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杨梅素通过调节脂解途径减少局部脂肪

杨梅素通过调节脂解途径减少局部脂肪

作者：党梦瑶兰州大学

学位级别：硕士

目的：注射溶脂是?种治疗局部?下脂肪堆积的有效?法，其代表药物脱氧胆酸常常会导致不良反应，如疼痛、肿胀、硬结及麻?，甚?包括神经受损、吞咽困难、?管事件、中性粒细胞性?肤病、寻麻疹等复杂的不良反应，这在?定程度上限制了其应?... 详细信息

目的：注射溶脂是?种治疗局部?下脂肪堆积的有效?法，其代表药物脱氧胆酸常常会导致不良反应，如疼痛、肿胀、硬结及麻?，甚?包括神经受损、吞咽困难、?管事件、中性粒细胞性?肤病、寻麻疹等复杂的不良反应，这在?定程度上限制了其应?和普及。有实验研究表明，杨梅素与脂肪代谢可能相关。本研究结合?络药理学及动物实验两部分研究杨梅素是否能减少?下局部脂肪及可能的机制。　　方法：　　假设杨梅素有影响脂肪代谢的作?，并从Pubchem数据库中获取杨梅素的靶标，构建杨梅素基因集，利?PPI?络进?可视化;通过GO和KEGG分析作?靶点的基因功能和信号通路;将肥胖相关基因集和脂肪代谢通路的基因集对?综合分析，预计他们是否具有相关性。　　5周龄，体重16.0±4.0g，SPF级雄性c57??36只，随机计数表法分置9笼，适养1周后建???肥胖模型。1-8笼?含60%猪油的?脂饲料喂养（32只），9号笼采取普通饲料喂养（4只）。经过8周饲料调节，?脂饲料饲养??平均体重较普通饲料显著增加20%，即表明肥胖??模型构建完成。随后将1-8号笼??分为4组，每组8只，包括?理盐?组（NS组）、MyR1组（MyR1.0mg/mL）、MyR3组（MyR3.0mg/mL）和MyR5组（MyR5.0mg/mL），MyR组分别向左侧腹股沟脂肪注射1.0、3.0和5.0mg/mL杨梅素0.1mL，右侧腹股沟脂肪注射等量的?理盐?作为?身对照。NS组两侧腹股沟脂肪均注射?理盐?0.1mL。注射频率为每周3次，共4周。最后?次注射结束，称取??体重，解剖获取??腹股沟脂肪组织并称重。HE染?观察记录脂肪细胞形态，Image J V1.8软件测量脂肪细胞直径。ELISA法检测脂肪组织中相关代谢蛋?PLIN1、SIRT1、ATGL的表达。?油试剂盒检测?油三酯含量评估脂肪分解效果。计量资料以平均值±标准差表示，对照侧与处理侧间?较采取配对分析，不同组之间数据差异采?单因素?差分析（ANOVA分析），?差分析后进?多重检验。SPSS 26.0软件对所收集数据进?详尽的统计学分析。当P＜0.05时说明具有统计学差异，P＜0.01说明差异?常显著。　　结果：　　?络药理学分析结果：筛选出100个基因靶点，通过STRING数据库构建100个节点和742个连线的PPI可视?络图。GO分析表明杨梅素靶点与蛋?磷酸化、?解酶、蛋?激酶等相关。KEGG通路分析表明杨梅素与细胞周期和细胞代谢通路相关。将杨梅素?络与GeneCards和DisGenet数据库及?者合并构建的肥胖基因集?较，发现共享基因占杨梅素基因集的91%、61%和92%。通过Pathcards数据库构建脂肪代谢基因集，与杨梅素基因集对?，共享基因占杨梅素基因集的16%。以上均表明杨梅素与肥胖和脂肪代谢具有关联。　　肥胖??模型建?：适应性喂养结束后，?脂饮?组和普通饮?组??平均体重相同（Pgt;0.05）。?脂饲料饲养5周后??平均体重?于普通饲料饲养的??（Plt;0.05）。在第8周，?脂饲料喂养的??平均体重较普通饲料组显著增加21%。肥胖??模型成果建?。　　腹股沟脂肪重量：MyR1组、MyR3组、MyR5组杨梅素处理侧的脂肪重量分别为47.0±12.2mg，55.2±12.4mg，68.3±12.8mg（Pgt;0.05），较?身对照侧分别减少了25.8%、17.7%、24.0%（Plt;0.05），较NS组分别减少46.8%、37.5%、22.7%（Plt;0.05）。NS组的两侧脂肪重量为88.3±26.3mg和89.3±19.1mg（Pgt;0.05）。MyR3组和MyR5组的对照侧较NS组分别减少29.0%、24.6%（Plt;0.05）。　　组织学变化：MyR1组、MyR3组、MyR5组杨梅素处理侧脂肪细胞平均直径分别为75.67±15.24μm，80.16±10.83μm，89.18±9.57μm（Pgt;0.05），较对照侧减少31.2%、29.8%、21.0%（Plt;0.05），较NS组减少33.7%、29.7%、21.8%（Plt;0.05）。NS组两侧平均直径分别为114.07±15.38μm，116.5±23.29μm（Pgt;0.05）。四组对照侧平均直径?明显差异（Pgt;0.05）。　　?油三酯检测：MyR3组和MyR5组的杨梅素处理侧?油三酯含量分别为16.76±3.03mg/g、16.24±0.22mg/g（Pgt;0.05)，较对照侧减少19.8%、13.4%（Plt;0.05），且低于MyR1组与NS组（Plt;0.05）。MyR1组和NS组两侧含量?明显差异（Pgt;0.05）。四组对照侧含量?明显差异（Pgt;0.05）。　　相关代谢蛋?表达：MyR1组、MyR3组、MyR5组杨梅素处理侧PLIN1均低于对照侧（Plt;0.05），且MyR5组低于MyR1组和MyR3组

关键词：杨梅素注射溶脂局部脂肪实验药理

消退素D1对IL-1β诱导的大鼠髁突软骨细胞炎症反应的影响

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消退素D1对IL-1β诱导的大鼠髁突软骨细胞炎症反应的影响

作者：李思兰州大学

学位级别：硕士

目的：　　以软骨退变为主要特征的颞下颌关节骨关节炎属于口腔颌面部常见的炎性疾病之一。消退素 D1（RvD1）具有明显的炎症消退和刺激组织修复作用。本实验主要研究 RvD1 对大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞炎性及软骨代谢因子的调节作用... 详细信息

目的：　　以软骨退变为主要特征的颞下颌关节骨关节炎属于口腔颌面部常见的炎性疾病之一。消退素 D1（RvD1）具有明显的炎症消退和刺激组织修复作用。本实验主要研究 RvD1 对大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞炎性及软骨代谢因子的调节作用及其可能的机制。　　方法：　　（1）提取6周龄SD雄性大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞（MCCs），并使用Col2、Col1免疫荧光染色法及甲苯胺蓝染色法进行细胞鉴定;（2）使用不同浓度的大鼠白介素-1β（IL-1β）重组蛋白刺激MCCs细胞炎症反应，使用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测各分组MCCs的炎症基因及软骨代谢相关基因的表达，确定药物作用时间及浓度;（3）按照RvD1的不同作用条件将实验分为三组，即预处理组、治疗组1及治疗组2，使用qRT-PCR检测炎症相关基因、软骨分解及合成代谢相关基因的表达;（4）使用western blot、免疫荧光染色等方法，检测PI3K-AKT、NF-κB信号通路相关蛋白的表达情况，探究RvD1对MCCs调节作用的可能机制。　　结果：　　（1）Col2免疫荧光强阳性及甲苯胺蓝染色阳性说明该细胞具有透明软骨细胞特性，证明所提取的细胞为大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞。细胞在培养早期呈现多角形、短梭形，但随着传代进行，MCCs向“成纤维表型”发展，出现去分化现象;（2）CCK8结果显示0-100 ng/mL IL-1β作用24小时，对MCCs无毒性作用，qRT-PCR结果显示使用10 ng/mL IL-1β作用于MCCs 24小时可以上调炎症相关基因及软骨分解代谢相关基因的表达，而下调软骨合成代谢相关基因;（3）在治疗组中，RvD1可以下调炎症相关基因及软骨分解代谢相关基因的表达，但对软骨合成相关基因的作用并不明显，并且治疗组1中低浓度RvD1即可表现出上述作用，治疗组2只能在高浓度才可以发挥作用。而在预处理组中，amp;nbsp;RvD1几乎不能逆转IL-1β上调炎症相关基因及软骨分解代谢相关基因的表达，而下调软骨合成代谢相关基因的作用;（4）Western blot及免疫荧光染色结果显示：IL-1β促进NF-κB p65的磷酸化，并促进其向细胞核内转位，而RvD1对NF-κB通路具有调节作用，可以通过对该通路的抑制来影响软骨细胞炎症及分解代谢过程，并且该抑制作用与浓度梯度有关，表明 RvD1 通过抑制 NF-κB 通路对软骨细胞的起到了保护作用，对软骨组织退变进程起到延缓作用。并且IL-1β可以促进AKT的表达及PI3K的磷酸化，激活PI3K-AKT信号通路，而RvD1对该通路具有一定的抑制作用，从而影响软骨细胞炎症及软骨分解代谢过程。　　结论：　　（1）治疗组1、2对颞下颌关节髁突软骨细胞炎症反应的消退作用比预处理组RvD1的消退作用好;（2）RvD1 能抑制 IL-1β 对 MCCs 软骨分解代谢及炎性相关因子的刺激作用，并且该抑制作用可能与NF-κB、PI3K-AKT信号通路有关。

关键词：颞下颌关节骨关节炎消退素D1 炎症消退组织修复实验药理

红景天苷对重症急性胰腺炎大鼠保护作用的机制研究

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红景天苷对重症急性胰腺炎大鼠保护作用的机制研究

作者：肖丹阳兰州大学

学位级别：硕士

目的：探讨红景天苷对重症急性胰腺炎大鼠的保护作用以及其可能的作用机制。　　方法：将30只健康雄性Wistar大鼠分为假手术组（Sham组）、模型组（SAP组）和红景天苷治疗组（Sal组），每组10只。用3.5%水合氯醛诱导麻醉后，假手术组大... 详细信息

目的：探讨红景天苷对重症急性胰腺炎大鼠的保护作用以及其可能的作用机制。　　方法：将30只健康雄性Wistar大鼠分为假手术组（Sham组）、模型组（SAP组）和红景天苷治疗组（Sal组），每组10只。用3.5%水合氯醛诱导麻醉后，假手术组大鼠开腹经胰管缓慢逆行注射生理盐水，模型组大鼠经胰管缓慢逆行注射5%牛黄胆酸钠建立SAP大鼠模型，治疗组大鼠在重症急性胰腺炎模型基础上腹腔注射红景天苷溶液（60mg/kg）。各组大鼠经相应处理后，于术后24小时处死，采集血液，离心后收集血清，并用ELISA法检测大鼠血清淀粉酶、IL-1β、IL-6以及TNF-α水平;采集各组大鼠胰腺组织，一部分用于HE染色及免疫组织化学法检测，于光学显微镜下观察胰腺组织病理学变化及胰腺组织NLRP3、Caspase-1蛋白阳性表达。另一部分用于蛋白印迹法检测大鼠胰腺组织中NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1p10、Caspase-1p12的蛋白相对表达水平。　　结果：①SAP组、Sal组大鼠血清AMY水平较Sham组显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）;Sal组大鼠血清AMY水平较SAP组明显降低（P＜0.05）;②SAP组、Sal组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均较Sham组明显升高，差异均具有统计学意义（P＜0.05）;Sal组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均较SAP组显著降低（P＜0.05）。③蛋白印迹法测SAP组、Sal组大鼠胰腺组织NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1 p10、Caspase-1p12蛋白表达均较Sham组明显增加，差异均具有统计学意义（P＜0.05）;治疗性给药后，Sal组大鼠胰腺组织NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1 p10、Caspase-1p12蛋白表达均较SAP组显著降低（P＜0.05）。④胰腺组织病理形态学改变：与Sham组相比较，SAP组、Sal组大鼠胰腺组织损伤均明显加重，以SAP组为著;治疗性给药后，Sal组大鼠胰腺组织损伤程度较SAP组明显减轻。具体表现为：Sham组大鼠胰腺组织细胞形态基本正常，组织结构清晰;SAP组大鼠胰腺组织间质水肿，实质结构破坏，大量炎症细胞浸润，局部组织坏死;治疗性给药后，Sal组大鼠胰腺组织实质结构较清晰，间质水肿程度及炎症细胞浸润程度与SAP组相比均显著减轻。⑤胰腺组织免疫组织化学法检测结果：与Sham组相比，SAP组、Sal组大鼠胰腺组织中NLRP3和Caspase-1蛋白阳性表达明显增多（P＜0.05）;与SAP组相比较，Sal组大鼠胰腺组织中NLRP3和Caspase-1蛋白阳性表达显著减少（P＜0.05）。　　结论：重症急性胰腺炎的发生可导致大量炎症因子释放及胰腺组织损伤，红景天苷可降低SAP大鼠血清AMY及炎症因子水平，减轻胰腺组织损伤，这种保护作用可能通过抑制NLRP3炎症小体通路，减少IL-1β等促炎因子的释放来实现。

关键词：红景天苷重症急性胰腺炎 NLRP3炎症小体天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1 白介素-1β 实验药理

祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠PPARα/CPT-1通路及胰岛素抵抗的影响

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祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠PPARα/CPT-1通路及胰岛素抵...

作者：钱毅西南医科大学

学位级别：硕士

目的:本实验通过投喂高脂饲料复制非酒精性脂肪性肝病大鼠模型,并且使用祛痰活血方进行干预,检测相关指标,然后总结出祛痰活血方对NAFLD大鼠PPARα/CPT-1通路及胰岛素抵抗的影响,从脂代谢角度探讨其治疗NAFLD的作用。为名老中医的临床... 详细信息

目的:本实验通过投喂高脂饲料复制非酒精性脂肪性肝病大鼠模型,并且使用祛痰活血方进行干预,检测相关指标,然后总结出祛痰活血方对NAFLD大鼠PPARα/CPT-1通路及胰岛素抵抗的影响,从脂代谢角度探讨其治疗NAFLD的作用。为名老中医的临床实践经验和学术理论传承提供依据。方法:1.分组、造模及给药（1）将32只SPF雄性SD大鼠随机分为正常组（共计6只）、造模组（共计26只）,正常组大鼠选择投喂充足普通饲料,造模组大鼠投喂充足高脂饲料,正常组和造模组除投喂饲料不同以外,其余条件均相同各组大鼠均自由活动、进食及饮水。造模过程总持续8周。（2）造模8周后,从造模组大鼠中随机抽取2只大鼠验证造模是否成功,禁食12 h,称重、麻醉,解剖、分离大鼠肝脏,生理盐水清洗多余血水,吸水纸擦干多余水分,取肝左叶组织行苏木素-伊红（HE）染色,得到肝脏病理结果,对比NAS积分确认NAFLD大鼠模型复制成功。将剩余NAFLD大鼠（24只）再次随机分组,分别为M组（模型组6只）、D组（祛痰活血方低剂量组6只）、Z组（祛痰活血方中剂量组6只）、H组（祛痰活血方高剂量组6只）。（3）分组后饲料供应不变。C组和M组大鼠按照10 mL·kg-1·d-1的剂量予以医用级别无菌9%NaCl注射液灌胃;D、Z、H组则分别按照6,12,16 g·kg-1·d-1的剂量予以祛痰活血方药液灌胃。此过程总持续4周。2.标本采集与处理（1）干预第4周末,禁食12 h,称重,麻醉,打开大鼠腹腔,一次性采血针行腹主动脉穿刺,负压采血管采集动脉血约5 mL,静置4 h后离心,保留上层清亮血清,-80℃冰箱保存备用。（2）牺牲大鼠,对大鼠进行解剖,摘取肝脏,称取质量。取肝左叶置中性福尔马林中固定,行HE染色;另取肝右叶约1.0cm×1.0cm×1.0cm大小行冰冻切片,行油红O染色;剩余肝脏放入冻存管中,保存于-80℃冰箱中。3.比较祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏病理学改变的影响采用HE和油红O染色观察祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏病理学的影响。4.比较祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠相关血清生化指标的影响（1）试剂盒检测大鼠血清 ALT、AST、TG、TC、LDL-C、HDL-C、FBG含量。（2）ELISA法检测大鼠血清FINS含量。（3）计算 HOMA-IR。5.比较祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠PPARα、CPT-1、IRS-1 mRNA表达的影响采用Real-time PCR方法检测祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织 PPARα、CPT-1、IRS-1 mRNA 表达。6.比较祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠PPARα、CPT-1、IRS-1蛋白表达的影响采用Western blotting方法检测祛痰活血方对非酒精性脂肪性肝病大鼠PPARα、CPT-1、IRS-1 蛋白的表达。结果:1.一般情况的比较:与C组相比,M组大鼠喜卧,活动量较少,体型肥胖,毛色黯淡,大便稀溏、臭秽。各干预组较M组一般情况均有不同程度改善,其中H组在外观、活动等方面与C组接近。2.大鼠肝脏病理切片结果:与C组相比,M组大鼠肝组织损伤最为严重,肝小叶结构紊乱,可见大量肝细胞空泡及水样变性,可见大小不一的圆形脂滴;各干预组肝脏损伤程度较M组有所减轻,其中H组损伤程度更小,结果与C组接近。3.血清生化指标的比较:与C组相比,M组大鼠肝损伤最严重,血脂最高,胰岛素抵抗指数最高;与M组相比,各干预组大鼠肝功能（ALT、AST）、血脂（TC、TG）、脂蛋白（LDL-C、HDL-C）及胰岛素指数抵抗均得到好转。其中H组效果最好（P＜0.05）。4.PPARα、CPT-1、IRS-1 mRNA及蛋白表达:与C组相比,M组大鼠肝组织表达均明显下降,与M组相比,各干预组表达均升高,其中H组效果最好（P＜0.05）结论:1.高脂饲料喂养8周可成功复制NAFLD大鼠模型;2.祛痰活血方能改善肝组织变性及脂质沉积;其中以高剂量组更佳;3.祛痰活血方能改善血清学指标,其中以高剂量组更佳;4.祛痰活血方能上调PPARα、CPT-1、IRS-1表达,其中以高剂量组更佳;5.祛痰活血方能治疗非酒精性脂肪性肝病其作用机制可能与其机制可能与祛痰活血方激活PPARα/CPT-1通路,上调IRS-1的表达,进而改善肝脏脂质代谢和IR,减轻肝脏脂肪变性程度及炎症反应,从而治疗非酒精性脂肪性肝病。

关键词：非酒精性脂肪性肝病祛痰活血方过氧化物酶体增殖物激活受体α 肉毒碱棕榈酰转移酶胰岛素抵抗实验药理

辣木叶提取物对卵巢癌A2780细胞株的抗癌作用

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辣木叶提取物对卵巢癌A2780细胞株的抗癌作用

作者： Tolosa Daniel Angasa 浙江理工大学

学位级别：硕士

Moringa oleifera is the most widely cultivated species in the genus Moringa,the only genus in the plant family Moringaceae.Moringa oleifera popularly called wonderful tree,for it is used traditionally to cure many diseases including cancer in Africa,Southeast Asia,India,Arabia,South America,and the Pacific and Caribbean Islands.In this study we investigated anticancer effect of Moringa oleifera leave extract on A2780 ovarian cancer cell line.The leaf of Moringa oleifera were grinded into powder and the phytochemicals were extracted using 80%methanol.For fractionation and partitioning process four kinds of solvents were used in order:Petroleum ether,Dichloromethane,Ethyl acetate and Water extract until the extract is colorless or lightened.For cell proliferation assay all samples were dissolved in Dimethyl Sulfoxide.Anticancer effect of Moringa oleifera were tested on A2780 ovarian cell line with four different extracts using 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide.Fractionated ethanolic extract tested on A2780 were determined,the final result showed that on Petroleum Ether,Dichloromethane and Ethyl Acetate extracts as the concentration increases from 1μg/ml,2μg/ml,3μg/ml,4μg/ml inhibited A2780,despite that in water extracts when the concentration decreases the inhibitory effect increase,however,Dichloromethane fraction has higher anticancer effect on A2780 ovarian cancer cell line with insignificant cytotoxicity to the normal cell.

关键词：卵巢癌辣木叶抗癌作用实验药理

体外和体内磷酸肌酸可降低血糖水平，改善肝细胞内质网应激的糖尿病小鼠

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体外和体内磷酸肌酸可降低血糖水平，改善肝细胞内质网应激的糖尿...

作者： YAZEED MOHAMMED IBRAHIM JAMALAT（亚滋徳）大连医科大学

学位级别：硕士

背景肝细胞受损可增加糖尿病(Diabetes mellituspatients,DM)患者发病率和死亡率。已公认,高血糖是DM患者肝损害发病的主要原因,与DM相关的肝细胞损害是DM患者常见的并发症。磷酸肌酸(Phosphocreatine,PCr)分子作为一种可迅速动员、回收... 详细信息

背景肝细胞受损可增加糖尿病(Diabetes mellituspatients,DM)患者发病率和死亡率。已公认,高血糖是DM患者肝损害发病的主要原因,与DM相关的肝细胞损害是DM患者常见的并发症。磷酸肌酸(Phosphocreatine,PCr)分子作为一种可迅速动员、回收ATP,对脑和骨骼肌的能量储备,可作为细胞能量储备形式,它具有多种活性。然而,PCr是否具有保护DM相关肝损伤的作用尚未见报道。本研究旨在评价PCr是否能保护DM并发的肝损伤,并探讨其在体内外作用机制。材料与方法体外研究:丙酮醛(methylglyoxal,MGO),是葡萄糖的活性代谢产物,与高血糖可引起DM相关的肝细胞损伤,且与肝细胞损害进展关系密切。Hep G2细胞培养及细胞进行预处理MGO两小时,然后,分别用不同浓度的PCR处理细胞(5m M,10m M,20m M)。采用MTT法研究胞形态学、细胞毒性、细胞凋亡;流式细胞仪Annexin V-FITC、Calcien法分别检测细胞凋亡、增殖试验。通过Western blotting检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平变化;以及内质网应激蛋白CHOP、ATF4、IRS的表达量。体内研究:Wistar大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素(80mg/kg),然后,不同治疗组,分别20mg/kg和50mg/kg腹腔注射PCr。采用肝组织匀浆生化分析法测定肝脏代谢物,如丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD),用免疫印迹法检测肝组织凋亡蛋白和内质网应激蛋白表达。结果体外细胞一般治疗实验表明,MGO处理Hep G2细胞出现损伤和凋亡,而经不同浓度PCr处理细胞可增强细胞增殖,减少细胞凋亡,改善细胞愈合。Western blot结果显示,在MGO组,凋亡蛋白如caspase3和Bax蛋白表达增加,抗凋亡蛋白Bcl2降低,而PCr处理细胞,时间和剂量依赖性逆转之。进一步探讨了PCr对肝细胞内质网应激的保护机制,发现氧化应激诱导的肝损伤时,内质网应激蛋白水平显著升高,而PCr治疗细胞则呈剂量和时间依赖性逆转之。体内经PCr治疗的DM相关性肝损伤研究显示血糖降低,且PCr对STZ诱导的DM相关肝内皮细胞损伤有保护作用。另外,通过应用糖尿病动物模型验证和检测PCr否可以改善体内肝组织损伤,我们的结果显示,动物肝组织的组织病理学染色所示,在损伤诱导后,PCr具有保护作用,并快速恢复。此外,对肝组织进行生物化学测定,既分光光度法测定GSH、MDA和SOD,结果表明PCr的抗氧化作用可能涉及其保护机制。此外,与STZ诱导的糖尿病相关的肝损伤相比,PCr处理的动物中凋亡蛋白水平和ER应激水平降低。Bcl-2/Bax蛋白比降低,Caspase-3和9蛋白表达降低。结论本研究结果表明,PCr治疗DM相关肝损伤模型具有体内和体外保护作用,并具有抗氧化、抗凋亡作用。内质网应激作用可能参与:PCr通过影响ER应激信号转导中的保护作用机制。这可能为DM相关肝损伤患者提供一种可能的治疗策略。

关键词：糖尿病磷酸肌酸实验药理血糖水平内质网应激

具有潜在治疗阿尔茨海默病作用的3种中药成分的药效学观察及其机制研究

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具有潜在治疗阿尔茨海默病作用的3种中药成分的药效学观察及其机...

作者：周楠楠北京协和医学院

学位级别：硕士

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,以记忆力减退、认知功能障碍为主要临床症状,以脑内β-淀粉样多肽（p-amyloid peptide, Ap）沉积形成的纤维斑块（即老年斑）,并伴有细胞内的神经纤维缠结... 详细信息

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,以记忆力减退、认知功能障碍为主要临床症状,以脑内β-淀粉样多肽（p-amyloid peptide, Ap）沉积形成的纤维斑块（即老年斑）,并伴有细胞内的神经纤维缠结（neurofibrillary tangle, NFT）为主要病理改变。Aβ多肽有39-42个氨基酸,由β淀粉样前体蛋白（APP）经p-分泌酶和γ-分泌酶水解后产生的多肽。APP的裂解过程有二种途径：①非淀粉样途径：APP经α-分泌酶水解,产生非淀粉样可溶小分子蛋白sAPPa和CTFa （C端片段）,CTFa经γ-分泌酶裂解产生3KD的小分子P3和APP胞内区域的羧基末端（APP intracellular cytoplasmic domain, AICD）,该途径不形成Ap。②淀粉样途径： APP经p-分泌酶裂解,产生可溶性sAPPβ和CTFβ, CTFβ经γ-分泌酶裂解产生可聚集、具有神经毒性的Ap。研究表明,Ap聚集和沉积形成的纤维斑块可引发脑内氧化应激及炎症等反应,导致神经元的坏死和凋亡,最终可引起AD。目前国内外用于治疗AD的药物主要为化学合成类药物如胆碱酯酶抑制剂等,但其作用局限且治标不治本。中草药的应用布我国有着悠久的历史,其对一些慢性疾病有很好疗效且几乎无副作用等特点。近年来研究表明,中药成分天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷具有抗氧化、增加脑血流量、改善记忆力、神经保护等作用。但其是否对AD的治疗具有特异性及其具体作用的途径和相关机制尚不明确。为探讨以上问题,本课题主要研究内容为三种中药成分天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷对阿尔茨海默病模型小鼠的药效学作用,同时利用双转基因细胞模型研究其可能的作用途径及相关机制。本课题研究内容主要包括二个部分：1.三种中药成分在转基因模型鼠体内抑制Ap斑块的药效学作用;2.三种中药成分在体外抑制Ap的作用途径及其相关机制。第一部分：三种中药成分对AD转基因模型鼠体内的药效学作用的研究目的：研究3种中药成分（天麻素（GAS）、黄芪总皂苷（AST）、芍药苷（PAE））对AD转基因模型5XFAD鼠学习认知和记忆能力的影响和抑制脑内Aβ斑块的效果,并观察3种中药成分的干预是否对小鼠的生长发育有影响。方法：选用1.5月龄的APP/PS1双转基因模型小鼠,随机分为7组,另取同窝阴性小鼠作为正常对照,每组10只。（1）阳性对照组（Tg）：转基因阳性小鼠给予不含药物的生理盐水;（2）阴性对照组（Control）:同窝阴性小鼠给予不含药物的生理盐水;（3）天麻素高剂量组（GAS-H）转基因阳性小鼠给予含300mg/kg/d天麻素的生理盐水（4）天麻素低剂量组（GAS-L）:转基因阳性小鼠给予含150mg/kg/d天麻素的生理盐水（5）黄芪总皂苷高剂量组（AST-H）:转基因阳性小鼠给予含160mg/kg/d黄芪总皂苷的生理盐水（6）黄芪总皂苷低剂量组（AST-L）:转基因阳性小鼠给予含80mg/kg/d黄芪总皂苷的生理盐水（7）芍药苷高剂量组（PAE-H）:转基因阳性小鼠给予含60mg/kg/d芍药苷的生理盐水（8）芍药苷低剂量组（PAE-L）:转基因阳性小鼠给予含30mg/kg/d芍药苷的生理盐水。每周测量各组小鼠体重及监测小鼠的日均饮水量,按照体重及日均饮水量调整给药剂量。给药4个月后,通过Morris水迷宫行为学实验检测小鼠学习记忆及认知能力的变化;免疫组织化学染色法观察脑组织内Aβ斑块的变化;ELISA法检测小鼠脑组织匀浆中Aβ含量的水平;另外为评价药物对小鼠的是否具有肝肾毒副作用,ELISA法检测小鼠血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、肌酐的变化及小鼠脑组织匀浆中IFN-γ和IL-4水平的变化。结果：1Morris水迷宫结果显示,与阳性对照组（Tg）组相比,用药各组小鼠平台寻找时间明显缩短,在原平台象限停留时间明显延长：第5天时,天麻素高剂量组（GAS-H）和低剂量组（GAS-L）平台寻找时间分别缩短83.66%和46.72%（P＜0.01）;,黄芪总皂苷高剂量组（AST-H）和低剂量组（AST-L）平台寻找时间分别缩短41.60%和23.78%（P＜0.01）;芍药苷高剂量组（PAE-H）和低剂量组（PAE-L）平台寻找时间分别缩短48.23%和29.31%（P＜0.01）;天麻素高剂量组（GAS-H）和低剂量组（GAS-L）在原目标象限停留时间分别延长2.28倍和1.83倍;黄芪总皂苷高剂量组（AST-H）和低剂量组（AST-L）在原目标象限停留时间分别延长1.88倍和1.38倍（P＜0.01）;芍药苷高剂量组（PAE-H）和低剂量组（PAE-L）在原目标象限停留时间分别延长1.83倍和1.62倍（P＜0.01）。2.免疫组化结果显示：5XFAD鼠的Tg组脑内海马和皮质区可见明显的大小不一、棕黄色的Ap斑块沉积,呈弥漫分布。GAS

关键词：阿尔茨海默病中药成分药效学实验药理

新工科背景下生物制药专业实验药理学融入课程思政的探索与效果评价

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中国高等医学教育 2022年第2期 138-139页

作者：张南文陈少雅郑宁陈洲杨丽娟福建医科大学药学院福建福州350122

目的:探讨实验药理学融入课程思政教学的应用效果。方法:选取生物制药2018级学生作为实验组,2017级作为对照组,通过考试、调查问卷和创新创业竞赛3项指标对教学效果进行评价。结果:实验组对该教学法比较满意,创新创业竞赛成绩显著提升,... 详细信息

目的:探讨实验药理学融入课程思政教学的应用效果。方法:选取生物制药2018级学生作为实验组,2017级作为对照组,通过考试、调查问卷和创新创业竞赛3项指标对教学效果进行评价。结果:实验组对该教学法比较满意,创新创业竞赛成绩显著提升,期末考试成绩显著高于对照组。结论:实验融合课程思政教学效果优于传统教学。

关键词：课程思政实验药理生物制药诚信创新

靶向CUGBP1改善肝纤维化及其机制的研究

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靶向CUGBP1改善肝纤维化及其机制的研究

作者：邵粉丽南京大学

学位级别：硕士

肝纤维化是由多种慢性肝疾病引发肝脏中肝细胞坏死、肌成纤维细胞活化导致的肝脏疾病,主要特点是细胞外基质沉积。肝组织中细胞外基质沉积阻碍肝细胞与血液间的物质交换,导致肝功能失调。长期肝纤维化会发展成肝硬化,肝硬化是一种具有... 详细信息

肝纤维化是由多种慢性肝疾病引发肝脏中肝细胞坏死、肌成纤维细胞活化导致的肝脏疾病,主要特点是细胞外基质沉积。肝组织中细胞外基质沉积阻碍肝细胞与血液间的物质交换,导致肝功能失调。长期肝纤维化会发展成肝硬化,肝硬化是一种具有高发病率和高死亡率的疾病。肝星状细胞活化在肝纤维化过程中起重要作用,所以靶向肝星状细胞已经成为治疗肝纤维化新的策略。在第一章我们详细描述了肝纤维化的分子机制和过程以及肝星状细胞活化在肝纤维化过程中的作用,另外总结了 RNA结合蛋白CUGBP1(CUG triplet repeat,RNA binding protein 1,CUGBP1)的结构和已知的生物学功能。在此基础上,我们展开了通过CUGBP1靶向肝星状细胞活化改善肝纤维化的作用和机制研究。在第二章首先检测了病人肝纤维化组织中CUGBP1的表达,并确定了CUGBP1的表达与患者肝组织纤维化程度成正比。用促肝纤维化细胞因子TGF-β刺激人肝星状细胞株LX2和小鼠原代肝星状细胞,Q-PCR和Western结果分别显示TGF-β刺激后肝星状细胞中CUGBP1的mRNA和蛋白水平均上调。在此基础上检测LX2细胞中肝星状细胞活化的标志物α-SMA和collagen 1的表达,发现TGF-β刺激后肝星状细胞活化。敲低CUGBP1后,TGF-β刺激条件下LX2细胞中α-SMA的表达明显低于对照组,说明CUGBP1促进肝星状细胞活化。另外敲低CUGBP1的LX2细胞中IFN-γ的表达和分泌均上调。Ki-67染色检测LX2细胞的增殖,发现敲低CUGBP1不影响LX2细胞的增殖。乳酸脱氢酶法检测人肝细胞株L02和小鼠原代肝细胞用siRNA-CUGBP1敲低CUGBP1后细胞的增殖,结果显示敲低CUGBP1不影响肝细胞的增殖。Annexin V-FITC染色后用流式细胞仪检测LO2细胞和小鼠原代肝细胞的凋亡,敲低CUGBP1的肝细胞中Annexin V-FITC阳性细胞的比例与对照相同,CUGBP1不影响肝细胞凋亡。综上可得敲低CUGBP1可以抑制肝星状细胞的活化,而并不影响肝细胞和肝星状细胞的增殖。LX2细胞中敲低CUGBP1后用TGF-β刺激12 h或24 h后均检测到细胞中p-STAT1、p-Smad2和Smad7的上调。TGF-β刺激环境中IFN-γ单克隆抑制剂可以促进LX2细胞的活化并消除CUGBP1对LX2细胞活化的促进作用。STAT1突变的人成纤维细胞株U3A中敲低CUGBP1不影响细胞表达α-SMA。由此可得出结论CUGBP1通过抑制IFN-γ的分泌来促进HSC的活化。基于CUGBP1的已知功能,我们推测CUGBP1有可能作用于IFN-γ mRNA。为了验证以上猜想,我们合成了含有IFN-γ mRNA 3’端非编码区GRE序列的探针IFN-γ-GRE-Bio。Pull-down和竞争实验都证明CUGBP1能够结合到IFN-γ mRNA 3’端非编码区GRE序列上。LX2细胞中敲低CUGBP1后用放线菌酮D抑制细胞中mRNA的合成,发现敲低CUGBP1后细胞中IFN-γ mRNA的稳定性明显增加。以上结果证明CUGBP1通过靶向IFN-γ mRNA的降解促进LX2细胞活化。第三章中我们找到了能够靶向CUGBP1的小分子化合物梣酮。免疫荧光实验证明小分子化合物梣酮能够抑制活化的LX2细胞中CUGBP1的表达。蛋白和基因水平检测梣酮对LX2细胞中α-SMA和collagen 1的表达的影响,结果显示梣酮明显抑制LX2细胞的活化。用siRNA敲低LX2细胞中CUGBP1后小分子化合物梣酮对LX2细胞活化的抑制作用消失,说明梣酮是通过下调CUGBP1抑制LX2细胞活化的。在小鼠胆管结扎(BDL)小鼠肝纤维化模型中梣酮剂量依赖性地改善小鼠肝纤维化。在给予梣酮的小鼠肝组织中检测到CUGBP1、α-SMA的下调和HSC中IFN-γ上调。由此说明通过靶向CUGBP1抑制HSC活化可以作为改善或治疗肝纤维化的方法。综上所述,CUGBP1可以促进HSC活化,小分子化合物梣酮下调CUGBP1抑制HSC活化,改善BDL诱导的小鼠肝纤维化。靶向CUGBP1可能成为肝纤维化治疗新的策略。本文不仅揭示了 CUGBP1在肝纤维化中的作用,还为肝纤维化治疗提供新的潜在靶点。

关键词：肝纤维化梣酮实验药理靶向肝星状细胞 CUGBP1蛋白转化生长因子β