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免疫磁珠分选降低分化体系中胚胎干细胞的比例

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中国生物工程杂志 2009年第3期29卷 63-68页

作者：朱宛宛杜庆安王淑艳徐艳玲关云谦张愚首都医科大学宣武医院细胞治疗中心教育部重点实验室北京100053

研究目的:采用免疫磁珠分选系统(magnetic activated cell sorting,MACS)分离去除小鼠胚胎干细胞(murine embryonic stem cells,mES)向神经细胞分化时培养体系中的ES细胞,即对分化细胞进行纯化,以期减少移植致瘤性。方法:诱导mES细胞向... 详细信息

研究目的:采用免疫磁珠分选系统(magnetic activated cell sorting,MACS)分离去除小鼠胚胎干细胞(murine embryonic stem cells,mES)向神经细胞分化时培养体系中的ES细胞,即对分化细胞进行纯化,以期减少移植致瘤性。方法:诱导mES细胞向神经细胞分化,取分化第四期的细胞,胰酶消化制成单细胞悬液,用mES特异性表面抗原SSEA-1(special stage embryonic antigen-1)单抗标记,间接免疫磁珠分选系统分离去除SSEA-1阳性细胞,流式细胞仪检测分选前后细胞中mES细胞的比例,台盼蓝染色检测分选前后细胞存活率。结果:经MACS分选后的阴性细胞中的SSEA-1阳性率可以由分选前的(7.19±1.36)%下降到(1.34±0.80)%,结果具有显著性差异;分选后的细胞存活率仍为92%左右,与分选前存活率无明显变化。结论用SSEA-1作为表面标志,用MACS方法能有效地去除胚胎干细胞分化细胞中残存的胚胎干细胞,得到高纯度的分化细胞,并且细胞存活率不受影响,为下一步进行移植实验奠定基础。

关键词：免疫磁珠分选胚胎干细胞神经前体细胞 SSEA-1 分化

免疫磁珠分选兔前软骨干细胞及细胞研究平台的建立

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中国矫形外科杂志 2013年第13期21卷 1352-1358,1356-1358页

作者：张瑞王俊芳程力南京医科大学附属无锡市人民医院骨科江苏无锡214023

[目的]研究兔前软骨干细胞PSCs,(precartilagious stem cells)的分离、培养方法及增殖、表型特征,为细胞移植治疗椎间盘退变,提供合适的种子细胞。[方法]取胎兔骨骺周围软骨膜(LaCroix环)中的细胞进行原代培养,然后采用免疫磁珠分离系... 详细信息

[目的]研究兔前软骨干细胞PSCs,(precartilagious stem cells)的分离、培养方法及增殖、表型特征,为细胞移植治疗椎间盘退变,提供合适的种子细胞。[方法]取胎兔骨骺周围软骨膜(LaCroix环)中的细胞进行原代培养,然后采用免疫磁珠分离系统分选纯化PSCs。体外培养,传代,冻存复苏,绘制生长曲线,观察细胞特性。分别采用免疫组化、免疫荧光、RT-PCR等方法鉴定纯化后的PSCs。[结果]免疫磁珠分离可获得纯度较高的兔PSCs,培养后成活率高,细胞状态良好。细胞冻存复苏后,细胞增殖速度、细胞形态及表面标志物无明显变化。免疫组化、免疫荧光、RT-PCR等方法鉴定后,细胞都有明显的PSCs表面特异性标记物的表达。[结论]PSCs存在于LaCroix环中,免疫磁珠分离法得到的PSCs,体外培养条件下,细胞增殖较快,生物学特性稳定。

关键词：前软骨干细胞免疫磁珠分选成纤维细胞生长因子受体-3

免疫磁珠分选联用实时FQ RT-PCR检测前列腺癌患者外周血微转移

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临床检验杂志 2009年第3期27卷 177-179页

作者：沈默陶志华何晶晶吴伟邓哲宪陈伟温州医学院附属第一医院实验诊断中心浙江温州325000 温州医学院附属第一医院泌尿外科浙江温州325000

目的联用免疫磁珠和实时荧光定量RT-PCR(FQ RT-PCR)检测前列腺癌(PCa)患者外周血PSA mRNA,诊断微转移,评价其临床应用价值。方法抽取53例PCa患者、30例良性前列腺增生(BPH)患者及5例健康对照的外周血,分离单个核细胞,与事先已与鼠抗人... 详细信息

目的联用免疫磁珠和实时荧光定量RT-PCR(FQ RT-PCR)检测前列腺癌(PCa)患者外周血PSA mRNA,诊断微转移,评价其临床应用价值。方法抽取53例PCa患者、30例良性前列腺增生(BPH)患者及5例健康对照的外周血,分离单个核细胞,与事先已与鼠抗人前列腺特异膜抗原(PSMA)单抗预孵育的包被人抗鼠IgG抗体的磁珠作用,富集PSMA阳性细胞。实时FQ RT-PCR检测富集细胞的PSA mRNA。结果5例健康对照者均为阴性;30例BPH患者中1例阳性;53例PCa患者中有23例(43.4%)阳性,其中ECT证实的27例骨转移癌患者中,有17例(63%)阳性。结论免疫磁珠法联合实时FQ RT-PCR方法检测PSA mRNA判断PCa患者外周血微转移,有助于转移PCa的早期诊断。

关键词：免疫磁珠分选前列腺癌微转移前列腺特异抗原逆转录-聚合酶链反应

免疫磁珠分选对荧光原位杂交检测多发性骨髓瘤细胞遗传学异常的影响

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中国实验血液学杂志 2011年第1期19卷 54-58页

作者：安刚李承文李倩易树华刘旭平徐燕李增军齐军元邹德慧邱录贵中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所天津300020 天津市肿瘤医院天津医科大学附属肿瘤医院天津300060

本研究旨在明确免疫磁珠浆细胞分选对使用荧光原位杂交(FISH)技术检测多发性骨髓瘤(MM)细胞分子遗传学异常的影响,探索适合我国国情的检测方法。对同一MM患者的标本进行2种方法检测:1种为不经分选,直接进行FISH;另1种为经过CD138免疫磁... 详细信息

本研究旨在明确免疫磁珠浆细胞分选对使用荧光原位杂交(FISH)技术检测多发性骨髓瘤(MM)细胞分子遗传学异常的影响,探索适合我国国情的检测方法。对同一MM患者的标本进行2种方法检测:1种为不经分选,直接进行FISH;另1种为经过CD138免疫磁珠分选(MACS)富集浆细胞后进行FISH检测;比较2种FISH技术对MM遗传学异常检出率并分析其影响因素。探针类型为13q14(RB-1)和14q32(IGH)。结果表明:①利用13q14(RB-1)探针对42例患者同时进行了分选和不分选的的FISH检测显示,经过CD138磁珠分选后25例(56.8%)检测到13q14缺失;不经分选直接进行FISH检测仅9例(21.4%)患者检出13q14缺失,2种标本处理方法的检出率具有统计学差异(p=0.01);②利用14q32(IGH)探针对22例患者同时进行了分选和不分选的FISH检测显示,经过CD138磁珠分选后14例(63.6%)可以检测到14q32重排,不经分选直接进行FISH检测仅7例(31.8%)患者检出14q32重排,2种标本处理方法的检出率具有统计学差异(p=0.035);③不分选FISH的阳性细胞检出率与骨髓涂片和流式细胞仪所检测的浆细胞比例呈明显的正相关。当骨髓涂片细胞中浆细胞比例超过50%,或者流式细胞仪检测浆细胞比例超过10%时,不分选FISH与磁珠分选FISH结果之间没有统计学差异。结论:MACS-FISH显著提高了MM遗传学异常的检出率,避免了假阴性的发生;直接进行FISH检测的检出率低的主要原因是检测标本中浆细胞比例较低;未经分选直接进行13q14(RB-1)和14q32(IGH)探针FISH检测,其阳性细胞率与骨髓涂片、流式细胞仪所检测出的浆细胞比例呈显著正相关,说明随着所检验标本中浆细胞比例的升高,不进行分选直接进行FISH检测的缺点得到一定弥补。当骨髓涂片细胞中浆细胞比例超过50%,或者流式细胞仪检测浆细胞比例超过10%时,2种检测方法之间没有差异。

关键词：多发性骨髓瘤荧光原位杂交免疫磁珠分选

应用CD138免疫磁珠分选结合荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤细胞遗传学异常

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中国实验血液学杂志 2017年第3期25卷 807-812页

作者：高露刘清师岩党辉何琦王峥冯麟李叶王晓燕李娜宋文杰王燕琳孔舒路瑾黄晓军赖悦云北京大学人民医院北京大学血液病研究所造血干细胞移植治疗血液病北京市重点实验室北京100044

目的:比较直接荧光原位杂交技术(D-FISH)和CD-138磁珠分选结合FISH(MACS-FISH)的方法检测多发性骨髓瘤(MM)的细胞遗传学异常。方法:对31例MM患者进行了传统G显带核型分析,并采用探针组合(1q21,D13S319,RB1,IgH,P53)同时进行D-FISH法和MA... 详细信息

目的:比较直接荧光原位杂交技术(D-FISH)和CD-138磁珠分选结合FISH(MACS-FISH)的方法检测多发性骨髓瘤(MM)的细胞遗传学异常。方法:对31例MM患者进行了传统G显带核型分析,并采用探针组合(1q21,D13S319,RB1,IgH,P53)同时进行D-FISH法和MACS-FISH法的检测。对17例IgH重组异常的患者,进一步利用IgH/FGFR3,IgH/MAF,IgH/CCND1 3种探针进行FISH检测。结果:31例患者中5例(16.1%)核型分析具有异常克隆。采用直接FISH法有13例(41.9%)检出异常,而采用CD138磁珠分选浆细胞后有25例(80.6%)检出异常。二者异常检出率有显著差异(P=0.042)。采用D-FISH法,1q21,D13S319,RB1,IgH,P53 5种探针的异常检出率分别为22.6%,25.8%,29%,38.7%和9.7%;而采用MACS-FISH法上述5种探针异常检出率分别为48.4%,45.2%,48.4%,67.7%和16.1%。骨髓浆细胞比例≥20%时,D-FISH与MACS-FISH异常检出率一致;骨髓浆细胞比例磁珠分选后进行FISH检测能显著提高MM细胞遗传学异常的检出率。常规核型分析结合MACS-FISH是MM细胞遗传学异常克隆检测的理想方法,尤其适用于骨髓浆细胞比例小于20%的患者。

关键词：多发性骨髓瘤荧光原位杂交免疫磁珠分选

CD138免疫磁珠分选结合荧光原位杂交技术在多发性骨髓瘤中的应用

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中国实验血液学杂志 2022年第5期30卷 1496-1500页

作者：李清照谭奎刘玉霞黄皇张禹陈海梅陈桢祯朱展望杨碧慧胡国瑜株洲市中心医院血液科湖南株洲412007

目的:比较未经分选直接进行荧光原位杂交(D-FISH)检测和CD138免疫磁珠分选结合荧光原位杂交(MACS-FISH)检测对多发性骨髓瘤(MM)患者细胞遗传学分析的影响。方法:回顾性分析229例初发MM患者的FISH检测结果,一组为140例采用D-FISH法,另一... 详细信息

目的:比较未经分选直接进行荧光原位杂交(D-FISH)检测和CD138免疫磁珠分选结合荧光原位杂交(MACS-FISH)检测对多发性骨髓瘤(MM)患者细胞遗传学分析的影响。方法:回顾性分析229例初发MM患者的FISH检测结果,一组为140例采用D-FISH法,另一组为89例采用MACS-FISH法,设计探针组合为P53、D13S319、RB1、1q21和IgH,比较两组间细胞遗传学检测结果。结果:D-FISH组遗传学异常总检出率为52.9%,MACS-FISH组总检出率为79.8%,两组间的细胞遗传学异常检出率比较存在显著性差异(P=0.020);两组中检出率最高的细胞遗传学异常基因分别为1q21和IgH,检出率最低的为P53;两组间P53阳性细胞率比较无显著性差异,而D13S319、RB1、1q21和IgH阳性细胞率比较均存在显著性差异(P=0.0002,P免疫磁珠分选技术结合FISH能显著提高MM细胞遗传学异常的检出率。

关键词：多发性骨髓瘤免疫磁珠分选荧光原位杂交

Percoll离心结合免疫磁珠分选的方法从外周血分离单核细胞

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免疫学杂志 2021年第5期37卷 454-460页

作者：肖剑梅何韦韦王昊亮万星邓国宏西南大学生命科学学院重庆400715 陆军军医大学西南医院感染病科感染病研究重庆市重点实验室重庆400038

目的探讨采用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选从人外周血富集白细胞层中分离提纯单核细胞的方法。方法采用Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞得到外周血单个核细胞,Percoll密度梯度离心从外周血单个核细胞中富集单核细胞,免疫磁珠阴... 详细信息

目的探讨采用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选从人外周血富集白细胞层中分离提纯单核细胞的方法。方法采用Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞得到外周血单个核细胞,Percoll密度梯度离心从外周血单个核细胞中富集单核细胞,免疫磁珠阴性分选纯化单核细胞。流式细胞术检测细胞CD14和CD16的表达,分析单核细胞分离纯度。M-CSF诱导单核细胞分化为巨噬细胞。IFN-γ诱导巨噬细胞促炎性分化后,流式细胞术分析共刺激分子及HLA-DR的表达,RT-qPCR检测其细胞因子表达。结果Percoll分离结合免疫磁珠阴性分选分离出纯度为93.1%±1.5%的单核细胞。分离出的单核细胞呈煎蛋形,能成功分化为体积大、黏附力强、且呈纺锤状的巨噬细胞。与对照组相比,巨噬细胞在IFN-γ刺激下促炎性分化后,共刺激分子及HLA-DR表达显著上调,TNF-α、IL-6、CXCL10和CXCL11 mRNA表达也均显著上调。结论Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠阴性分选能分离出高纯度且具有功能活性的单核细胞。

关键词： Percoll 免疫磁珠分选单核细胞巨噬细胞分离

人骨关节炎关节软骨间充质祖细胞的免疫磁珠分选和鉴定

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第47期12卷 9239-9242页

作者：刘军戴刚杨柳解放军第三军医大学西南医院关节外科中心重庆市400046

背景:从骨关节炎关节软骨中分离培养软骨细胞,再用免疫磁珠分选技术从关节软骨中分选软骨祖细胞,并进行鉴定,经作者检索目前国内没有报道。目的:实验选取人工膝关节置换患者软骨组织体外培养并利用免疫磁珠法分离出具有干细胞特性的软... 详细信息

背景:从骨关节炎关节软骨中分离培养软骨细胞,再用免疫磁珠分选技术从关节软骨中分选软骨祖细胞,并进行鉴定,经作者检索目前国内没有报道。目的:实验选取人工膝关节置换患者软骨组织体外培养并利用免疫磁珠法分离出具有干细胞特性的软骨间充质祖细胞,拟进一步验证在人软骨组织中含有间充质祖细胞。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2007-06/12在解放军第三军医大学毒理教研室及西南医院烧伤科实验室完成。材料:标本取材于解放军第三军医大学西南医院关节外科中心同期收治的10例人工膝关节置换患者软骨组织(>3cm),患者对治疗及实验均知情同意。方法:统一选用原发性骨关节炎患者关节软骨标本,采用免疫磁珠法分选获得CD105/CD166阳性细胞。并进行成软骨和成脂诱导分化。主要观察指标:①免疫磁珠分选细胞用流式细胞仪和免疫组织化学检测,观察细胞生长特性。②分选细胞成骨和成脂分化后细胞形态和功能的变化。结果:①免疫磁珠分选的关节软骨间充质祖细胞原代和传代细胞均具有干细胞的生长特性。②分选的细胞免疫组织化学检测表达CD105和CD166阳性染色,流式细胞仪检测CD105和CD166阳性细胞比例分别为98.72%和97.5%。④分选细胞经成软骨、成脂诱导后能分化为具有相应细胞表型的细胞。结论:人关节软骨组织中存在具有干细胞特性的软骨间充质祖细胞,利用免疫磁珠技术可成功地将其从关节软骨细胞中分离出来。

关键词：软骨间充质祖细胞免疫磁珠分选成脂分化

CD133免疫磁珠分选脐血内皮祖细胞的培养及鉴定

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中国肿瘤生物治疗杂志 2008年第2期15卷 159-162页

作者：张军霞李瑞赵鹏石磊程子昊尤永平傅震南京医科大学第一附属医院神经外科南京210029

目的:建立具备高效增殖、血管生成与迁移能力的脐血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)分离培养鉴定方法。方法:应用免疫磁珠分选纯化脐血单个核细胞中的CD133+细胞,体外EGM-2MV培养液培养扩增,通过形态学、细胞表面标志及细... 详细信息

目的:建立具备高效增殖、血管生成与迁移能力的脐血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)分离培养鉴定方法。方法:应用免疫磁珠分选纯化脐血单个核细胞中的CD133+细胞,体外EGM-2MV培养液培养扩增,通过形态学、细胞表面标志及细胞功能鉴定EPCs,并与脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)作比较。结果:EPCs分离培养7d左右开始出现小集落,21d左右集落扩大、相互融合,并呈现出典型铺路石样改变;培养14d左右,约90%的细胞免疫荧光Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双阳性,阳性率达90%。CD133和CD34阳性率从86.04%降至2.96%、90.88%降至2.99%,而CD31阳性率从1.12%升至99.88%。在增殖、血管生成与迁移能力上比较,EPCs明显优于HUVECs(P免疫磁珠分选脐血单个核细胞,可培养出具有高效增殖、血管生成与迁移能力的EPCs。

关键词：内皮祖细胞 CD133 免疫磁珠分选增殖血管生成迁移