青霉素G酰化酶操纵子的负调控因子的研究

作     者：王宇澄 蒋岚 杨胜利 

作者机构：中国科学院上海生物工程研究中心 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：1998年第14卷第3期

页      面：281-286页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

主　　题：青霉素G酰化酶 调节基因 定点突变 操纵子 

摘      要：青霉素Ｇ酰化酶（ＰＡ）操纵子的调节基因（ｐａｃＲ）存在于青霉素Ｇ酰化酶结构基因（ｐａｃ）内部Ｄｒａ１Ｔａｑ１一段约５００ｂｐ的ＤＮＡ片段内，此片段内含有２个ＯＲＦ。２个ＯＲＦ及其突变体分别克隆到ｐＵＣ１８得到一系列重组质粒，用这些重组质粒转化青霉素Ｇ酰化酶产生菌Ｅ．ｃｏｌｉＤ８１６，测定克隆片段对ＰＡ表达的影响。如果克隆片段含有具功能的ｐａｃＲ，诱导剂苯乙酸（ＰＡＡ）不能使由高拷贝ｐａｃＲ表达的阻抑物全部失活，部分阻抑物结合ｐａｃ操纵基因，阻碍ＲＮＡ聚合酶对ｐａｃ的转录，因此ＰＡ的表达量降低。结果表明，阻抑物是由ｐａｃ结构基因内部的ＯＲＦ２编码的蛋白因子，ｐａｃＲ即ＯＲＦ２。ＲＮＡＤＮＡ杂交实验证实了ｐａｃＲ在转录水平阻抑ｐａｃ的表达。