检索结果-南通市图书馆

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

什么是miRNA及其作用?

中华检验医学杂志 2007年第11期30卷 1307-1307页

作者：董矜

答：micro RNAs（miRNAs）是一类长约22核苷酸的非编码的单链RNA分子，5＇端带磷酸基团、3＇端带羟基的非蛋白编码的调控小RNA家族。它们广泛存在于从植物、线虫到人类的细胞中。1993年，Lee等人用经典的定位克隆的方法在线虫（***）中... 详细信息

答：micro RNAs（miRNAs）是一类长约22核苷酸的非编码的单链RNA分子，5＇端带磷酸基团、3＇端带羟基的非蛋白编码的调控小RNA家族。它们广泛存在于从植物、线虫到人类的细胞中。1993年，Lee等人用经典的定位克隆的方法在线虫（***）中克隆了lin-4基因，并通过定点突变发现lin-4并不编码蛋白，而是产生一种小RNA分子（miRNA）。这种小RNA分子能以不完全互补的方式与其靶mRNA的3＇非翻译端的特定区域相互作用来抑制lin—14的表达，

关键词： miRNA RNA分子蛋白编码定位克隆 micro 磷酸基团编码蛋白定点突变

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

封面故事

生物物理学报 2010年第4期26卷 I0001-I0001页

氮氧自由基定点标记结合顺磁共振技术探测蛋白质等生物大分子的结构信息，是目前结构生物学研究中的一项新兴技术。通过基因的定点突变以及修饰反应，可将蛋白质特定空间位置上的氨基酸残基替换成含有氮氧自由基的非天然残基（简称为R1... 详细信息

氮氧自由基定点标记结合顺磁共振技术探测蛋白质等生物大分子的结构信息，是目前结构生物学研究中的一项新兴技术。通过基因的定点突变以及修饰反应，可将蛋白质特定空间位置上的氨基酸残基替换成含有氮氧自由基的非天然残基（简称为R1）。随后收集并分析R1产生的顺磁共振谱的线型，计算出该位点上R1的运动性、极性、接触性以及偶极。偶极作用等参数，

关键词：磁共振技术氮氧自由基氨基酸残基故事封面定点突变偶极作用生物大分子

环糊精葡萄糖基转移酶使用性能改善的关键技术研究

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

食品与生物技术学报 2015年第8期34卷 896-896页

作者：张群江南大学图书馆

目前,环糊精的工业化生产采用酶法工艺,即淀粉在环糊精葡萄糖基转移酶（EC 3.***.1.19,简称CGT酶）作用下通过环化反应合成环糊精。CGT酶生产环糊精最不利的条件之一是产物特异性差,这使产物的分离纯化很不方便。同时,CGT酶的另一缺陷是... 详细信息

目前,环糊精的工业化生产采用酶法工艺,即淀粉在环糊精葡萄糖基转移酶（EC 3.***.1.19,简称CGT酶）作用下通过环化反应合成环糊精。CGT酶生产环糊精最不利的条件之一是产物特异性差,这使产物的分离纯化很不方便。同时,CGT酶的另一缺陷是其热稳定性较差。由于在环糊精工业化生产中,底物淀粉首先要经过高温糊化、液化处理,然后降温至适当温度进行环化反应,

关键词：葡萄糖基转移酶环化反应使用性能酶法分离纯化定点突变野生型突变体钙离子结合位点特异性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

青霉素G酰化酶操纵子的负调控因子的研究

生物工程学报 1998年第3期14卷 281-286页

作者：王宇澄蒋岚杨胜利中国科学院上海生物工程研究中心

青霉素Ｇ酰化酶（ＰＡ）操纵子的调节基因（ｐａｃＲ）存在于青霉素Ｇ酰化酶结构基因（ｐａｃ）内部Ｄｒａ１Ｔａｑ１一段约５００ｂｐ的ＤＮＡ片段内，此片段内含有２个ＯＲＦ。２个ＯＲＦ及其突变体分别克隆到ｐＵＣ１８得到一系列... 详细信息

青霉素Ｇ酰化酶（ＰＡ）操纵子的调节基因（ｐａｃＲ）存在于青霉素Ｇ酰化酶结构基因（ｐａｃ）内部Ｄｒａ１Ｔａｑ１一段约５００ｂｐ的ＤＮＡ片段内，此片段内含有２个ＯＲＦ。２个ＯＲＦ及其突变体分别克隆到ｐＵＣ１８得到一系列重组质粒，用这些重组质粒转化青霉素Ｇ酰化酶产生菌Ｅ．ｃｏｌｉＤ８１６，测定克隆片段对ＰＡ表达的影响。如果克隆片段含有具功能的ｐａｃＲ，诱导剂苯乙酸（ＰＡＡ）不能使由高拷贝ｐａｃＲ表达的阻抑物全部失活，部分阻抑物结合ｐａｃ操纵基因，阻碍ＲＮＡ聚合酶对ｐａｃ的转录，因此ＰＡ的表达量降低。结果表明，阻抑物是由ｐａｃ结构基因内部的ＯＲＦ２编码的蛋白因子，ｐａｃＲ即ＯＲＦ２。ＲＮＡＤＮＡ杂交实验证实了ｐａｃＲ在转录水平阻抑ｐａｃ的表达。

关键词：青霉素G酰化酶调节基因定点突变操纵子

HBV信号肽区热点变异真核表达载体的构建及对HBeAg表达的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

解放军医学杂志 2001年第7期26卷 480-482页

作者：林裕龙侯金林王战会孙剑阎丽骆抗先第一军医大学南方医院广州510515

采用分子生物学方法 ,设计引入KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增HBV的Pre C/C片段 (1814～ 2 45 2 ) ,经酶切后连于EBO真核表达载体 ,利用定点突变技术分别对连接载体进行T186 2 ,A1896 ,A1899,A1896 +A1899点的定点诱变。经错配PCR RFL... 详细信息

采用分子生物学方法 ,设计引入KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增HBV的Pre C/C片段 (1814～ 2 45 2 ) ,经酶切后连于EBO真核表达载体 ,利用定点突变技术分别对连接载体进行T186 2 ,A1896 ,A1899,A1896 +A1899点的定点诱变。经错配PCR RFLP和测序分析 ,确定突变的克隆。将突变前后的质粒以脂质体转染法转染HepG2细胞 ,检测不同点突变后HBeAg表达的改变。突变前后的质粒转染HepG2细胞经稳定表达 ,结果未突变的EBO PreC/C重组质粒HBeAg表达为强阳性 ,A1899突变的重组质粒HBeAg表达比未突变的重组质粒稍弱 ,而转染EBO空载体和T186 2 ,A1896 ,A1896 +A1899重组质粒突变体的细胞培养上清HBeAg均为阴性。

关键词：定点突变真核表达载体基因转染乙型肝炎 HBV 前C信号肽区热点变异

黄瓜花叶病毒互补型载体可与CP转基因发生重组

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国科学（C辑） 2001年第2期31卷 97-105页

作者：雷万里方荣祥张国华陈晓英张晓勤中国科学院微生物研究所北京100080

为了探讨利用黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）作为表达载体的可行性，克隆了山东株（ＳＤ）ＣＭＶ　ＲＮＡ３的全长ｃＤＮＡ，并测定了全序列．采用定点突变的方法在衣壳蛋白（ＣＰ）基因起始密码子处改造出一个ＮｓｉＩ位点．以绿色荧光蛋白（... 详细信息

为了探讨利用黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）作为表达载体的可行性，克隆了山东株（ＳＤ）ＣＭＶ　ＲＮＡ３的全长ｃＤＮＡ，并测定了全序列．采用定点突变的方法在衣壳蛋白（ＣＰ）基因起始密码子处改造出一个ＮｓｉＩ位点．以绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因置换ＳＤ－ＣＭＶＲＮＡ３ｃＤＮＡ的ＣＰ基因．将Ｆｎｙ株ＣＭＶＲＮＡｌ，ＲＮＡ２和嵌合ＳＤ－ＣＭＶＲＮＡ３的ｃＤＮＡ分别克隆在３５Ｓ启动子和终止子之间构建成表达载体．在烟草原生质体中验证了该表达载体可以表达ＧＦＰ．然后将其接种到表达ＳＤＣＰ的转基因烟草上，试图构建成一个互补型载体．接种１０ｄ后，１８棵植株中，有５棵的接种叶和其中１棵的系统叶上可检测到表达的ＧＦＰ．然而１个月后，所有接种植株中都检测不到ＧＦＰ．通过ＲＴ－ＰＣＲ及序列分析，证实在互补系统中ＣＭＶ载体与ＣＰ转基因发生了重组．上述结果对这种ＣＭＶ互补型载体的可行性提出了质疑，同时也揭示了转ＣＭＶＣＰ基因抗病毒植物的生物安全性中存在的新的问题．

关键词：黄瓜花叶病毒互补型载体 CP转基因重组生物安全性定点突变绿色荧光蛋白基因

路邓葡萄球菌单宁酶基因的克隆、表达、纯化与改造

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国测试 2018年第9期44卷 63-68页

作者：刘鳐胡雪丽钟秋梅吕蝶吴明波成都医学院四川成都610500

为提高路邓葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis)单宁酶(Sl-tan)的活性,该文利用化学合成方法获得Sltan基因,将该基因连接到重组表达质粒pET43.1-A,再转化到大肠杆菌感受态细胞BL21-DE3中进行表达,通过亲和层析柱纯化,以没食子酸甲酯... 详细信息

为提高路邓葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis)单宁酶(Sl-tan)的活性,该文利用化学合成方法获得Sltan基因,将该基因连接到重组表达质粒pET43.1-A,再转化到大肠杆菌感受态细胞BL21-DE3中进行表达,通过亲和层析柱纯化,以没食子酸甲酯为底物进行酶活性测定以及酶学性质分析,并基于生物信息学分析,结合定点突变技术对Sl-tan进行人工改造。结果显示,获得的重组单宁酶产量明显增高,最高可达42 mg/L发酵液;酶学性质研究显示该酶在pH 8.0,温度40℃时获得的活性最高(40 U/mg);Ala460突变为Pro460后的Sl-tan活性可提高82.5%。

关键词：路邓葡萄球菌单宁酶三明治结构定点突变没食子酸甲酯

蛋白质工程改造磷脂酶D提高磷脂酰丝氨酸产量

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

食品工业科技 2020年第17期41卷 98-103,108页

作者：冯小娜齐娜宋伟刘佳刘立明吴静江南大学药学院江苏无锡214122 江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122

为了进一步提高磷脂酰丝氨酸(PS)产量,将来源于Streptomyces katrae的野生型磷脂酶D(SkPLD)于*** BL21(DE3)中进行异源表达,获得菌株*** BL21(DE3)/pET28a-SkPLD,以磷脂酰胆碱(PC)和L-serine为底物,发现限制PS产量进一步提高的限制因素... 详细信息

为了进一步提高磷脂酰丝氨酸(PS)产量,将来源于Streptomyces katrae的野生型磷脂酶D(SkPLD)于*** BL21(DE3)中进行异源表达,获得菌株*** BL21(DE3)/pET28a-SkPLD,以磷脂酰胆碱(PC)和L-serine为底物,发现限制PS产量进一步提高的限制因素是转磷脂酰反应转化率低(30%)。在对SKPLD结构进行详尽分析的基础上,通过蛋白质工程改造策略扩大底物催化通道,降低位阻效应;同时提高His462与L-serine的亲和力,降低水解反应。结果表明,获得4个有益单突变体(Y405A、Q407G、D370P、K478P),对其进行组合突变,获得四突变体SkPLDY405A/Q407G/D370P/K478P,转化率、PS产量、kcat/Km分别为55.6%、42.3 g·L-1、1.53 (mmol/L)-1s-1,比野生型分别提高了59.8%、59.6%、93.7%。PS产量进一步提高的原因在于四突变体催化腔体积扩大到718.6■3,且His462 N原子与L-serine O原子的催化距离(d1)缩短0.6■,与H2O O原子的距离(d2)增加0.8■。在3 L规模转化体系中,PS产量为50.4 g·L-1、转化率达到66.3%,时空产率为12.6 g/L/h。本研究利用蛋白质工程改造获得了转磷脂酰活性提高的突变体,为提高磷脂酶D的工业生产奠定了坚实的基础。

关键词：蛋白质工程磷脂酶D 磷脂酰丝氨酸催化通道催化距离定点突变

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

乙酰乳酸合成酶抗性突变的分子动力学模拟

南方农业学报 2020年第9期51卷 2167-2173页

作者：赵奇邓培渊郭运宏陈丽培罗青郑州师范学院生命科学学院郑州450044 郑州铁路职业技术学院建筑工程系郑州450044

【目的】研究乙酰乳酸合成酶(ALS)及Pro197Ser(P197S)突变体与抑制剂苯磺隆(TBM)的分子结合模式,阐明其分子作用机制,为基于ALS的新型除草剂研发和杂草防控等提供参考。【方法】运用AutoDock 4.2进行ALS和P197S与TBM多构象对接,采用YAS... 详细信息

【目的】研究乙酰乳酸合成酶(ALS)及Pro197Ser(P197S)突变体与抑制剂苯磺隆(TBM)的分子结合模式,阐明其分子作用机制,为基于ALS的新型除草剂研发和杂草防控等提供参考。【方法】运用AutoDock 4.2进行ALS和P197S与TBM多构象对接,采用YASARA平台进行分子动力学模拟,利用***模块计算ALS_TBM和P197S_TBM体系复合物的结合自由能,并以Amber 12分析关键氨基酸、结合模式和相互作用力。【结果】P197S_TBM突变体系接触氨基酸残基数量增多,接触位点偏集中于C端,氢键数量更多、键长更短;P197S_TBM体系的均方根偏差(RMSD)较低,250~320位氨基酸残基区域和350~430位氨基酸残基区域均方根涨落(RMSF)下降明显;P197S_TBM体系的结合P197S自由能更低,亲和力贡献大的氨基酸残基数量增加。【结论】P197S突变引起ALS与TBM结合位点和结合模式发生变化,接触氨基酸残基和氢键增多,促结合能量值增加,突变体系更稳定。417~423位氨基酸残基在ALS与TBM结合过程中是较集中贡献能量的氨基酸团。

关键词：乙酰乳酸合成酶定点突变苯磺隆分子动力学模拟