理生理基础是缺血再灌注损伤(Ischemia/reperfusion,I/R)过程中造成了心肌细胞的凋亡和坏死。心脏干细胞(Cardiac stem cells,CSCs)作为一种理想的种子干细胞可显著修复梗死... 详细信息

研究背景:急性心肌梗死再灌注治疗后发生心功能不全最主要的病理生理基础是缺血再灌注损伤(Ischemia/reperfusion,I/R)过程中造成了心肌细胞的凋亡和坏死。心脏干细胞(Cardiac stem cells,CSCs)作为一种理想的种子干细胞可显著修复梗死心肌、改善心肌重构和心功能。目前的研究认为,CSC移植治疗缺血性心肌病心功能的改善主要获益于细胞的旁分泌机制,而外泌体(Exosomes)是干细胞旁分泌效应中发挥主要作用的因子。与CSC相比,作为非细胞成分的CSC源Exosomes性能稳定,不易受移植后缺血微环境的影响,可避免干细胞移植时畸胎瘤的形成、免疫反应、细胞增殖分化有限等问题,同时还提供了生长因子等细胞保护因子,能够抗凋亡、抗纤维化,促进血管生成,增强心肌分化,修复受损组织。已有研究显示,缺氧预处理(Hypoxic preconditioning,HPC)能提高干细胞修复能力,同时也增强了干细胞源Exosomes心肌保护作用。既往有关心肌I/R发病机制的研究大多是集中在氧自由基、钙超载、炎症反应、线粒体损伤、细胞凋亡、内皮细胞活化和损伤以及自噬等方面,其中自噬被认为在心肌I/R中发挥着非常重要的作用。研究显示,自噬是将受损的、变性、衰老的长寿命蛋白及细胞器等底物运输到溶酶体内进行酶解消化,将底物还原为其组成成分并供细胞再利用的过程。在心脏组织中,自噬与凋亡对心肌细胞正常功能的维持至关重要。动物实验和细胞实验均证实,在I/R过程中,缺氧阶段,自噬水平适度升高可减轻缺氧所引起的损伤作用,当缺血的心肌组织恢复营养和氧气的供应后,活性氧物质(Reactive oxygen spieces,ROS)大量聚积,可见自噬显著上调,随着自噬水平的过度增高,通常伴随有心肌细胞自噬性死亡和心肌细胞凋亡的加剧。目前,关于HPC CSCs源Exosomes通过自噬调控缺氧复氧(HR)所诱导的心肌细胞凋亡的研究未见报道。本研究拟利用在HR诱导H9c2心肌细胞凋亡的基础上,观察HPC CSC源Exosomes对H9c2凋亡及自噬的影响,探讨Exosomes与损伤组织微环境之间的相互调节机制并为干细胞的非细胞治疗提供新的治疗靶向与策略。第一部分大鼠CSCs的培养及Exosomes的提取鉴定目的:培养实验所需的c-kit+CSCs,从常氧(Nor)及HPC的c-kit+CSCs培养上清液中提取并鉴定Exosomes,并对其进行鉴定。方法:(1)采用胶原酶消化法结合免疫磁珠分选法(MACS)培养实验所需的c-kit+CSCs并进行多方面鉴定:流式细胞术(FCM)检查MACS分选前后CSCs表面标记抗原(c-kit、CD34和CD45);细胞免疫荧光鉴定CSCs表面c-kit分子的表达;实时无标记细胞分析技术(RTCA)记录c-kit+CSCs生长曲线;CCK-8检测不同缺氧预处理(HPC)时间对c-kit+CSCs细胞活性的影响;q RT-PCR技术检测HPC对CSCs干性的影响。(2)采用超速离心法(UC)分别提取出Nor组c-kit+CSCs培养上清液中的Exosomes(Nor-Exo)及HPC组c-kit+CSCs培养上清液中的Exosomes(HPC-Exo)。Western Blot检测Exosomes表面4次跨膜蛋白CD9、CD63及Alix的表达;透射电镜(TEM)观察Exosomes形态;纳米颗粒追踪分析(NTA)分析Nor-Exo和HPC-Exo粒径大小、分布范围及浓度高低。结果:(1)原代细胞培养第10天左右,细胞密度达约80%-90%。随后采用MACS分选c-kit+CSCs,培养5天左右可见大量呈长三角形及长梭形的CSCs贴壁生长。经FCM鉴定,MACS后c-kit的阳性率可高达88.83%±3.45(P细胞潜伏生长期,培养1天后,细胞快速增殖进入对数生长期,约3天后,细胞指数(CI)曲线趋于平缓达到平台期不再增加。对c-kit+CSCs分别缺氧0、6、12、24h,经CCK-8检测细胞活力变化,结果显示,缺氧12h后c-kit+CSCs细胞活性显著上调(P0.05)。(2)采用超速离心法(UC)分别提取出Nor组c-kit+CSCs培养上清液中的Exosomes(Nor-Exo)及HPC组c-kit+CSCs培养上清液中的Exosomes(HPC-Exo),经Western Blot检测,Exosome表面CD9、CD63及Alix呈阳性表达;TEM观察见大小不一,呈圆形或椭圆形盘状或茶托盘状有脂质膜包裹的双层膜囊泡状

关键词：缺氧预处理心脏干细胞外泌体心肌细胞凋亡自噬

体外分离培养的心脏干细胞具有间充质干细胞的特性

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南开大学学报（自然科学版） 2014年第2期47卷 46-51页

作者：王丽娜宋祥和刘艳华苏位君周曼倩童玲玲王宝玉郑国光李宗金中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 南开大学医学院天津300071 山东省日照市中医院山东日照276800 南开大学人民医院天津300121

近年来,已报道从成年的小鼠中分离得到心脏干细胞(Cardiac Stem.Cells CSCs),并且应用于心脏病的治疗.但是心脏干细胞特征尚未完全阐述.通过体外分离成年小鼠的心肌组织,进行培养,分离得到半悬浮状态的具有干细胞特性的细胞;利用流式细... 详细信息

近年来,已报道从成年的小鼠中分离得到心脏干细胞(Cardiac Stem.Cells CSCs),并且应用于心脏病的治疗.但是心脏干细胞特征尚未完全阐述.通过体外分离成年小鼠的心肌组织,进行培养,分离得到半悬浮状态的具有干细胞特性的细胞;利用流式细胞仪检测分离得到的心脏干细胞的表面分子表达情况;并且通过调整培养条件诱导其体外分化.研究结果显示成功分离得到的心脏干细胞,表达干细胞标志分子Sca-1,以及间充质干细胞标志分子(CD29、CD90、CD44和CD106);体外分化研究显示心脏干细胞可以分化成心肌细胞、平滑肌细胞、脂肪细胞和成骨细胞.心脏干细胞具有间充质干细胞的特性,具有多向分化潜能,在心脏损伤的治疗中具有重要意义.

关键词：心脏干细胞心球样细胞团间充质干细胞分化

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自体心脏干细胞移植治疗缺血性心肌病的进展

中国组织工程研究 2013年第19期17卷 3589-3595页

作者：侯红吕安林侯婧刘博武达晶侯兆蕾杨娜解放军第四军医大学第一附属医院心内科陕西省西安市710032

背景:药物、介入或外科治疗均不能从根本上解决心脏缺血梗死后心肌细胞丧失问题。大量研究结果显示自体心脏干细胞移植治疗缺血性心肌病安全可行,可减少梗死瘢痕面积、改善心室重构、提高心脏功能。目前自体心脏干细胞移植治疗缺血性心... 详细信息

背景:药物、介入或外科治疗均不能从根本上解决心脏缺血梗死后心肌细胞丧失问题。大量研究结果显示自体心脏干细胞移植治疗缺血性心肌病安全可行,可减少梗死瘢痕面积、改善心室重构、提高心脏功能。目前自体心脏干细胞移植治疗缺血性心肌病已进入临床试验阶段。目的:综述近年国内外自体心脏干细胞移植治疗缺血性心肌病的研究进展。方法:第一作者应用计算机检索1998年1月至2012年4月PubMed数据库、中国期刊全文数据库相关文章,英文检索词"autologous,cardiac stem cells,ischemic cardiomyopathy,transplantation,treatment";中文检索词"自体,心脏干细胞,缺血性心肌病,移植,治疗"。共检索到82篇相关文献,57篇文献符合纳入标准。结果与结论:经过大量小动物实验和大型动物的前临床实验准备阶段,目前自体心脏干细胞移植治疗缺血性心肌病已经进入临床试验阶段,初步临床试验结果显示自体心脏干细胞移植治疗缺血性心肌病安全、可行、有效。从心脏中分离的心脏干细胞移植到自体缺血梗死的心脏,可以分化生成心肌细胞、内皮细胞、平滑肌细胞,抑制心室重构,改善心脏收缩、舒张功能。相对于其他来源的干细胞移植治疗,自体心脏干细胞移植治疗缺血性心肌病无免疫源性,不存在免疫排斥反应;不存在伦理问题;其趋向分化成心脏细胞系,成瘤率低,相对安全。自体心脏干细胞移植为缺血性心肌病的治疗提供了一条新的途径,有更高的临床应用价值。但目前开展的临床试验较少,观测时间不够长,缺少多中心大样本量的临床试验等,这些都需要进一步研究探索。

关键词：干细胞干细胞学术探讨自体心脏干细胞移植缺血性心肌病心肌梗死治疗心室重构免疫源性免疫排斥研究进展

补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响

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中国老年学杂志 2018年第19期38卷 4716-4719页

作者：金鑫瑶朱征陈娜李娜曾文赟王一婧姜希娟天津中医药大学天津300193

目的观察补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响,探讨该药对心肌梗死的作用及可能机制。方法复制小鼠心脏成纤维细胞缺氧预适应24 h模型,将实验分为对照组、模型组、补阳还五汤组,利用Transwell小室进行心脏干细... 详细信息

目的观察补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响,探讨该药对心肌梗死的作用及可能机制。方法复制小鼠心脏成纤维细胞缺氧预适应24 h模型,将实验分为对照组、模型组、补阳还五汤组,利用Transwell小室进行心脏干细胞迁移实验。显微镜下观察并计数迁移至小室膜下层的心脏干细胞数; RT-PCR法检测各组心脏成纤维细胞干细胞因子(SCF)、基质细胞衍生因子(SDF)-1 mRNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养液中迁移相关因子SCF、SDF-1的蛋白分泌量。结果对照组、模型组、补阳还五汤组心脏干细胞迁移数呈递增趋势,对照组与模型组比较差异有统计学意义(P0. 05),补阳还五汤组与模型组比较差异有统计学意义(均P心脏成纤维细胞诱导的心脏干细胞迁移,其机制可能与上调心脏成纤维细胞迁移相关因子SCF、SDF-1的表达有关。

关键词：缺氧心脏成纤维细胞心脏干细胞迁移补阳还五汤

低氧下不同浓度依达拉奉对心脏干细胞的保护作用

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低氧下不同浓度依达拉奉对心脏干细胞的保护作用

作者：文德重上海交通大学

学位级别：硕士

研究目的:1.建立一种简便、成熟的心脏干细胞(CSCs)分离培养方法,探索干细胞的多向分化潜能。2.探索不同浓度依达拉奉对于低氧环境下心脏干细胞的影响。方法:1.将蛇形冷凝管、循环水浴锅、蠕动泵连接起来成为简易装置灌注解离心脏。2.经... 详细信息

研究目的:1.建立一种简便、成熟的心脏干细胞(CSCs)分离培养方法,探索干细胞的多向分化潜能。2.探索不同浓度依达拉奉对于低氧环境下心脏干细胞的影响。方法:1.将蛇形冷凝管、循环水浴锅、蠕动泵连接起来成为简易装置灌注解离心脏。2.经过CD45和c-kit磁珠双分选,得到c-kit+CD45-的CSCs。3.分化培养基诱导细胞向心肌、血管内皮、平滑肌细胞分化,免疫荧光染色法和RT-PCR用于检测分化。4.将CSCs置于含0、100、300、500、700、1000μmol/L浓度依达拉奉的培养基中,在1%O、5%CO、94%N条件下培养检测活性氧(ROS)产生量、凋亡率、细胞迁移能力、bFGF mRNA的表达。结果:1.通过此装置解离心脏比较完全,分离效果较好。2.分选的c-kit+CSCs纯度较高。诱导分化第14天与第0天相比,CSCs的α-SMA、sm-22α、vWF、cTnT mRNA的表达量显著升高,c-kit mRNA相对表达量降低,P值均细胞。3.低氧条件下,依达拉奉浓度为1000μmol/L时CSCs所产生的ROS量最少,细胞凋亡率最低(P值均心脏可被充分解离成单个细胞,效果较好。2.分离的CSCs具有多向分化能力。3.依达拉奉对CSCs具有较好的保护作用,且在一定浓度范围内存在剂量依赖性。

关键词：心脏干细胞 c-kit 依达拉奉低氧保护作用