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大豆幼胚子叶体细胞胚诱导主要影响因素的研究

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作物学报 2002年第6期28卷 852-856页

作者：李海燕朱延明刘北东张彬彬张淑珍东北农业大学生命科学学院植物生物工程研究室黑龙江哈尔滨150030

本研究选用东北地区 4个主栽大豆品种的幼胚子叶 ,探讨了培养基中氮源、生长素和蔗糖 ,p H值和低温预处理对体细胞胚诱导的影响 ;并首次将低温预处理和 p H=7.0的培养基应用到体细胞胚诱导中。结果表明 ,MSB培养基附加 40 mg/L 2 ,4- D... 详细信息

本研究选用东北地区 4个主栽大豆品种的幼胚子叶 ,探讨了培养基中氮源、生长素和蔗糖 ,p H值和低温预处理对体细胞胚诱导的影响 ;并首次将低温预处理和 p H=7.0的培养基应用到体细胞胚诱导中。结果表明 ,MSB培养基附加 40 mg/L 2 ,4- D和 6 %蔗糖 ,其体细胞胚诱导率和诱导效率最高 ,分别为 49%和 2 .94%。于 4℃低温预处理的材料 ,在 p H =7.0的培养基上诱导效率为 4.46 % ,与对照的结果达到 1%的极显著差异。基因型与低温预处理的时间存在相互作用 ,不同基因型低温预处理的最适时间为 1～

关键词：大豆(Glycine max L.) 体细胞胚诱导氮源、生长素和蔗糖 pH 低温预处理

赤霉素、光照及基因型对花生体细胞胚诱导和植株再生的影响

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南方农业学报 2013年第6期44卷 903-908页

作者：蒋菁熊发前唐秀梅钟瑞春贺梁琼李忠韩柱强唐荣华广西农业科学院经济作物研究所广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室南宁530007

【目的】完善花生离体再生繁殖体系,为花生的遗传转化提供技术支持。【方法】以桂花系列花生品种为材料,以胚小叶为外植体,MS+10mg/L2,4-D为体细胞胚诱导基本培养基,MS+3mg/L6-BA+0.8mg/LNAA+(0～15mg/L)GA3为苗诱导基本培养基,研究光... 详细信息

【目的】完善花生离体再生繁殖体系,为花生的遗传转化提供技术支持。【方法】以桂花系列花生品种为材料,以胚小叶为外植体,MS+10mg/L2,4-D为体细胞胚诱导基本培养基,MS+3mg/L6-BA+0.8mg/LNAA+(0～15mg/L)GA3为苗诱导基本培养基,研究光照、赤霉素和基因型对花生体细胞胚诱导和植株再生的影响。【结果】在光暗比14∶10条件下,花生体细胞胚诱导率明显高于全黑暗培养,体细胞胚诱导率增加7.5～37.5个百分点。在不同花生品种中,桂花26体细胞胚诱导率最高,达62.8%,桂花833最低,为21.7%。在成苗培养基中添加5～15mg/LGA3利于提高体细胞胚的成苗率。桂花26和桂花771在5mg/LGA3处理下成苗率最高,分别为42.8%和35.3%;桂花836、桂花1026、桂花833在15mg/LGA3作用下成苗率最高,分别为38.7%、33.3%、26.4%。所有品种与GA3组合中,以桂花26与5mg/LGA3组合成苗率最高,其次是桂花836与15mg/LGA3组合。【结论】适宜的光照条件有利于花生体细胞胚的发生;成苗培养基中添加GA3利于促进体细胞胚诱导成苗;桂花26和桂花836是体细胞胚诱导植株再生较理想的材料。

关键词：花生体细胞胚诱导植株再生赤霉素光照基因型

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影响‘41B’葡萄体细胞胚诱导因素的研究

中外葡萄与葡萄酒 2022年第5期 46-51页

作者：张凯袁昀章常欣玉马靖刘慧陈文婷谭君杨国顺白描湖南农业大学园艺学院湖南长沙410128

为探索影响葡萄体细胞胚发生的各种条件,以具有强再生能力的‘41B’葡萄(Vitis vinifera Chasselas×Vitis berlandieri)胚性细胞为材料,研究了不同物质对葡萄体细胞胚诱导的影响。结果发现,萘氧乙酸(NOA)和2,4-D两种生长素调节剂对细... 详细信息

为探索影响葡萄体细胞胚发生的各种条件,以具有强再生能力的‘41B’葡萄(Vitis vinifera Chasselas×Vitis berlandieri)胚性细胞为材料,研究了不同物质对葡萄体细胞胚诱导的影响。结果发现,萘氧乙酸(NOA)和2,4-D两种生长素调节剂对细胞维持和后续体细胞胚诱导效率具有差异;生长素的去除是诱导体细胞胚发生的关键,而活性炭对去除外源生长素的效果非常明显,同时其非选择性吸附对化合物的有效性也存在重要作用。三种细胞分裂素(ZR、TDZ1、6-BA)在体细胞胚诱导过程中促进了非胚性愈伤组织的形成;高浓度丁酸钠(NaB)对胚性细胞具有杀伤作用;透析膜(DM)、高浓度蔗糖和脱落酸(ABA)对体细胞胚诱导及其萌发具有影响。其中,透析膜的使用会导致细胞脱水,高浓度蔗糖和ABA影响体细胞胚出现的同步性。上述结果可为葡萄体细胞胚诱导相关研究中试验处理的设置提供依据。

关键词： 41B葡萄体细胞胚诱导生长素活性炭

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芍药体细胞胚诱导和愈伤组织再分化研究

芍药体细胞胚诱导和愈伤组织再分化研究

作者：魏冬霞北京林业大学

学位级别：硕士

芍药(Paeonia lactiforaPall.)是中国传统名花,提高繁殖效率是对其进行商品化、产业化生产的基本保障。但在组织培养方面,一直无法建立成熟的离体再生体系,严重制约了产业化发展的进程,也进一步制约了分子生物学的深入开展。本研究通过... 详细信息

芍药(Paeonia lactiforaPall.)是中国传统名花,提高繁殖效率是对其进行商品化、产业化生产的基本保障。但在组织培养方面,一直无法建立成熟的离体再生体系,严重制约了产业化发展的进程,也进一步制约了分子生物学的深入开展。本研究通过体细胞胚直接和间接发生途径、愈伤组织再分化途径进行芍药的植株再生研究;同时,还系统研究了芍药各类花器官的愈伤组织诱导情况,从而丰富可选择外植体种类;并以此为依托,对愈伤组织的褐化问题和更新培养展开探究,以保证愈伤组织的长期有效利用。主要结果如下:1、芍药体细胞胚间接发生研究:高浓度的2,4-D(2.0 mg/L)和连续的暗培养(90天)诱导胚性愈伤组织产生;胚性愈伤组织在1/2MS(Ca2+加倍)+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L的培养基中,见光培养60天,发育至圆球形胚、心形胚阶段。芍药的体细胞胚起源方式包括外起源和内起源两个途径。在外起源方式中包括单个表层细胞的外起源和多个表层下细胞的共同起源。胚性细胞的分裂方式为对称分裂,未发现不对称分裂细胞的存在。2、体细胞胚直接发生初探:6-BA的单独使用或是与2,4-D、NAA、TDZ、KT的联合使用,均不能诱导芍药合子胚直接产生体细胞胚;合子胚成苗培养结果显示,低浓度6-BA和GA3的1/2MS(Ca2+加倍)培养基促进芍药子叶中间抽出真叶;IBA和IAA的联合使用促使芍药小苗抽生出大量不定根;这其中杂种芍药1号(自育,未命名)相较于常规的二倍体品种’粉玉奴’,小苗长势明显旺盛。3、愈伤组织再分化研究:芍药地下芽的未伸展茎段为诱导愈伤组织再分化的理想材料;高浓度的ABA(1.0或1.5mg/L)协同低浓度的NAA、6-BA(低于0.5 mg/L)共同促进愈伤组织转化为预分化状态;及时降低生长调节剂的浓度,促进愈伤组织分化出白色或绿色棒状不定芽;无激素培养基促进白色不定芽生长为明显可见的气生根,绿色棒状不定芽顶端则逐渐出现缺口,分化出两片幼叶;经过低浓度的6-BA和2,4-D共同培养,小苗茎叶分化明显,叶片展开;但在常用IBA和IAA的生根配方中,不能促进小苗抽生不定根。4、花器官愈伤组织诱导研究:在各类花器官类型中,愈伤组织诱导表现排序为子房>胚珠>花瓣>花药>花丝;花瓣的基部相较于其他部位更利于愈伤组织的诱导;子房和胚珠的愈伤组织皆来源于子房内部胎座组织;雄蕊培养中,花药和花丝直接死亡,愈伤组织全来自花粉的有丝分裂。1.0 mg/LNAA+1.0 mg/L2,4-D适用于所有花器官愈伤组织的诱导;单独使用150 mg/L的VC有利于缓解愈伤组织褐化;在1/2MS(Ca2+加倍)培养基中添加低浓度的2,4-D、6-BA、TDZ适用于所有衰弱、老化愈伤组织的更新培养。

关键词：芍药组织培养体细胞胚诱导愈伤组织再分化花器官

秦巴山区宜昌百合的体细胞胚诱导及植株再生体系的研究

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秦巴山区宜昌百合的体细胞胚诱导及植株再生体系的研究

作者：孙安妮西北农林科技大学

学位级别：硕士

秦巴山区及其毗邻地区在我国来说是野生百合资源分布最丰富的地区之一,该地区总共有11种野生百合资源,这其中包括有野生百合资源的变种在内（郭美等2010）。但是最近几年以来,该地区的野生百合资源的种群的生存和繁衍不断的受到来自于... 详细信息

秦巴山区及其毗邻地区在我国来说是野生百合资源分布最丰富的地区之一,该地区总共有11种野生百合资源,这其中包括有野生百合资源的变种在内（郭美等2010）。但是最近几年以来,该地区的野生百合资源的种群的生存和繁衍不断的受到来自于一些商用的购于国外的种球的侵入以及一些外来的植物种群的渗入等方面的威胁,而且这些地区的野生百合资源赖以生存的生态环境也经受到了来自于自然的以及人为的等众多因素的破环,因此,对野生百合种质资源进行保护和保存的工作就显得非常的关键（薛晓娜等2007）。相对于百合的其它的组织培养途径来说,体细胞胚的发生诱导途径是一种具有后代数量多、繁殖速度快、结构较完整、再生率较高等众多的优点的途径（崔凯荣2010）。本实验研究了秦巴山区的野生宜昌百合（Lilium leucanthum）的组织培养体系和体细胞胚胎发生诱导体系,对宜昌百合的体细胞胚胎的发生诱导的各种影响因素做了探究。实验结果如下: 1.野生宜昌百合的不定芽的发生诱导的研究: 野生宜昌百合的鳞片最佳消毒时间:酒精30s和升汞10min的组合,在此消毒灭菌过程中的污染率是33.33%,死亡率为10%。诱导野生宜昌百合不定芽的最佳激素组合是:MS+1.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA,其不定芽诱导率是86.67%。不同部位的鳞片诱导分化不定芽能力由高到低的排列顺序为:中层＞外层＞内层。 2.野生宜昌百合的体细胞胚胎的发生诱导的研究: 三个不同生态型的宜昌百合体细胞胚胎发生的最佳诱导激素浓度组合有所不同。采自于陕西省镇巴县渔渡乡的宜昌百合体细胞胚胎发生的诱导最佳激素浓度组合是:MS+0.5 mg/L TDZ+1.0 mg/L NAA,其诱导体细胞胚胎发生率为91.43%;采自于陕西省留坝县留侯镇的宜昌百合体细胞胚胎发生的诱导最佳激素浓度组合是:MS+0.5mg/L TDZ+2.0mg/L NAA,其诱导体细胞胚胎的发生率为77.14%;采自于甘肃舟曲县立节镇的宜昌百合体细胞胚胎发生的诱导最佳激素浓度组合是:MS+0.5mg/L TDZ+1.5mg/L NAA,其诱导体细胞胚胎的发生率为85.71%。暗培养是诱导野生宜昌百合的体细胞胚胎发生的有利条件。鳞片的不同部位诱导体细胞胚胎发生、分化的能力由高到低排列顺序为:基部＞中部＞上部。60g/L的蔗糖浓度为诱导宜昌百合体细胞胚胎发生的最佳蔗糖浓度,其诱导率最高是90%。0.1g/L活性炭浓度为诱导宜昌百合体细胞胚胎发生的最佳活性炭浓度,其诱导率最高是83.33%。 3.野生宜昌百合快繁与再生体系建立的最佳途径的研究: 野生宜昌百合的一个接种鳞片通过不定芽诱导方式平均生成4.3个小鳞茎,一个接种鳞片通过体细胞胚诱导方式平均生成11.5个小鳞茎。宜昌百合的体细胞胚诱导方式是宜昌百合快繁和再生体系建立的更好的途径。 4.野生宜昌百合试管苗的膨大、生根以及移栽的研究: 影响野生宜昌百合试管苗鳞茎膨大的最佳培养基是:2MS+0.2mg/L NAA,增大倍数最大为2.51倍。野生宜昌百合生根的最佳培养基为:MS+0.2mg/L NAA+0.1g/L AC,最长根达到35.74cm。与此同时,本研究结果表明暗培养也是影响野生宜昌百合试管苗鳞茎膨大及生根的有利条件。野生宜昌百合试管苗的最佳炼苗时间为8天,移栽后成活率最高为83%;1/2MS营养液喷施移栽植株的叶面能达到最佳的效果,成活率达到80%;鳞茎直径大于1cm时移栽苗成活率最高,达到了88%;试管苗的根长在1-2cm时,移栽苗的成活率最高为77%。

关键词：秦巴山区宜昌百合体细胞胚诱导再生

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大花六道木体细胞胚诱导的研究

大花六道木体细胞胚诱导的研究

作者：孙倩婷南京林业大学

学位级别：硕士

本论文首次以大花六道木(Abelia×grandiflora)幼嫩叶片和茎段为外植体,对其体细胞胚诱导过程中的相关问题进行了研究,并对诱导过程进行了细胞学观察和生理指标的测定,为大花六道木高效体胚发生系统的建立和相关机理的探索奠定了基础。... 详细信息

本论文首次以大花六道木(Abelia×grandiflora)幼嫩叶片和茎段为外植体,对其体细胞胚诱导过程中的相关问题进行了研究,并对诱导过程进行了细胞学观察和生理指标的测定,为大花六道木高效体胚发生系统的建立和相关机理的探索奠定了基础。主要试验结果如下:1.比较了三种大花六道木的愈伤诱导率。其中‘法兰西’较‘爱德华’和‘矮美人’更容易诱导愈伤组织,但三者的差异不显著。细胞学研究结果也表明,三个品种的胚性细胞结构有很大的相似性。2.幼嫩叶片是大花六道木体胚诱导的最佳外植体。3.大花六道木叶片和茎段愈伤组织诱导的最佳培养基分别为MS+3.5mg/L 2,4-D+0.2 mg/L NAA+1.0mg/L KT+0.05mg/L TDZ和MS+1.5mg/L 2,4-D+0.5mg/L NAA+0.5mg/L KT+0.1mg/L TDZ;叶片和茎段胚性愈伤组织增殖的最佳培养基分别为MS+1.0mg/L 6-BA+1.0mg/L KT+0.1mg/L NAA和MS+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L KT+0.1mg/L NAA,均附加100mg/L肌醇,200mg/L水解酪蛋白和15g/L蔗糖,pH值5.8,25℃下暗培养各30d。4.2,4-D在诱导愈伤阶段是很有效的生长素,NAA诱导愈伤的效果不及2,4-D。细胞分裂素在愈伤诱导时作用不明显,但在增殖和体胚诱导中不可或缺,6-BA浓度应控制在1.0mg/L,可避免培养物褐化,KT和TDZ对愈伤诱导和增殖的影响不明显。ABA可以抑制畸形胚的生长,大花六道木适宜的ABA浓度范围为0.5～1.0 mg/L。5.胚性愈伤组织转入无激素的液体MS培养基悬浮培养后可以得到大量的根状物,转入MS+1.0mg/L 6-BA+30g/L蔗糖的液体培养基悬浮培养后能够诱导出无根端的芽状物,且无褐化现象。6.大花六道木不同阶段培养物的切片观察表明,胚性愈伤的细胞体积小、排列紧密、细胞核大,非胚性愈伤的细胞体积较大、排列疏松、细胞核小。体胚发生大多是由内起源的胚性细胞开始,经历了鸟巢状多细胞原胚、球形胚,心形胚和鱼雷胚的发育阶段。7.大花六道木球形胚时期的SOD活性和可溶性蛋白质含量均达到了顶峰,为体胚分化和进一步发育提供了前提和物质基础。可溶性糖含量的变化与体胚发育时期的转折密切相关。胚性愈伤和心形胚时期的可溶性糖的累积为体胚的分化和发育提供了能量保证。

关键词：大花六道木(Abelia×grandiflora) 体细胞胚诱导细胞形态学生理特征

香蕉愈伤组织及体细胞胚诱导过程中的组织学观察

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果树学报 2007年第6期24卷 788-791页

作者：冯新富谢丽君陈厚彬李华平徐春香华南农业大学热带亚热带果树研究室华南农业大学植物病毒研究室

将巴西蕉(Musa AAA Cavendish)的未成熟雄花接种在MI培养基(MS+4mg/L2,4-D+1mg/L生物素+1mg/LIAA+1mg/LNAA+100mg/L谷胺酰氨+100mg/L麦芽抽提物+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂粉)上进行愈伤组织诱导,对愈伤组织诱导过程中的各个阶段进行组织学观察。结果表明,未成熟雄花外植体脱分化的起始部位是表皮下层的维管组织细胞,启动时间为外植体接种后4～5周;外植体接种8周后获得分生小球体;胚性愈伤组织形成于分生小球体的表面,主要由具有细胞核和核仁比大、细胞质丰富的胚性细胞组成。随着培养时间的延长,胚性愈伤组织的表面形成一些由多细胞组成的体细胞原胚,有时还可观察到二分体的存在,这表明香蕉体细胞胚可能是单细胞起源的。

关键词：香蕉愈伤组织体细胞胚诱导组织学

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黑莓体细胞胚诱导中的细胞生理特性

中国南方果树 2018年第1期47卷 114-118页

作者：夏凯丽刘婷杨静慧刘艳军梁发辉史滟滪天津农学院园艺园林学院

为了解黑莓不同类型愈伤组织与胚前体组织的生理特性差异,为体细胞胚诱导提供依据,本文通过对黑莓均质、松散型胚性愈伤组织进行诱导研究,比较了黑莓3种不同类型的愈伤组织与胚前体组织生理特性方面的差异。结果显示,球形胚前体组织的... 详细信息

为了解黑莓不同类型愈伤组织与胚前体组织的生理特性差异,为体细胞胚诱导提供依据,本文通过对黑莓均质、松散型胚性愈伤组织进行诱导研究,比较了黑莓3种不同类型的愈伤组织与胚前体组织生理特性方面的差异。结果显示,球形胚前体组织的可溶性糖含量最高,其余3种愈伤组织间无差异;球形胚和硬块型组织脯氨酸含量最高,其次是稀软型,松散型的最低;硬块型的丙二醛含量最高,其他3种间无差异;稀软型的SOD酶活性最高,其次是松散型和硬块型,球形胚的最低;稀软型的POD酶活性最高,其他3种间无差异。隶属函数综合分析认为,加拿大黑莓的松散型愈伤组织的生理特性最接近于球形胚前体组织,因此松散型愈伤组织更适于体细胞胚的诱导。

关键词：黑莓愈伤组织生理特性体细胞胚诱导

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杂交构树体细胞胚诱导及人工种子的制备

杂交构树体细胞胚诱导及人工种子的制备

作者：李毅大连工业大学

学位级别：硕士

构树是桑科构树属落叶乔木,它是优质的造纸原料和降糖的药用植物,还可以用于饲料以及园艺绿化等方面。目前,构树的主要繁殖方式是用种子繁殖或扦插繁殖。由于构树种子的种壳较坚硬吸水困难,不易萌发;扦插方式占用土地、效率低、成本高... 详细信息

构树是桑科构树属落叶乔木,它是优质的造纸原料和降糖的药用植物,还可以用于饲料以及园艺绿化等方面。目前,构树的主要繁殖方式是用种子繁殖或扦插繁殖。由于构树种子的种壳较坚硬吸水困难,不易萌发;扦插方式占用土地、效率低、成本高以及受季节限制等。因此,通过植物器官组织诱导愈伤中获得的体细胞胚规模化培养,然后获得人工种子,对于规模化繁育构树种苗具有重要的意义。本研究的材料是通过航天育种途径获得的优质杂交构树树种,通过愈伤组织、胚性细胞、体细胞胚诱导及悬浮培养等,获得高活性的体细胞胚,并制作构树人工种子。主要研究了激素等因素对体细胞胚诱导的影响,主要结果如下:1.构树幼嫩叶片在只含2,4-D 0.5mg/L的MS培养基中7d左右出现愈伤且诱导率最高,诱导率可达93%。构树幼嫩叶片在同时含有2,4-D和6-BA两种激素的MS培养基中很难出现愈伤,只有叶片面积的增大,而且8d左右时褐化作用明显;2.愈伤组织继代时使用2,4-D 0.2mg/L的MS培养基,愈伤生长旺盛,松散,淡黄色。在光照下培养12h/d,可以有效避免愈伤木质化的产生。低于这个浓度很容易出现根的分化,伴有褐化现象;3.建立悬浮细胞培养体系,测定出在使用6-BA 1.5mg/L,N AA 0.5mg/L的MS液体培养基时,诱导率最高,生长势最好;4.杂交构树愈伤组织在激素为6-BA 2.0mg/L,NAA 1.0mg/L的MS培养基中,体细胞胚的胚胎发生效率最高,可达到17.9%;5.在海藻酸钠中加入MS培养基和2.0mg/L 6-BA和20g/L蔗糖制备成的人工种子萌发率最高,可达33.3%。

关键词：构树体细胞胚诱导细胞悬浮培养体系人工种子