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中华实验和临床病毒学杂志 2018年第2期32卷 136-139页

作者：孙颖白天李梓阮菲儿陈玲玲鲁健刘丽琦王大燕舒跃龙秦堃周剑芳中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所中国国家流感中心北京100052

目的从禽流感H5N1患者体内筛选分离抗流感病毒血凝素（Hemagglutinin，HA）广谱中和性抗体。方法通过B细胞体外培养、抗体可变区基因筛选及表达等技术，建立H5N1患者外周血中交叉反应性B细胞及H5N1假病毒中和活性B细胞的抗体基因文库。... 详细信息

目的从禽流感H5N1患者体内筛选分离抗流感病毒血凝素（Hemagglutinin，HA）广谱中和性抗体。方法通过B细胞体外培养、抗体可变区基因筛选及表达等技术，建立H5N1患者外周血中交叉反应性B细胞及H5N1假病毒中和活性B细胞的抗体基因文库。利用293T细胞表达系统体外表达抗体库，使用ELISA及假病毒中和试验筛选潜在的广谱抗体，并鉴定其功能。结果获得由VH1-2编码的抗体基因，其编码抗体可广谱结合H1，H5，H6，H9及H7亚型，并对GX-H5N1假病毒有良好的中和能力，该类抗体轻链为Vκ3-20/Jκ4和Vκ3-20/Jκ5。结论H5N1病毒感染可诱导产生广谱反应性抗体。

关键词：广谱抗体 VH1-2 流感病毒血凝素

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食物中毒菌多联融合毒素广谱抗体的制备及免疫特性研究

食物中毒菌多联融合毒素广谱抗体的制备及免疫特性研究

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作者：于师宇吉林大学

学位级别：硕士

以食物中毒菌金黄色葡萄球菌、O157∶H7 大肠杆菌和肉毒梭菌毒素为研究对象,利用PCR 方法从三种细菌基因组中分别扩增出金葡菌肠毒素SEA 和SEB、大肠杆菌Vero 毒素VT1B 和VT2B 亚基结构基因及肉毒毒素BoNTaHc 片段的基因。将克隆得到的... 详细信息

以食物中毒菌金黄色葡萄球菌、O157∶H7 大肠杆菌和肉毒梭菌毒素为研究对象,利用PCR 方法从三种细菌基因组中分别扩增出金葡菌肠毒素SEA 和SEB、大肠杆菌Vero 毒素VT1B 和VT2B 亚基结构基因及肉毒毒素BoNTaHc 片段的基因。将克隆得到的五个毒素基因片段采用柔性的Linker 序列(Gly4Ser)进行基因串联(VT1B-SEA-VT2B-Hc-SEB),通过PCR 重叠延伸法扩增出了融合毒素T2,目的基因全长序列2348bp,包含4 个Linker 序列,并定向克隆到表达质粒pET-28a(+)的NcoI 和XhoI 位点之间,构建了重组表达质粒pET-28a(+)-T2,且在表达宿主菌*** BL21(DE3)中得到有效表达。表达蛋白主要以包涵体形式存在(表达量为12.9%)。将表达蛋白的包涵体经过初步纯化,分别免疫吉戎獭兔制备血清抗体,经ELISA 和琼脂扩散试验检测表明,表达的融合毒素T2 以不同的抗体效价证明保留了五种天然毒素的各自抗原性,与多种非目标菌和毒素不反应,具有较好的特异性。说明多个基因串联至少可达2400bp 仍能在原核载体表达,至少包含4 个linker 而不影响串联基因的抗原结构特性,表达产物可诱导机体产生广谱反应特性的抗体。为融合毒素T2 的进一步应用研究以及利用融合毒素的方法检测食物中毒菌,进而建立食物中毒菌广谱、快速的检测方法奠定了基础。

关键词：食物中毒菌融合毒素广谱抗体基因串联

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苏云金芽孢杆菌Cry毒素共性结构短肽串联表达及功能分析

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河南农业科学 2024年第1期53卷 96-104页

作者：金嘉凤沈成孟萌陈蔚徐重新刘媛刘贤金江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013 江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所/省部共建国家重点实验室培育基地—江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014 南京农业大学植物保护学院江苏南京210023 江苏大学生命科学学院江苏镇江212013

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Cry毒素是一类具有抗虫功能的微生物蛋白。将前期基于Bt Cry毒素家族氨基酸序列及结构信息设计获得的呈现Cry毒素共性结构的3个短肽,拼接成为具有免疫原性的长链多肽(Bt Cry-GXJG-11),以期研... 详细信息

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Cry毒素是一类具有抗虫功能的微生物蛋白。将前期基于Bt Cry毒素家族氨基酸序列及结构信息设计获得的呈现Cry毒素共性结构的3个短肽,拼接成为具有免疫原性的长链多肽(Bt Cry-GXJG-11),以期研发Bt Cry毒素杀虫功能的模拟物及制备Bt Cry毒素检测用广谱抗体的免疫原。分子建模预测结果显示,Bt Cry-GXJG-11与Bt Cry毒素靶标害虫棉铃虫(Helicoverpa armigera)钙黏蛋白受体(HaCad-TBR)存在互作效应,并初步明确了两者互作的关键氨基酸位点为244TYR。经原核表达,获得了质量浓度为0.5 mg/mL的Bt Cry-GXJG-11纯蛋白,测得其与HaCad-TBR的亲和力常数(KD)为2.151×10^(-7)mol/L。室内生测试验表明,Bt Cry-GXJG-11对棉铃虫具有一定杀虫活性,校正死亡率为27.5%;且以其免疫的小鼠血清能同时识别6种Bt Cry毒素(Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Ah、Cry1B、Cry1C、Cry1F)。

关键词： Bt Cry毒素共性结构分子互作杀虫活性广谱抗体棉铃虫

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喹诺酮类药物抗体制备研究进展及策略分析

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中国农业科学 2008年第10期41卷 3311-3317页

作者：王战辉沈建忠张素霞中国农业大学动物医学院/国家兽药残留基准实验室

氟喹诺酮类(Fluoroquinolones,FQs)各单体药物之间的化学结构极其类似,通常针对某一个药物制备的抗体对多种氟喹诺酮具有广谱识别性,是易于建立多残留免疫分析的代表性药物。本文综述了氟喹诺酮抗体制备和食品中的免疫分析研究进展,分... 详细信息

氟喹诺酮类(Fluoroquinolones,FQs)各单体药物之间的化学结构极其类似,通常针对某一个药物制备的抗体对多种氟喹诺酮具有广谱识别性,是易于建立多残留免疫分析的代表性药物。本文综述了氟喹诺酮抗体制备和食品中的免疫分析研究进展,分析了已发表文章中以不同氟喹诺酮为半抗原所获得抗体对其它氟喹诺酮的交叉反应,并应用SYBYL.7.0程序包以MMFF94力场优化了8种批准用于动物的氟喹诺酮最低能量构象,从二维和三维构象角度对制备广谱氟喹诺酮抗体的策略进行了探讨,理论上提出了制备广谱氟喹诺酮抗体的途径。

关键词：氟喹诺酮广谱抗体免疫分析分子模拟

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沙门氏菌检测与分型的免疫层析方法的建立

沙门氏菌检测与分型的免疫层析方法的建立

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作者：卢中炜南昌大学

学位级别：硕士

由病原体引起的食源性疾病对人类健康和全球经济造成巨大威胁。沙门氏菌是常见的食源性病原体之一,广泛存在于多种食品中,如禽肉、蛋类、牛奶、牛肉等。每年约有1.15亿人感染沙门氏菌,造成37万人死亡。目前已发现超过2650多个沙门氏菌... 详细信息

由病原体引起的食源性疾病对人类健康和全球经济造成巨大威胁。沙门氏菌是常见的食源性病原体之一,广泛存在于多种食品中,如禽肉、蛋类、牛奶、牛肉等。每年约有1.15亿人感染沙门氏菌,造成37万人死亡。目前已发现超过2650多个沙门氏菌血清型,分为大约50个血清组,其中大部分的沙门氏菌对人类产生危害。不同血清型表现出不同的致病机制、致病性和毒性。因此,对沙门氏菌进行广谱检测和血清型分群在食品安全保障、公共卫生监测以及禽病预防和控制中具有重要意义。传统检测方法是沙门氏菌检测和血清型分群的标准方法,但存在繁琐耗时的缺点。因此亟需建立快速、准确的沙门氏菌广谱检测与高通量分型的方法。本研究基于广谱抗体策略和空间颜色共识别策略分别建立了两种侧流免疫层析方法(Lateral flow immunoassay,LFIA)。其中使用聚集诱导发光微球(Aggregation-induced emission fluorescent microsphere,AIEFM)作为信号探针,实现了沙门氏菌的广谱检测;使用多种颜色的乳胶微球(Latex microspheres,LMs)作为信号探针,实现了沙门氏菌的高通量分型。第一章系统地介绍了沙门氏菌的生物学特性、血清型特性、危害及临床特征、限量标准以及现有的检测和分型研究进展等;此外,还对LFIA的结构组成、检测原理及提升复合检测性能的策略等进行了概述。第二章建立了基于广谱抗体的聚集诱导发光LFIA,使用可识别沙门氏菌血清型的广谱抗体,将具有强荧光特性的AIEFM包被一层对抗体友好的聚多巴胺(Polydopamine,PDA)制备成AIEFM@PDA荧光探针,用于快速、高效地检测五种高致病率的沙门氏菌血清型,包括鼠伤寒沙门氏菌变种(Salmonella Typhimurium variant,STV)、肠炎沙门氏菌(Samlonella Enteritidis,SE)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium,ST)、德尔卑沙门氏菌(Salmonella Derby,SD)和乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella Paratyphi B,SPB)。AIEFM@PDA在检测大分子的双抗夹心型LFIA中具有较佳的性能表现,本方法对STV的检测限(Limit of detection,LOD)为2.3×10 CFU/m L;对SE的LOD为8.9×10 CFU/m L;对ST的LOD为1.1×10 CFU/m L;对SD的LOD为3.6×10 CFU/m L;对SPB的LOD为4.6×10 CFU/m L。本研究为沙门氏菌的广谱检测提供了一种快速、高效的方法。第三章建立了基于空间颜色共识别的LFIA,通过设置两条检测线,使用红蓝两色的LMs作为信号探针,实现对四种沙门氏菌常见血清群O:2、O:3、O:7和O:9的高通量分型。本方法分别对p H值、标记抗体量、封闭量和捕获抗体量等关键条件进行了探讨,引入红-绿-蓝(Red-green-blue,RGB)色彩空间和色相-饱和度-亮度(Hue-saturation-brightness,HSB)色彩空间来量化检测线上的颜色区别,HSB色彩空间在多色免疫层析条带识别方面表现出更好的性能。基于饱和度(Saturation,S)计算了四个血清群中标准菌株的检测限,并基于检测线上HSB值的范围,构建了用于分析空间颜色共识别LFIA检测结果的Android应用程序。本方法对沙门氏菌O:2血清群中甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella Paratyphi A,SP)的LOD为1.4×10 CFU/m L;对沙门氏菌O:3血清群中鸭沙门氏菌(Salmonella Anatum,SA)的LOD为1.8×10 CFU/m L;对沙门氏菌O:7血清群中猪霍乱沙门氏菌(Salmonella Choleraesuis,SC)的LOD为6.5×10 CFU/m L;对沙门氏菌O:9血清群中肠炎沙门氏菌(Samlonella Enteritidis,SE)的LOD为7.6×10 CFU/m L。检测了44株菌株来验证本方法的灵敏度和特异性,对4种血清群的灵敏度和特异性均为100%。本研究基于空间颜色共识别LFIA,引入HSB色彩空间进行数值化分析,为沙门氏菌的分型提供了一种快速、准确的方法,推进了HSB色彩空间在多色结果识别的应用。第四章系统地总结了用于检测沙门氏菌的广谱抗体LFIA和空间颜色共识别LFIA,并展望了提高LFIA复合检测性能的潜在方法。综上所述,本研究建立了基于广谱抗体的聚集诱导发光LFIA对沙门氏菌灵敏检测,可同时检测五种高致病率的沙门氏菌血清型,实现对沙门氏菌的广谱检测。此外,还提出了一种基于空间颜色共识别的LFIA,通过引入HSB色彩空间对免疫层析试纸条

关键词：沙门氏菌血清型免疫层析方法多重检测广谱抗体空间颜色共识别

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