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人NDRG1的融合表达、纯化及抗体制备

中国生物化学与分子生物学报 2003年第6期19卷 698-703页

作者：张健刘新平张伟吴国强沈岚王立峰苏金张万会药立波第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室西安710032 第四军医大学基础部生理学教研室西安710032

NDRG1是在N myc缺陷的小鼠胚胎组织中发现的一异常高表达的新基因 .在研究高同型半胱氨酸血症引起动脉粥样硬化的机制时 ,在培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)中发现了人NDRG1 .为了研究人NDRG1的功能以及结构与功能之间的关系 ,用RT PCR... 详细信息

NDRG1是在N myc缺陷的小鼠胚胎组织中发现的一异常高表达的新基因 .在研究高同型半胱氨酸血症引起动脉粥样硬化的机制时 ,在培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)中发现了人NDRG1 .为了研究人NDRG1的功能以及结构与功能之间的关系 ,用RT PCR技术 ,从人脑总RNA中克隆NDRG1cDNA ,进行序列测定后 ,将NDRG1插入pPROEXHTb表达载体中 ,转化E .coliDH5α感受态细胞 ,并在LB培养基中获得高效可溶表达 .表达的 6His NDRG1融合蛋白经Ni2 + NTA偶联的琼脂糖珠纯化 ,通过圆二色性分析其二级结构 ,结果为 :α螺旋 :2 3 6 ,β片层 :1 8 6 ,转角 :2 5 7,无规卷曲 :32 0 .用此融合表达的蛋白免疫家兔 ,制备得到高效价的抗体 ,利用固定于硝酸纤维素膜上的NDRG1抗原亲和吸附纯化抗血清提高了抗体的特异性。

关键词：融合表达圆二色性免疫血清抗体制备基因表达 NDRG1基因

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细菌聚γ-谷氨酸表征的研究

高分子材料科学与工程 2002年第4期18卷 133-136页

作者：杨革陈坚曲音波伦世仪江南大学工业生物技术教育部重点实验室山东大学微生物技术国家重点实验室山东济南250100 山东大学微生物技术国家重点实验室

聚 γ-谷氨酸远紫外圆二色性的研究表明 ,最大平均残基摩尔椭圆度 [θ]2 14 =- 7.10 87× 10 5°.cm2 /dmol,其二级结构组成为 :α-螺旋 18.5 % ,β-折叠 5 0 .3% ,β-转角 0 .5 % ,无规卷曲 30 .7% ;聚 γ-谷氨酸玻璃化温度为 5 4.82... 详细信息

聚 γ-谷氨酸远紫外圆二色性的研究表明 ,最大平均残基摩尔椭圆度 [θ]2 14 =- 7.10 87× 10 5°.cm2 /dmol,其二级结构组成为 :α-螺旋 18.5 % ,β-折叠 5 0 .3% ,β-转角 0 .5 % ,无规卷曲 30 .7% ;聚 γ-谷氨酸玻璃化温度为 5 4.82℃ ,粘流温度 5 7.5 6℃ ,分解温度 14 1.34℃ ;聚 γ-谷氨酸所形成的宏观结构为非晶态 ;该物质是一个氨基酸高聚物 ,其结构中有 γ-结合 ;在 - 70℃～ 2 5℃温度范围内 ,聚 γ-谷氨酸发生了复杂的松弛和转变。

关键词：细菌聚γ-谷氨酸表征研究圆二色性动态粘弹性

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大腹园蛛腺体丝蛋白溶液的分子构象

纺织学报 2003年第6期24卷 7-8页

作者：潘志娟陈宇岳许菁刘敏盛家镛苏州大学材料工程学院苏州215021

用圆二色光谱研究了大腹园蛛腺体内丝蛋白的分子构象 ,研究结果表明 ,大、小囊状腺体内丝蛋白的分子构象以无规卷曲和折叠结构为主 ;并用计算法获得五种腺体丝蛋白的二级结构中含有 6 2 %～ 13 9%不等的β 转角 ,这对蛛丝蛋白形成独特... 详细信息

用圆二色光谱研究了大腹园蛛腺体内丝蛋白的分子构象 ,研究结果表明 ,大、小囊状腺体内丝蛋白的分子构象以无规卷曲和折叠结构为主 ;并用计算法获得五种腺体丝蛋白的二级结构中含有 6 2 %～ 13 9%不等的β 转角 ,这对蛛丝蛋白形成独特的结构起着重要作用。

关键词：大腹园蛛腺体丝蛋白圆二色性分子构象二级结构 β-转角

金属依赖的手性超分子的组装,结构及其光谱研究

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苦参凝集素（Sophora flavescens Lectin）的纯化、性质、结构及生物学活性研究

中国化学会第二十五届学术年会

作者：王要兵马金石姚建年中国科学院化学研究所光化学重点实验室中国科学院化学研究所光化学重点实验室中国科学院化学研究所光化学重点实验室

There has been considerable interest in helical supramolecular architectures, particularly helices from coordination compound because of their application in catalysis, biochemistry, and material scie

关键词：手性超分子圆二色性吡咯西佛碱

来源： cnki会议评论

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苦参凝集素（Sophora flavescens Lectin）的纯化、性质、结构及...

作者：刘一勇四川大学

学位级别：硕士

本文对苦参凝集素(Sophora flavescens Lectin，SFL)的研究分为三个部分，第一部分为SFL的分离纯化及部分性质研究;第二部分为对SFL的结构与生物学活性的研究;第三部分为SFL的蛋白毒性的初步研究。苦参根浸出液经硫酸铵沉淀，得SF... 详细信息

本文对苦参凝集素(Sophora flavescens Lectin，SFL)的研究分为三个部分，第一部分为SFL的分离纯化及部分性质研究;第二部分为对SFL的结构与生物学活性的研究;第三部分为SFL的蛋白毒性的初步研究。苦参根浸出液经硫酸铵沉淀，得SFL粗晶。再经DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephacryl S-200 HR凝胶过滤纯化，可获得SFL纯品。经SDS-PAGE检测为单一蛋白染色带，Sephadex G-100凝胶过滤测得其分子量为32kD，SDS-PAGE测得其亚基分子量也为32kD，证明SFL分子只有一个亚基，SFL含有3.5％的中性糖，用比色法测得每分子SFL含有3个色氨酸残基，经等电聚焦测得其等电点为5.56。当SFL浓度为0.97μg／mL时就能凝集兔红细胞，无血型专一性，糖抑制实验表明，甘露糖为SFL的专一性抑制糖。 SFL的远紫外圆二色性谱(CD谱)显示217 nm处的单一负峰，此时SFL分子中含有15.8％a-螺旋，48.3％β-折叠和35.9％无规卷曲，研究了不同温度、pH和不同脲浓度对SFL的CD谱和凝集兔红细胞活性的影响，结果表明在pH4.0或温度80℃以上或脲浓度2mol／L以上时，SFL完全失去凝血活性或仅有微弱活性，此时CD谱发生很大的变化，二级结构遭到严重破坏，对SFL的荧光光谱进行了研究，结果表明Trp残基对SFL的荧光强度贡献最大。经N-溴代丁二酰亚胺(NBS)修饰显示其中2个Trp残基位于分子表面，当这2个Trp残基被修饰后，SFL的凝血活性完全丧失，糖保护试验表明SFL专一性抑制糖Man能够保护SFL，阻断NBS对SFL的修饰作用，说明色氨酸为SFL凝血活性所必需并参与了其糖结合部位的组成．SFL随着NBS 的逐渐修饰，其内源荧光光谱发生相应变化，结果表明分子表面的2 个Trn残基处于分子的疏水袋中，而另一个Trn残基则埋藏于分子内＿部·荧光淬灭研究表明丙烯酚胺能淬灭87％色氨酸残基的荧光·琉基～修饰实验表明经对氯汞苯甲酸仔CMB）和 N－乙基）l＠丁烯二酚亚胺州EM）修饰后，SFL的凝血活性不发生改变．用NEM作修饰剂测定了SFL的可反应疏基数和总疏基数，结果显示SFL分子中不含琉基，即该蛋白质分子不含半眺氨酸残基．通过帆八双向对角线洲S干AGE，发现 SFL 不含h硫键，进一步印证了SFL中不含半眯氨酸残基的结论．SFL分子中的酪氨酸残基分别经 N－乙酚咪哩（N）和对硝基苯磺酚氟（NB SF）修饰后，其凝血活性不发生改变，说明Tyr残基与SFL的凝血活性无关．用MTT法测定了SFL对HeLa细胞的抑制率，结果表明SFL对HeLa 细胞的生长有显著的抑制作用，随着所加 SFL浓度的增大，细胞抑制率增大．分别采用 Hoechst33342和 PI双染、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术（FCM）的方法，研究了 SFL对 HeLa细胞凋亡的影响，结果证实SFL可诱导HeLa细胞发生凋亡，但是诱导HeLa细胞凋亡的能力不是很强，对浓度与作用时间有明显的依赖关系．当作用60 小时以后，开始出现大量坏死细胞．可见，SFL对HeLa细胞的作用不仅是诱导其发生凋亡，同时也可直接杀灭HeLa细胞．本文对SFL的分离纯化、理化性质、结构与生物学活性进行了研究，对SFL的细胞毒性作了初步的探索，为深入研究SFL的分子结构与生物学活性的关系及其对肿瘤细胞毒性作用的机理打下了基础．

关键词：苦参凝集素圆二色性荧光光谱化学修饰 MTT比色法细胞凋亡

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硒性白内障模型与人老年性白内障比较研究

眼科新进展 2005年第3期25卷 248-250页

作者：范莉琼曹阳岑洁祝肇荣上海第二医科大学附属新华医院眼科上海市200092 上海交通大学生命科学技术学院上海市200000

目的比较人老年性白内障和硒性SD大鼠核性白内障,探讨该白内障模型在运用于对人老年性白内障的研究中的可行性,进而初步研究蛋白质变性过程中二级结构的变化。方法15d龄SD大鼠,经皮下注射2mmol·L-1亚硒酸钠溶液建立白内障模型,通过对... 详细信息

目的比较人老年性白内障和硒性SD大鼠核性白内障,探讨该白内障模型在运用于对人老年性白内障的研究中的可行性,进而初步研究蛋白质变性过程中二级结构的变化。方法15d龄SD大鼠,经皮下注射2mmol·L-1亚硒酸钠溶液建立白内障模型,通过对蛋白含量的测定,蛋白多肽成分的分析以及蛋白圆二色性的检测,对两者进行比较。结果15d龄SD大鼠皮下注射2mmol·L-1亚硒酸钠溶液4d后晶状体出现明显的乳白色核性混浊;与人老年性白内障晶状体相比较,硒性SD大鼠中LMW的蛋白含量亦明显减少;PAGE电泳中出现与人老年性白内障位置相似的电泳条带,SDS-PAGE中的电泳条带差异较大;其CD谱波形与人晶状体蛋白的波形十分相似。结论硒性SD大鼠白内障模型与人老年性白内障在发生过程中产生了相似的变化,该模型可以应用到人老年性白内障的研究中。并初步探讨人老年性白内障发生过程中蛋白变性过程。

关键词：白内障亚硒酸钠圆二色性二级结构

天花粉蛋白小结构域N端TCS182～200同源片段的构象研究

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1995年第3期27卷 305-312页

作者：胡红雨鲁予贤杜雨苍中国科学院上海生物化学研究所

以天花粉蛋白小结构域Ｎ端ＴＣＳ１８２～２００同源片段序列为基础，设计Ｔ１４，Ｔ１８和ＴＤＫ３个模型肽。本文分析了模型肽的肽链柔性和侧链两亲性，预测二级结构形成势，并通过多肽固相合成和圆二色性研究模型肚的溶液二级结构，... 详细信息

以天花粉蛋白小结构域Ｎ端ＴＣＳ１８２～２００同源片段序列为基础，设计Ｔ１４，Ｔ１８和ＴＤＫ３个模型肽。本文分析了模型肽的肽链柔性和侧链两亲性，预测二级结构形成势，并通过多肽固相合成和圆二色性研究模型肚的溶液二级结构，比较理论预测和实测结果。在水溶液中，Ｔ１８为β－折叠，ＴＤＨ含有一定量α－螺旋；而Ｔ１４基本上为无规卷曲，但在碱性条件下有类似螺旋的亚稳结构存在。

关键词：天花粉蛋白同源片段肽设计圆二色性折叠

耐热邻苯二酚2,3-双加氧酶的高表达、纯化及性质

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1998年第6期30卷 49-54页

作者：张炜殷长传郑佐华蔡在龙夏晴毛裕民复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室

来自嗜热脂肪芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）中的邻苯二酚２，３－双加氧酶显示出较高的热稳定性。为了获得足够量的酶以研究其理化性质并分析热稳定性的分子基础，从克隆有编码该蛋白质的ｐｈｅＢ基... 详细信息

来自嗜热脂肪芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）中的邻苯二酚２，３－双加氧酶显示出较高的热稳定性。为了获得足够量的酶以研究其理化性质并分析热稳定性的分子基础，从克隆有编码该蛋白质的ｐｈｅＢ基因的Ｅ．ｃｏｌｉ中获取它的高表达产物，经热变性处理，硫酸铵分级沉淀，ＤＥＡＥ－５２离子交换层析，ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ疏水层析，得到电泳呈单一条带的酶蛋白，得率１６％以上。该酶是由４个分子量为３６．４ｋＤ的相同亚基组成的同源四聚体。反应最适温度６０℃，最适ｐＨ８．０。摩尔消光系数经Ｔｙｒ差光谱法测定为８９（ｍｍｏｌ／Ｌ）－１·ｃｍ－１。以邻苯二酚为底物时米氏常数Ｋｍ＝１．２４×１０－５ｍｏｌ／Ｌ，转换率Ｋｃａｔ＝２４０００ｍｉｎ－１。丙酮为该酶的竞争性抑制剂，抑制常数Ｋｉ＝１６５ｍｍｏｌ／Ｌ。该酶具有较高的热稳定性：６５℃保温１ｈ不影响酶的催化活性，不可逆热变性发生在７０～８０℃之间。对化学变性剂及酸、碱的耐受力同样表明了它在结构上的稳定性。在此基础上进一步研究了不同ｐＨ条件对酶蛋白二级结构的影响。

关键词：邻苯二酚2.3－双加氧酶圆二色性内源荧光光谱

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木瓜蛋白酶的纯化和性质

贵州师范大学学报（自然科学版） 2002年第1期20卷 11-14页

作者：乙引张显强唐金刚罗在柒贵州师范大学生物科学技术系贵州贵阳550001

探讨木瓜蛋白酶的理化性质 ,对番木瓜未成熟果实乳汁进行真空干燥、(NH4 ) 2 SO4 沉淀和SP -Sephadex 5 0柱层析 ,分别得到木瓜蛋白酶的粗酶、精酶和纯化酶 ,可用于不同的工业用途。同时 ,对纯化的木瓜蛋白酶进行了分子量、等电点、巯... 详细信息

探讨木瓜蛋白酶的理化性质 ,对番木瓜未成熟果实乳汁进行真空干燥、(NH4 ) 2 SO4 沉淀和SP -Sephadex 5 0柱层析 ,分别得到木瓜蛋白酶的粗酶、精酶和纯化酶 ,可用于不同的工业用途。同时 ,对纯化的木瓜蛋白酶进行了分子量、等电点、巯基数目、圆二色性、反应动力学以及N -末端和C -末端氨基酸序列等性质的研究。

关键词：木瓜蛋白酶纯化性质番木瓜分子量等电点巯基数目圆二色性