食物中毒菌多联融合毒素广谱抗体的制备及免疫特性研究

作     者：于师宇 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：柳增善

授予年度：2005年

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100403[医学-营养与食品卫生学] 10[医学] 

主      题：食物中毒菌 融合毒素 广谱抗体 基因串联 

摘      要：以食物中毒菌金黄色葡萄球菌、O157∶H7 大肠杆菌和肉毒梭菌毒素为研究对象,利用PCR 方法从三种细菌基因组中分别扩增出金葡菌肠毒素SEA 和SEB、大肠杆菌Vero 毒素VT1B 和VT2B 亚基结构基因及肉毒毒素BoNTaHc 片段的基因。将克隆得到的五个毒素基因片段采用柔性的Linker 序列(Gly4Ser)进行基因串联(VT1B-SEA-VT2B-Hc-SEB),通过PCR 重叠延伸法扩增出了融合毒素T2,目的基因全长序列2348bp,包含4 个Linker 序列,并定向克隆到表达质粒pET-28a(+)的NcoI 和XhoI 位点之间,构建了重组表达质粒pET-28a(+)-T2,且在表达宿主菌*** BL21(DE3)中得到有效表达。表达蛋白主要以包涵体形式存在(表达量为12.9%)。将表达蛋白的包涵体经过初步纯化,分别免疫吉戎獭兔制备血清抗体,经ELISA 和琼脂扩散试验检测表明,表达的融合毒素T2 以不同的抗体效价证明保留了五种天然毒素的各自抗原性,与多种非目标菌和毒素不反应,具有较好的特异性。说明多个基因串联至少可达2400bp 仍能在原核载体表达,至少包含4 个linker 而不影响串联基因的抗原结构特性,表达产物可诱导机体产生广谱反应特性的抗体。为融合毒素T2 的进一步应用研究以及利用融合毒素的方法检测食物中毒菌,进而建立食物中毒菌广谱、快速的检测方法奠定了基础。