低氧下不同浓度依达拉奉对心脏干细胞的保护作用

作     者：文德重 

作者单位：上海交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：黄日太

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：心脏干细胞 c-kit 依达拉奉 低氧 保护作用 

摘      要：研究目的:1.建立一种简便、成熟的心脏干细胞(CSCs)分离培养方法,探索干细胞的多向分化潜能。2.探索不同浓度依达拉奉对于低氧环境下心脏干细胞的影响。方法:1.将蛇形冷凝管、循环水浴锅、蠕动泵连接起来成为简易装置灌注解离心脏。2.经过CD45和c-kit磁珠双分选,得到c-kit+CD45-的CSCs。3.分化培养基诱导细胞向心肌、血管内皮、平滑肌细胞分化,免疫荧光染色法和RT-PCR用于检测分化。4.将CSCs置于含0、100、300、500、700、1000μmol/L浓度依达拉奉的培养基中,在1%O、5%CO、94%N条件下培养检测活性氧(ROS)产生量、凋亡率、细胞迁移能力、bFGF mRNA的表达。结果:1.通过此装置解离心脏比较完全,分离效果较好。2.分选的c-kit+CSCs纯度较高。诱导分化第14天与第0天相比,CSCs的α-SMA、sm-22α、vWF、cTnT mRNA的表达量显著升高,c-kit mRNA相对表达量降低,P值均0.05。免疫荧光染色可见cTnT、vWF、α-SMA阳性细胞。3.低氧条件下,依达拉奉浓度为1000μmol/L时CSCs所产生的ROS量最少,细胞凋亡率最低(P值均0.05)。依达拉奉浓度为700μmol/L时CSCs迁移数最大(P值0.05),bFGF mRNA表达最高(P值均0.05)。结论:1.经该装置灌流后的心脏可被充分解离成单个细胞,效果较好。2.分离的CSCs具有多向分化能力。3.依达拉奉对CSCs具有较好的保护作用,且在一定浓度范围内存在剂量依赖性。