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对映-贝壳杉烷型二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病HL-60细胞分化的诱导作用

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中国药房 2016年第13期27卷 1771-1774页

作者：丁兰李佩蔚孔花青陈宗儒刘国安西北师范大学生命科学学院兰州730070

目的：研究对映-贝壳杉烷型二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病HL-60细胞分化的诱导作用。方法：采用台盼蓝染色法、吉姆萨染色法、NBT还原力测定法、荧光颗粒吞噬法及流式细胞术分别检测0（空白对照）、0.3、0.6、0.9、1.2μmol/L的Leuk... 详细信息

目的：研究对映-贝壳杉烷型二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病HL-60细胞分化的诱导作用。方法：采用台盼蓝染色法、吉姆萨染色法、NBT还原力测定法、荧光颗粒吞噬法及流式细胞术分别检测0（空白对照）、0.3、0.6、0.9、1.2μmol/L的Leukamenin E及1.2μmol/L全反式维甲酸（ATRA）作用于HL-60细胞24、48、72、96 h后对细胞数目的影响,以及作用72 h后细胞核形态、NBT还原能力（以NBT阳性细胞率计）、细胞吞噬能力（以荧光探针P的荧光强度计）以及细胞表面抗原CD11b表达的改变情况。结果：与空白对照比较,0.3-1.2μmol/L的Leukamenin E及1.2μmol/L的ATRA作用48、72、96 h后HL-60细胞数目减少,且作用72 h后带状核细胞和分叶状核细胞数目增加（P〈0.01）,细胞NBT阳性细胞率和细胞表面CD11b表达水平增加（P〈0.01）,P荧光强度增强。结论：Leukamenin E可诱导HL-60向成熟粒细胞分化,与白血病分化治疗剂ATRA具有相似的分化诱导特点。

关键词：对映-贝壳杉烷型二萜 Leukamenin E 人早幼白血病HL-60细胞分化

对映—贝壳杉烷型二萜Wangzaozin A对人肺腺癌A549细胞波形蛋白中间纤维的影响

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对映—贝壳杉烷型二萜Wangzaozin A对人肺腺癌A549细胞波形蛋白中...

作者：陈宗儒西北师范大学

学位级别：硕士

迄今为止,还没有发现对中间纤维有特异性抑制作用的小分子抑制剂,这导致了相关中间纤维的组装以及功能性方面研究的滞后性。并且现在的抗癌药物已经有了新的发展,已经从传统的细胞毒性药物向针对特定靶点或多靶点的新型抗肿瘤药物发展,... 详细信息

迄今为止,还没有发现对中间纤维有特异性抑制作用的小分子抑制剂,这导致了相关中间纤维的组装以及功能性方面研究的滞后性。并且现在的抗癌药物已经有了新的发展,已经从传统的细胞毒性药物向针对特定靶点或多靶点的新型抗肿瘤药物发展,而细胞骨架已成为肿瘤治疗中的新靶点。对映-贝壳杉烷二萜化合物是一类具有良好抗肿瘤活性的药物,但是,至今尚未见以细胞骨架为研究靶点的相关报道。本文以人非小肺腺癌细胞A549细胞为材料,以甘肃产拟缺香茶菜中分离得到的对映-贝壳杉烷二萜化合物Wangzaozin A为受试药物分别利用MTT法、台盼蓝排染法和流式细胞术检测了Wangzaozin A对A549细胞的生长影响;进一步通过间接免疫荧光技术和罗丹明标记的鬼笔环肽着色细胞的骨架结构,探索Wangzaozin A对A549细胞波形蛋白中间纤维的影响,其结果如下:1、采用台盼蓝排染法发现:1μM、2μM、4μM、6μM和8μM的Wangzaozin A对A549细胞有明显的生长抑制作用,且表现出剂量和时间依赖性,其中6μM的Wangzaozin A处理细胞后其生长完全被抑制并且8μM的时候已有致死效应。2、MTT法检测发现:1μM、2μM、4μM和6μM的Wangzaozin A对A549细胞24 h表现出较低的细胞毒性,8μM的Wangzaozin A对于细胞有较高的毒性作用。3、采用流式细胞术检测细胞凋亡发现:2μM、4μM和6μM的Wangzaozin A处理A549细胞后,90%以上的细胞均为正常细胞,说明在此浓度范围内细胞未发生凋亡。4、利用间接免疫荧光技术观察细胞在微丝和微管特异性抑制剂处理下其骨架结构的变化。结果发现:单独处理A549细胞时,4μg·m L-1细胞松弛素B、0.15μg·m L-1或者0.02μg·m L-1秋水仙素单独作用已铺展或铺展中的A549细胞时,可以解聚微丝微管,但是不影响波形蛋白中间纤维的组装;4μg·m L-1细胞松弛素B、0.15μg·m L-1或者0.02μg·m L-1秋水仙素联合处理已铺展或铺展中的A549细胞,微丝、微管骨架机构都出于解聚状态,但是对于波形蛋白中间纤维基本上没有影响。表明A549细胞波形蛋白中间纤维组装可不依赖微丝和微管结构。5、2μM、4μM和6μM或者高浓度(15μM和20μM)的Wangzaozin A处理已铺展的或者铺展过程中的A549细胞后发现:Wangzaozin A作用A549细胞24 h后,细胞胞质中的波形蛋白中间纤维随着药物浓度的增加逐渐向核的一侧聚集,并且波形蛋白纤维明显减少,而流式细胞仪检测发现其含量基本没变化;在正铺展的细胞中,Wangzaozin A对A549细胞中的波形蛋白中间纤维具有明显的组装抑制作用。表明化合物Wangzaozin A对A549细胞波形蛋白中间纤维有抑制作用,并且这种抑制作用是直接的而不是间接的。6、4μg·m L-1细胞松弛素B和0.15μg·m L-1秋水仙素分别与2μM、4μM和6μM的Wangzaozin A联合作用A549细胞,更进一步证明了Wangzaozin A对A549细胞波形蛋白中间纤维有抑制作用。7、2μM、4μM和6μM的Wangzaozin A处理A549细胞24 h,A549细胞中的应力纤维和片状伪足基本上完整,而丝状伪足却消失不见。说明Wangzaozin A对丝状伪足的解聚有可能是因为胞质内的波形纤维解聚所引起的,即Wangzaozin A对波形蛋白中间纤维的抑制作用引起了丝状伪足的解聚。然而,2μM和4μM的Wangzaozin A对A549细胞微管的组装没有影响,但是6μM的Wangzaozin A对于细胞的微管具有明显的影响,说明微管与波形蛋白中间纤维之间有一定的联系,可能是因为波形蛋白的组装改变引起了微管的重排。8、通过细胞抽提建立胞外体系下的波形蛋白纤维,之后加入15μM和20μM的Wangzaozin A处理波形蛋白纤维,发现药物对其没有切割作用。综上所述,2μM的Wangzaozin A对于A549细胞中的波形蛋白中间纤维有显著的直接组装抑制作用。因此,Wangzaozin A可能是一种潜在的相对于波形蛋白具有特异性组装抑制作用的小分子抑制剂,且这种组装抑制可能具有特异性,但其特异性还需进一步研究证实。

关键词：对映-贝壳杉烷型二萜 Wangzaozin A A549细胞波形蛋白中间纤维微丝微管

对映—贝壳杉烷型二萜Wangzaozin A抗血管形成活性的研究

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对映—贝壳杉烷型二萜Wangzaozin A抗血管形成活性的研究

作者：薛莹西北师范大学

学位级别：硕士

近年来,恶性肿瘤的发病率呈现上升趋势。随着社会经济发展和人民生活水平提高,饮食结构改变以及人口老龄化、城市化,我国的疾病谱和死亡谱发生显著变化,慢性非传染性疾病已经成为导致死亡的主要原因。其中,恶性肿瘤是目前全世界的主要... 详细信息

近年来,恶性肿瘤的发病率呈现上升趋势。随着社会经济发展和人民生活水平提高,饮食结构改变以及人口老龄化、城市化,我国的疾病谱和死亡谱发生显著变化,慢性非传染性疾病已经成为导致死亡的主要原因。其中,恶性肿瘤是目前全世界的主要死亡原因之一,已经成为严重危害人类生命健康、制约社会经济发展的一大类疾病。目前对于恶性肿瘤的治疗主要是通过手术、放疗、化疗进行,但恶性肿瘤会发生转移的特性是导致治疗失败和患者死亡的主要原因。目前没有理想的治疗手段可以彻底清除体内的癌细胞,所以,抑制肿瘤的恶化转移对于肿瘤的治疗是极为重要的。随着对肿瘤病理机制的深入了解,抗血管治疗已成为当前肿瘤治疗研究的热点。肿瘤的发生、发展和侵袭与血管生成密切相关,特别是转移病灶更依赖血管新生的作用。因此,寻找低毒、高效、特异性强的血管抑制剂对于控制恶性肿瘤有重要意义。香茶菜属植物在我国种类繁多,分布广泛,在民间作为药用历史悠久,具有清热解毒、活血化淤、抗菌消炎、抗肿瘤、治疗各种肝炎等多种活性。研究表明,对映-贝壳杉烷型二萜类化合物是香茶菜属植物中最具典型特征的化学成分,该类化合物含量丰富,是香茶菜属植物中主要的活性成分。Wangzaozin A就是其中之一,研究显示Wangzaozin A具有良好的抗肿瘤活性,但关于其抗血管新生的研究未见报道。本论文以人脐静脉内皮细胞HUVECs(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)为受试细胞,血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)作为模拟肿瘤内环境中的刺激因子建立体外模型,MTT法和台盼蓝排染法检测了Wangzaozin A对HUVECs细胞生长抑制作用,流式细胞术检测对细胞周期分布的影响;划痕法、transwell法检测化合物对细胞迁移、浸润的影响,并在荧光染色后观察化合物伪足的形成的作用;利用matrigel(人工基质胶)进行三维培养观察化合物对网状结构形成的影响;并用western blotting法检测了Notch信号通路蛋白Notch1、RBP-Jκ、Hes1的表达水平。同时,以鸡胚绒毛尿囊膜模型进行体内实验,观察Wangzaozin A对血管新生的整体作用。主要结果如下:1.MTT法及台盼蓝排染法结果显示:Wangzaozin A对HUVECs具有生长抑制作用,随着处理浓度增大,抑制作用增强,IC0为4.21μM(MTT法)、2.09μM(台盼蓝排染法),且在相同剂量下这种抑制作用比对肺癌细胞A549(IC0为6.21μM)强。2.流式细胞术检测细胞周期结果显示:不同浓度的Wangzaozin A可在不同程度上将HUVECs的细胞周期阻滞在S期,且未检测到凋亡峰。划痕实验表明,Wangzaozin A可抑制VEGF诱导的HUVECs细胞的迁移活动,且此作用存在剂量效应。3.浸袭实验结果显示:VEGF可诱导HUVECs细胞活化,并通过水解基底膜发生浸润,Wangzaozin A会阻遏这一过程,并且随浓度增大,转移的细胞数目减小。4.血管网状结构形成实验结果显示:HUVECs细胞在matrigel内可形成连续的网管状结构,经Wangzaozin A处理后的细胞在matrigel中成管能力下降,且浓度越高,管状结构越不完整。5.微丝染色观察伪足发现:VEGF可诱导HUVECs伸出大量伪足,且在相邻细胞间形成连接,不同浓度Wangzaozin A不同程度地阻断伪足的形成,继而影响HUVECs的迁移及浸润过程,这一作用呈浓度依赖性。6.Western blotting实验结果显示:高浓度Wangzaozin A对Notch信号通路有正调控作用,可以上调Notch1、RBP-Jκ及Hes1的表达。7.鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型中,经Wangzaozin A处理后鸡胚绒毛尿囊膜血管发育受抑制甚至不发育,不能形成健康连续的血管,说明中、高剂量组Wangzaozin A有抑制CAM血管形成的作用。Wangzaozin A可以破坏鸡胚绒毛尿囊膜血管网络的形成;细胞学和蛋白表达研究表明,它可抑制HUVECs细胞的增殖,并能通过上调Notch信号通路,抑制内皮细胞迁移、浸袭和网状结构的形成这可能是其发挥抑制血管生成的机制。这一结果为Wangzaozin A在以血管生成为靶点的治疗提供理论依据。

关键词：对映-贝壳杉烷型二萜 Wangzaozin A 血管新生抑制 HUVECs CAM

对映—贝壳杉烷型二萜Weisiensin B对人脑胶质瘤U87细胞生长抑制、分化诱导作用的研究

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对映—贝壳杉烷型二萜Weisiensin B对人脑胶质瘤U87细胞生长抑制...

作者：李杰林西北师范大学

学位级别：硕士

脑胶质瘤是颅内最常见的原发性肿瘤,手术、化疗及放疗对脑胶质瘤的治疗效果不明显。诱导分化疗法是一种新的治疗肿瘤的疗法,在不杀伤正常细胞的前体下,诱导肿瘤细胞向正常或接近正常的细胞分化,此法具有用药剂量小,毒副作用低等优势,因... 详细信息

脑胶质瘤是颅内最常见的原发性肿瘤,手术、化疗及放疗对脑胶质瘤的治疗效果不明显。诱导分化疗法是一种新的治疗肿瘤的疗法,在不杀伤正常细胞的前体下,诱导肿瘤细胞向正常或接近正常的细胞分化,此法具有用药剂量小,毒副作用低等优势,因此,寻找高效、低毒的诱导分化剂对治疗脑胶质瘤具有重要的意义。香茶菜属植物是民间传统的中草药,具有抗菌、抗肿瘤和抗氧化等多种药理作用。从香茶菜属植物中分离出多种化合物,其中对映-贝壳杉烷型二萜化合物的含量极为丰富,为主要次生代谢产物。研究证实,此类化合物具有多种生理活性,在抗肿瘤方面表现出很大的潜力。Weisiensin B是从维西香茶菜中分离得到的对映-贝壳杉烷型二萜化合物,研究显示该化合物有较强的细胞毒性,但其抗癌活性的机理却仍不明确,需进一步研究。目前,有关Weisiensin B对U87细胞诱导分化的研究尚未见文献报道。本文以人脑胶质瘤U87细胞为受试细胞。利用台盼蓝排染法和MTT法检测了Weisiensin B对U87细胞的生长抑制作用,用流式细胞术检测化合物对U87细胞周期分布的影响;用显微镜观察以及吉姆萨染色法研究Weisiensin B对细胞形态的影响;利用间接免疫荧光和荧光染色法,观察化合物对细胞内GFAP和Vimentin含量的影响以及对微丝、微管骨架重排的作用。主要结果如下:(1)台盼蓝排染法及MTT检测结果显示:Weisiensin B对U87细胞具有明显的生长抑制作用,随着药物浓度的增强,以及作用时间的延长,对细胞的生长抑制作用也逐渐增强,表现出浓度和时间依赖性。(2)倒置显微镜观察细胞形态以及吉姆萨染色法显示,Weisiensin B作用后U87细胞形态发生了改变,对照组细胞呈短梭形,两边有短的突起,细胞核质比大。化合物处理后,细胞体积变大,细胞核变小,细胞核质比减小,突起变长。高浓度处理组此现象更明显。表明化合物处理后细胞向星形细胞的方向分化。(3)PI染色后流式细胞仪检测细胞周期分布,结果显示,不同浓度的Weisiensin B处理U87细胞48h和72h后,可引起细胞G0/G1期周期阻滞,并具有浓度依赖性,但未检测到凋亡峰。AO/EB双染荧光显微镜观察结果也显示在药物浓度范围内并未引起细胞凋亡发生。(4)划痕法检测U87细胞迁移的结果显示,Weisiensin B对U87细胞的迁移能力具有明显的抑制作用,随着浓度升高、作用时间延长抑制作用也越明显,表现出时间-剂量效应。(5)免疫荧光染色显微镜观察及流式细胞术检测表明,Weisiensin B处理U87细胞后,可引起细胞内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)含量的增加,并降低细胞内波形蛋白(Vimentin)的含量,且其变化具有浓度依赖性。此结果说明Weisiensin B可诱导U87细胞向成熟的星形胶质细胞方向分化。(6)罗丹明标记的鬼笔环肽及免疫荧光染色观察表明,Weisiensin B对U87细胞中的微丝骨架具有解聚作用,且具有浓度依赖性。Weisiensin B对U87细胞中微管骨架的重排有影响,对照组中微管蛋白主要分布在细胞边缘,细胞内微管蛋白较少,药物处理后细胞内微管蛋白向核周聚集,细胞内部微管增多。结果表明化合物可引起U87细胞骨架发生一定的改变,这可能与细胞分化过程中细胞形态的变化有关。(7)DCFH-DA染色后荧光显微镜观察以及流式细胞术检测细胞内ROS,结果表明,化合物可引起U87细胞内ROS含量增多,且ROS增加与药物浓度呈正相关,药物作用时间加长,细胞内ROS的量也增多。综上所述,Weisiensin B可引起U87细胞形态变化,将细胞周期阻滞在G0/G1期,进而抑制细胞生长。进一步研究发现,化合物可引起细胞内GFAP的含量的增加,并使Vimentin的含量降低,诱导细胞向正常胶质细胞分化。可引起细胞内微管的重排以及微丝的解聚。本研究首次检测Weisiensin B对U87诱导分化的影响,为进一步探明该药物抗癌作用机制提供一定的依据。

关键词：对映-贝壳杉烷型二萜 Weisiensin B 生长抑制周期阻滞分化 ROS

对映—贝壳杉烷型二萜Leukamenin E诱导人宫颈癌细胞Hela的分化及骨架的重排

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对映—贝壳杉烷型二萜Leukamenin E诱导人宫颈癌细胞Hela的分化及...

作者：何苗西北师范大学

学位级别：硕士

癌症是威胁人类健康的重大疾病之一，化疗和手术治疗是治疗癌症的主要手段。诱导肿瘤细胞分化成为新型的肿瘤治疗手段。与传统的肿瘤治疗方式相比，具有用药剂量小，毒副作用低等优势。香茶菜属植物在我国分布广泛，种类繁多，其中有3... 详细信息

癌症是威胁人类健康的重大疾病之一，化疗和手术治疗是治疗癌症的主要手段。诱导肿瘤细胞分化成为新型的肿瘤治疗手段。与传统的肿瘤治疗方式相比，具有用药剂量小，毒副作用低等优势。香茶菜属植物在我国分布广泛，种类繁多，其中有30多种作为民间药用植物;香茶菜属植物中对映-贝壳杉烷型二萜化合物的含量极为丰富，为主要次生代谢产物。据报道，它们均具有良好的抗肿瘤作用。目前，有关Leukamenin E诱导Hela细胞分化，Leukamenin E对人宫颈癌细胞Hela骨架的影响研究尚未见文献报道。本文以对映-贝壳杉烷型二萜Leukamenin E(甘肃产拟缺香茶菜中分离得到)为受试药物，以人宫颈癌Hela细胞为受试对象。用台盼蓝排染法检测了该化合物对Hela细胞的生长抑制作用，并对该化合物对细胞周期的影响进行了研究;同时，利用平板集落形成，测定碱性磷酸酶、吉姆萨染色法研究Leukamenin E对Hela细胞的分化诱导情况;最后，利用间接免疫荧光和荧光染色法，观察该化合物对Hela细胞微丝、微管和角蛋白中间纤维骨架重组及含量的影响。主要结果如下：（1）台盼蓝排染法结果显示：Leukamenin E对Hela细胞有较明显的生长抑制作用，并且表现出浓度和时间依赖性。在同一时间，不同浓度下，随着浓度的升高，生长抑制作用逐渐增强。（2）平板集落形成能力的检测：Leukamenin E对Hela细胞集落形成能力有明显抑制作用，并且在不同浓度之间存在显著差异。（3）倒置显微镜观察细胞形态的变化：对照组细胞形态正常，无明显改变，排列密集，仅见少许漂浮的细胞。随着药物浓度的升高，细胞数量依次减少并呈现出时间和浓度依赖性，细胞排列稀疏，形状变的不规则，伸出长的不规则的突起，培养液中有许多漂浮的呈桑葚样细胞。（4）吉姆萨染色法结果显示：Leukamenin E对细胞核形态有明显影响，细胞核形态类似肾形，同时，与对照相比，细胞核的体积变小，核浆比值下降，并且随着药物浓度的升高和时间的延长，此现象愈加越明显，同时胞质中出现可见的小空泡。（5）流式细胞术检测结果显示：Leukamenin E对Hela细胞的周期有阻滞作用。在48h和72h后以G1期阻滞为主，S期细胞含量略有下降。（6）活性氧的变化：随着Leukamenin E浓度的升高，细胞内活性氧(ROS)含量增加，说明活性氧增加是启动细胞分化的事件之一。（7）碱性磷酸酶活性的变化：Hela细胞经不同浓度Leukamenin E处理之后，碱性磷酸酶活性显著升高，与对照组相比，存在显著差异。（8）划痕法观察Hela细胞迁移的结果显示：Leukamenin E对Hela细胞的迁移有明显的抑制作用，且浓度越高，抑制作用越明显。在最高浓度时，细胞的迁移已经完全被抑制。（9）罗丹明标记的鬼笔环肽对微丝染色结果显示：Leukamenin E对Hela细胞中微丝骨架具有解聚作用，并且具有浓度依赖性。对照组细胞胞质中应力纤维含量丰富，平行的应力纤维束排布杂乱。在较低浓度时，应力纤维的排布与对照相比变得整齐，成为平行的束状纤维，沿细胞纵轴平行排列。随着浓度的升高，应力纤维的分布变得不均匀，并且含量明显减少，在最高浓度时，应力纤维基本消失。（10）免疫荧光技术观察微管骨架结果显示：Leukamenin E对Hela细胞中微管骨架在细胞中的排布有明显的影响。微管在对照组细胞中均匀分布，加药处理后，总体趋势是向核周聚集，并且时间越长，浓度越高，聚集现象越明显，在核周形成荧光强度较强的斑状区域，微管从核周开始，向四周发射。（11）免疫荧光技术观察角蛋白中间纤维骨架结果显示：Leukamenin E对Hela细胞中角蛋白中间纤维骨架在细胞中的排布有明显的影响。角蛋白中间纤维在对照组细胞中均匀分布，在低浓度条件下，没有发生变化。在较高浓度条件下，角蛋白中间纤维在细胞中发生了重排，总体趋势是向核周聚集，并且时间越长，浓度越高，聚集现象越明显，在核周聚集形成荧光亮斑，角蛋白中间纤维从核周开始，向四周发射，明显发生了重排。（12）流式细胞术检测细胞中三种骨架含量的结果显示：Leukamenin E对Hela细胞的三种骨架含量都有不同的影响。随着药物浓度的升高，微丝的含量明显减少，微管和角蛋白的含量增多。

关键词：对映-贝壳杉烷型二萜 Leukamenin E Hela细胞分化微丝微管角蛋白中间纤维

细叶香茶菜中两个新的对映-贝壳杉烷二萜化合物(英文)

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Acta Botanica Sinica 2002年第4期44卷 477-480页

作者：纳智姜北牛雪梅林中文李朝明孙汉董中国科学院昆明植物研究所植物化学开放研究实验室昆明650204

从云南中甸产细叶香茶菜 (Isodontenuifolia (W .W .Smith)Kudo)的地上部分分离得到 6个化合物 ,它们的结构通过波谱方法得到鉴定。其中化合物 1和 2为新的对映_贝壳杉烷二萜化合物 ,即细叶香茶菜甲素 (3β ,6α ,15 β_trihydroxy_1α... 详细信息

从云南中甸产细叶香茶菜 (Isodontenuifolia (W .W .Smith)Kudo)的地上部分分离得到 6个化合物 ,它们的结构通过波谱方法得到鉴定。其中化合物 1和 2为新的对映_贝壳杉烷二萜化合物 ,即细叶香茶菜甲素 (3β ,6α ,15 β_trihydroxy_1α ,7β_diacetoxy_11β ,16 β_epoxy_ent_kaurane) (1)和细叶香茶菜乙素 (1α,6α ,11β_trihydroxy_3β,7β_diacetoxy_ent_kaur_16_en_15_one) (2 )。

关键词：细叶香茶菜唇形科对映-贝壳杉烷型二萜细叶香茶菜甲素细叶香茶菜乙素对映-贝壳杉烷二萜化合物

牛尾草中一新的对映-贝壳杉烷型二萜(英文)

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云南植物研究 2002年第2期24卷 267-272页

作者：纳智项伟赵勤实梅双喜李朝明林中文孙汉董中国科学院昆明植物研究所植物化学开放研究实验室云南昆明650204

从牛尾草 [Isodonternifolius (D .Don)Kudo]的地上部分分离得到一个新的对映 -贝壳杉烷型二萜 ,命名为牛尾草素H (1) ,通过波谱方法鉴定了它的结构。此外 ,还分离得到 5个已知的对映 -贝壳杉烷型二萜化合物 :香茶菜醛 (2 ) ,长管香茶菜... 详细信息

从牛尾草 [Isodonternifolius (D .Don)Kudo]的地上部分分离得到一个新的对映 -贝壳杉烷型二萜 ,命名为牛尾草素H (1) ,通过波谱方法鉴定了它的结构。此外 ,还分离得到 5个已知的对映 -贝壳杉烷型二萜化合物 :香茶菜醛 (2 ) ,长管香茶菜素A ,E和G (3- 5 ) ,开展香茶菜素E (6 ) ,以及木樨草素 (7) ,芹菜素 (8) ,α -香树脂醇 (9) ,乌索酸 (10 )和2α -羟基乌索酸 (11)。

关键词：牛尾草对映-贝壳杉烷型二萜唇形科牛尾草素H

Rabdosin B对急性早幼粒白血病细胞HL-60分化的诱导作用

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中草药 2018年第11期49卷 2591-2600页

作者：魏婧昕丁兰刘扬李佩蔚刘国安西北师范大学生命科学学院甘肃兰州730070

目的研究螺环内酯型对映-贝壳杉烷型二萜rabdosin B(RB)诱导HL-60向成熟粒细胞分化的特征及机制。方法采用台盼蓝染色、吉姆萨染色、硝基四氮唑蓝(NBT)还原力测定及流式细胞术检测RB对HL-60细胞增殖、细胞周期、NBT还原力、细胞吞噬及... 详细信息

目的研究螺环内酯型对映-贝壳杉烷型二萜rabdosin B(RB)诱导HL-60向成熟粒细胞分化的特征及机制。方法采用台盼蓝染色、吉姆萨染色、硝基四氮唑蓝(NBT)还原力测定及流式细胞术检测RB对HL-60细胞增殖、细胞周期、NBT还原力、细胞吞噬及细胞表面抗原CD11b表达的影响。结果 RB在1.0、3.0、5.0μmol/L下抑制HL-60细胞增殖,引起HL-60细胞G0/G1期阻滞,增加HL-60细胞肾形核和分叶核细胞比率,并伴随细胞NBT还原力和吞噬能力显著增强以及CD11b阳性细胞率明显上升。进一步检测显示,活性氧(ROS)清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,300μmol/L)及NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素(APO,100μmol/L)和二联苯碘锚(DPI,0.1μmol/L)不仅可显著抑制RB诱导的细胞内ROS升高,并且可显著抑制RB诱导的HL-60细胞分化的各项特征指标的改变。结论 RB可通过上调HL-60细胞NADPH氧化酶活性,升高胞内ROS浓度,诱导HL-60细胞向成熟粒细胞分化。

关键词：对映-贝壳杉烷型二萜 rabdosin B HL-60细胞细胞分化 NADPH氧化酶

瑞香狼毒愈创木烷型和贝壳杉烷型萜类合成酶的功能表征及应用

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瑞香狼毒愈创木烷型和贝壳杉烷型萜类合成酶的功能表征及应用

作者：李林昇暨南大学

学位级别：硕士

萜类化合物,作为自然界广泛存在的代谢产物,其基本骨架由异戊二烯五碳单元所构成。许多植物源萜类化合物具有很好的生物活性,被广泛用于药品和功能食品。瑞香狼毒（Stellera chamaejasme L.）系瑞香科瑞香属植物,是中药狼毒的基原植物... 详细信息

萜类化合物,作为自然界广泛存在的代谢产物,其基本骨架由异戊二烯五碳单元所构成。许多植物源萜类化合物具有很好的生物活性,被广泛用于药品和功能食品。瑞香狼毒（Stellera chamaejasme L.）系瑞香科瑞香属植物,是中药狼毒的基原植物之一。药用部位为其干燥根,其味辛性平,具有清热解毒、消肿泄炎、去腐生肌等功效。瑞香狼毒中的萜类化合物具有很好的抗癌、抗HIV等活性,其中包括挥发性的愈创木烷型倍半萜化合物。然而,目前尚未见瑞香狼毒中这些化合物的生物合成研究报道。本文对瑞香狼毒中萜类化合物生物合成的研究结果如下:对瑞香狼毒花的转录组数据进行挖掘,筛选出五条候选萜类合成酶基因,分别命名为Sch TPS1、Sch TPS15、Sch TPS16、Sch TPS26和Sch TPS28。通过合成生物学技术和体外酶促反应表征了以上萜类合成酶的功能。其中Sch TPS15、Sch TPS16和Sch TPS26为愈创木烯合成酶,Sch TPS1为对映-贝壳杉烯合成酶,Sch TPS28为一个未知的二萜合成酶。通过在酿酒酵母中共表达Sch TPS16和?-愈创木烯-2-氧化酶Vv STO2,首次构建莎草薁酮的工程菌。本研究为从分子层面阐明瑞香狼毒中愈创木烷型和贝壳杉烷型萜类成分的生物合成提供了科学依据;同时为用合成生物学技术制备相应萜类化合物奠定了基础。

关键词：瑞香狼毒对映-贝壳杉烷型二萜愈创木烷型倍半萜萜类合成酶莎草薁酮工程菌