检索结果-南通市图书馆

畜牧兽医学报 2009年第9期40卷 1327-1332页

作者：白昌明王新庄闫颖颖和小娥张静芳河南农业大学牧医工程学院郑州450002 中国科学院动物研究所北京100101 西北农林科技大学动物医学院杨凌712100

本研究以无血清培养基为基础培养液,旨在探求小鼠es细胞条件培养液(esCCM)和2种不同饲养层对绵羊类es细胞分离、克隆效率的影响。绵羊内细胞团从胚胎中分离得到后,分别以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)和绵羊胎儿成纤维细胞(SEF)为饲养层进行... 详细信息

本研究以无血清培养基为基础培养液,旨在探求小鼠es细胞条件培养液(esCCM)和2种不同饲养层对绵羊类es细胞分离、克隆效率的影响。绵羊内细胞团从胚胎中分离得到后,分别以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)和绵羊胎儿成纤维细胞(SEF)为饲养层进行培养。结果在MEF饲养层上,绵羊类es细胞在esCCM新培养系统中可稳定传至第10代,而使用基础培养液最多传至5代。而在SEF饲养层上,绵羊类es细胞在esCCM新培养系统中仅能传至3代。表明使用esCCM和MEF能促进绵羊类es细胞的分离和克隆。对类es细胞进行核型分析、AKP染色及体外分化能力检测,证实所分离的类es细胞符合es细胞的主要特征,而且发现这些类es细胞可以表达胚胎干细胞关键转录因子Nanog。结果表明,esCCM可显著提高绵羊类es细胞的分离克隆效率,原因可能是小鼠es细胞在生长过程中可能分泌某些重要的细胞因子,从而达到促进绵羊es细胞增殖的作用。且MEF比SEF更适合于绵羊类es细胞的分离和传代。

关键词：绵羊类es细胞小鼠es细胞条件培养基自我更新

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

不同培养体系对绵羊类胚胎干细胞分离、传代的影响

引用

生物工程学报 2008年第7期24卷 1268-1273页

作者：白昌明刘丑生王志刚王新庄西北农林科技大学动物医学院杨凌712100 农业部全国畜牧总站畜禽牧草种质资源保存利用中心北京100094 河南农业大学牧医工程学院郑州450002

以小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)为饲养层,研究了用Knockout血清替代品(Knockout serum replacement,KSR)代替胚胎干细胞(Embryonic stem cells,es cell)培养液中的胎牛血清(FBS)和向含KSR的基础培养液中添加40%的小鼠es细胞条件培养液(es cell conditioned medium,esCCM)对绵羊类es细胞分离、克隆效率的影响。发现使用含FBS的基础培养液最多可以把绵羊类es细胞传至3代,而使用KSR和添加esCCM能促进绵羊类es细胞的分离和克隆,所获得的类es细胞分别可稳定传至第5和8代。同时对类es细胞进行核型分析、AKP染色及体外分化能力检测,证实所分离的类es细胞符合es细胞的主要特征。由此认为,与FBS相比KSR更加适于绵羊类es细胞的分离与培养;而小鼠es细胞在生长过程中可能分泌某些重要的细胞因子,从而达到促进绵羊es细胞增值的作用。

关键词：绵羊类es细胞小鼠es细胞条件培养基 knockout血清替代品自我更新

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

小鼠和绵羊类胚胎干细胞的分离与培养

小鼠和绵羊类胚胎干细胞的分离与培养

引用

作者：白昌明西北农林科技大学

学位级别：硕士

绵羊es细胞（embryonic stem cells,es细胞）是制备乳腺生物反应器的理想候选细胞,然而至今仍没有成功建系的报道。昆白小鼠是我国科研工作中最常用的实验动物之一,但已经建立的小鼠es细胞系大多来源于129、C57BL/6J和BALB/C品系的小鼠... 详细信息

绵羊es细胞（embryonic stem cells,es细胞）是制备乳腺生物反应器的理想候选细胞,然而至今仍没有成功建系的报道。昆白小鼠是我国科研工作中最常用的实验动物之一,但已经建立的小鼠es细胞系大多来源于129、C57BL/6J和BALB/C品系的小鼠,而用昆白小鼠建系的报道很少,因此建立绵羊和昆白小鼠类es细胞系对我国深入而便利地开展es细胞以及其他生命科学领域的研究具有重要意义。本研究选用体内来源的小尾寒羊和昆白小鼠胚胎为试验对象,参照已报道的小鼠和人es细胞建系方法,系统比较了不同培养条件对分离培养昆白小鼠和不同胚胎发育时期来源的绵羊类es细胞的影响。主要获得以下结论: 1.试验中共获得昆白小鼠胚胎120枚,其中有98枚顺利孵化,并形成内细胞团（ICM）,ICM贴孵化为81.7%;从形成的98枚ICM中得到类es细胞,共有68个形成类es细胞集落,es的细胞集落贴壁率为56.7%。实验比较了分别使用KSR和FBS对昆白小鼠类es细胞分离和传代培养的影响。结果表明,使用KSR可以促进昆白小鼠类es细胞生长的影响情况,并把昆白小鼠类es细胞传至18代,仍然保持多能性和正常二倍体核型。 2.比较了不同胎龄绵羊胚胎对绵羊类es细胞分离、克隆的影响。与桑椹胚和孵化胚相比,尽管囊胚的贴壁率（80.0%）比孵化胚的贴壁率（87.5%）略低,差异不显著（p＞0.05）,但囊胚的ICM增殖率（66.7%）和传代效果明显优于孵化胚（50.0%）和桑椹胚（19.0%）。结果表明,囊胚更适合于绵羊类es的分离、培养。 3.比较了不同饲养层对绵羊类es细胞分离、克隆的影响。分别以小鼠胎儿成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblast ,MEF）、绵羊胎儿成纤维细胞（Sheep embryonic fibroblast,SEF）为饲养层分离、培养绵羊类es细胞。结果表明,胚胎在这2种饲养层上的孵化率（69.2%;56.3%）和ICM贴壁率（61.5%;43.8%）,差异不显著;但在MEF上生长的绵羊类es细胞最高传至5代,而绵羊类es细胞在SEF上仅传至2代,这一结果表明MEF更适合于绵羊es细胞分离、培养。 4.以MEF为饲养层,分析血清替代品（Knockout serum replacement,KSR）和小鼠es细胞条件培养基（Embryonic stem cell conditioned medium,esCCM）单独或者联合应用对绵羊类es细胞分离克隆效率的影响,发现绵羊类es细胞在含相同体积分数FBS和KSR中分别传至3代和5代,而在含KSR和40%esCCM条件培养基里,可最高传至8代。表明KSR和esCCM单独或联合使用均能促进绵羊类es细胞分离与克隆,但以KSR和esCCM联合使用效果最佳。 5.对分离得到的绵羊和小鼠es细胞进行碱性磷酸酶染色（AKP）活性、es细胞特异性转录因子表达活性检测以及体外分化能力鉴定和核型分析,结果表明:所分离的绵羊和小鼠类es细胞的AKP染色呈强阳性,并能分别表达特异性转录因子OCT-4和Nanog;体外可自发分化成神经样和上皮样细胞等,将es细胞培养于无LIF的培养液中,得到了类胚体,说明所得到的绵羊和小鼠es细胞具有es细胞的典型特征;分别对其中的一株绵羊和小鼠类es细胞进行核性分析,其核型均表现为正常的二倍体核型。

关键词：绵羊昆白小鼠 es细胞小鼠es细胞条件培养基 KSR

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：